肺癌患者血清单核细胞趋化蛋白-1含量和活性的变化及其意义

目的 探讨肺癌患者血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量和单核细胞趋化活性(MCA)的变化规律.方法 采用ELISA测定肺癌组和健康对照组血清MCP-1的含量,并以Boyden小室趋化实验测定两组血清MCA.结果 肺癌组血清MCP-1含量明显高于健康对照组(P<0.01),但肺癌组血清MCA却明显低于健康对照组(P<0.01).肺癌组血清MCP-1含量与MCA的相关系数(r=0.39)明显低于健康对照组(r=0.87).结论 肺癌患者存在单核细胞趋化活性不足.     

S100A8启动子的克隆及转录活性的检测

目的 构建小鼠S100 A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖（LPS）、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性。方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达。结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础。     

S100A8启动子的克隆及转录活性检测

目的 构建小鼠S100A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性.方法 采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达.结果 正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加.结论 小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础.     

组蛋白变异体macroH2A1真核表达载体构建及其细胞内定位的研究

目的构建带有血凝素(HA)标签的小鼠组蛋白变异体macroH2A1(mH2A1)的真核表达载体,并观察其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况。方法提取内毒素休克的BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应获得内毒素休克小鼠肝脏组织的cDNA,以cDNA为模板使用PCR方法扩增得到mH2A1编码序列,并将其酶切后连接至带有HA标记的载体pcDNA3-HA上;对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。随后将重组质粒瞬时转染293T细胞,利用荧光显微镜观察。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明pcDNA3-mH2A1-HA真核表达质粒构建正确;经转染实验发现,该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论 mH2A1真核表达载体pcDNA3-mH2A1-HA的成功构建及明确其在哺乳动物细胞中的具体核定位,为进一步研究mH2A1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。     

组蛋白变异体macroH2A1真核表达载体构建及其细胞内定位的研究

目的构建带有血凝素（HA）标签的小鼠组蛋白变异体macroH2A1（mH2A1）的真核表达载体,并观察其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况。方法提取内毒素休克的BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应获得内毒素休克小鼠肝脏组织的cDNA,以cDNA为模板使用PCR方法扩增得到mH2A1编码序列,并将其酶切后连接至带有HA标记的载体pcDNA3-HA上;对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。随后将重组质粒瞬时转染293T细胞,利用荧光显微镜观察。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明pcDNA3-mH2A1-HA真核表达质粒构建正确;经转染实验发现,该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论 mH2A1真核表达载体pcDNA3-mH2A1-HA的成功构建及明确其在哺乳动物细胞中的具体核定位,为进一步研究mH2A1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。     

基于微信公众平台的组织胚胎学教学模式设计和应用初探

探讨利用微信公众平台进行辅助教学的可行性,将课件、重点难点解析、知识点总结等上传微信公众平台,实现传统课堂教学与线上网络教学有机结合,以提高学生学习兴趣和教学质量。     

生长分化因子5基因原核表达质粒构建和表达及其体内成软骨的诱导活性

背景:生长分化因子5在软骨、四肢和关节的发育、形成中起着重要作用,是目前最常应用的研究早期关节发育的标志分子.克隆人生长分化因子5基因可为软骨、关节缺损的修复奠定研究基础.目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子5成熟肽,探讨重组蛋白的体内诱导活性.设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2006-01,06在南方医科大学分析测试中心完成.材料:人流产胚胎膝关节区软骨组织取自解放军广州军区总医院妇产科,标本获取征得家属同意.10只KM小鼠购自南方医科大学实验动物中心,雌雄各半,体质量18-22 g,6～8周龄.方法:通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胚胎软骨组织克隆生长分化因子5完整成熟肽基因,将所得基因片段插入pET22b(+)载体构建重组原核表达载体pET22b(+)-GDF5,重组质粒转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达.凝胶介质镍离子螯合法纯化目的蛋白,植入小鼠后肢股部肌袋内常规苏木精-伊红染色进行生物学活性鉴定.主要观察指标:琼脂糖凝胶电泳观察目的基因表达条带,测序观察目的基因序列,SDD-PAGE电泳观察目的蛋白表达条带,组织学观察生长分化因子5诱导活性.结果:RT-PCR产物长约350 bp,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350 bp的片段,测序表明与Genbank中的序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示重组子转化菌在相对分子质量14 100位置处出现特异外源蛋白表达带,和成熟肽相对分子质量13 600接近.纯化后体内植入实验组织切片显示,大量的间充质干细胞聚集和增生,并分化成为成软骨细胞,分泌软骨基质并埋入其中变为软骨细胞.结论:通过RT-PCR法从人胚胎软骨组织中成功克隆出人生长分化因子5完整成熟肽基因,可在大肠杆菌中得到高效表达,经纯化后在动物体内具有成软骨诱导活性.     

蝎毒抗癌多肽对小鼠骨髓抑制的造血和免疫功能恢复的影响

目的：研究蝎毒抗癌多肽（APⅢ1）对小鼠化疗后致骨髓抑制造血和免疫细胞恢复的影响。方法：应用造血祖细胞培养、流式细胞术等方法，观察APⅢ1对环磷酰胺（CTX）化疗后第14天小鼠骨髓粒单系集落形成单位（CFU—GM）以及CD34、CD117（c—kit）、CD3、CD19等抗原阳性细胞数量的影响，并进行骨髓有核细胞计数和观察小鼠的生存状况。结果：与化疗模型组相比，APⅢ1治疗组的骨髓有核细胞数、CFU—GM集落数、CD34、CD117（c-kit）、CD3、CD19等抗原阳性细胞数量均显著升高，小鼠生存状况有所改善。结论：蝎毒抗癌多肽（APⅢ1）能促进小鼠化疗后致骨髓抑制造血和免疫细胞数量的恢复。     

FDA最新药物

FDA批准治疗慢性乙型肝炎的恩替卡韦上市 3月29日，FDA批准百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)的恩替卡韦(entecavir，BARACLUDE)上市。恩替卡韦主要用于治疗成人病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙肝感染。     

苹果酸舒尼替尼对人结肠癌细胞株LoVo的增殖抑制作用

目的 探讨苹果酸舒尼替尼体外对结肠癌LoVo细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 利用四亚基噻唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法观察苹果酸舒尼替尼对结肠癌LoVo细胞生长抑制作用.应用流式细胞仪、电子显微镜检测苹果酸舒尼替尼诱导LoVo细胞的凋亡作用.结果 MTT结果显示苹果酸舒尼替尼在(2.5～20 μM)的浓度范围内对结肠癌LoVo细胞的生长具有显著的抑制作用.生长曲线结果显示各个浓度的药物对LoVo细胞的抑制作用呈时间依赖性.流式细胞仪可以观察到细胞周期阻滞在G0/G1期.透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现.结论 在一定的浓度范围内,苹果酸舒尼替尼可以抑制LoVo细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应.其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关.