微生物学检验开放性实践教学模式的实施

微生物学检验开放性实践教学模式实施后,可以增强学生的综合能力,增强教师的责任意识,加大实验室开放力度,是实验教学改革的成功尝试,值得进一步探索和推广。     

高职高专口腔专业病原生物学和免疫学教学改革的探索与实践

病原生物学和免疫学是联系基础医学与临床医学的纽带，根据本学科内容繁杂、抽象、理论多的特点，在教学中对教学内容、教学方法等进行改革，进一步提高教学质量。     

乳铁蛋白负向调控TLR2激动剂诱导的人肺上皮细胞细胞因子分泌

目的观察乳铁蛋白对Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3CSK4刺激人肺上皮细胞分泌促炎细胞因子的影响,并探索其潜在的机制。方法体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292,采用100 ng/ml Pam3CK4联合100、200和400μg/ml乳铁蛋白孵育细胞。ELISA检测乳铁蛋白处理前后培养上清TNF-α和IL-8分泌的变化;实时定量PCR和ELISA检测短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)蛋白和m RNA表达的影响。提取细胞核蛋白,ELISA测定乳铁蛋白处理前后NF-κB活性的变化,采用Western blot检测IκB的表达;并用siRNA沉默NCI-H292细胞SPLUNC1,观察其对TNF-α和IL-8分泌的影响。结果 100、200和400μg/ml乳铁蛋白预处理肺上皮细胞后,可下调Pam3CK4诱导分泌TNF-α和IL-8。实时定量PCR结果显示,100、200和400μg/ml乳铁蛋白处理后,SPLUNC1 mRNA水平明显增高,并呈一定的剂量依赖性,ELISA也得到了类似的结果。采用转录和翻译抑制剂放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理,可显著降低乳铁蛋白诱导SPLUNC1的表达。此外,乳铁蛋白处理可抑制Pam3CK4激活NF-κB,主要表现为NF-κB的DNA结合活性降低、IκB降解减少。siRNA沉默SPLUNC1表达后,可明显削弱乳铁蛋白对TNF-α和IL-8的抑制作用。结论乳铁蛋白对Pam3CK4诱导的细胞因子分泌具有抑制作用,其机制与上调SPLUNC1表达、抑制NF-κB的活性有关。     

生物化学实验立体化教学模式的探索与实践

生物化学是一门以实验为基础的学科，实验在促进生物化学自身发展的同时，也对整个生命科学及医学的发展做出重要贡献。实验教学在加深理论知识的理解、加强科学思维训练等方面具有无可替代的作用；对培养动手能力、启发思维、培养创新思维能力亦具有重要意义。因此，研究和改革生物化学实验教学，不断提高其教学质量，建立一种优良且能跟上学科发展步伐的教学方法和教学模式非常重要。本校将《生物化学实验》作为单独的一门课程，并对传统的教学模式进行改革，创建一个立体化的教学模式，取得了较好的教学效果。     

如何做好医学免疫学实验准备工作

医学免疫学作为生命科学的前沿学科,与其他医学科学一样属实验性科学,免疫学实验课在整个免疫学教学中占有很重要的地位。它不仅具有巩固和加强学生对课堂讲授内容的理解与体会的作用,而且能帮助学生及时学会和掌握本学科的基本操作技能,并有助于培养学生分析问题、解决问题的能力,为今后从事免疫学相关的日常工作和科研工作打好基础。     

肺炎克雷伯菌FimA的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的表达及纯化肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)菌毛FimA蛋白并制备多克隆抗体。方法在Clustal Omega网站上比对不同细菌FimA蛋白的同源性。设计特异引物,PCR扩增肺炎克雷伯菌FimA基因,双酶切后将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-FimA。将pET28a-FimA转化表达菌BL21 star(DE3)后培养,使用IPTG诱导FimA蛋白表达。使用IEDG在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,然后用层析纯化的重组FimA蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA检测IgG、IgG1、IgG2a和IgA.结果肺炎克雷伯菌的FimA与其他FimA蛋白同源性较低,为23.6%?30.6%。构建的重组质粒PET28a-FimA在大肠埃希菌中能表达21.6×10^3的重组FimA蛋白,经亲和层析后得到单一电泳条带的高纯度目的蛋白。用FimA蛋白免疫小鼠,获得高滴度的IgG和IgA,且IgG2a的A450值高于IgG1.结论成功构建了表达质粒pET28a-FimA,获得高纯度的重组蛋白FimA。FimA具有免疫原性,用该蛋白免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体。     

浅谈生物化学实验室教学工作的体会

随着现代生物化学技术的迅速发展,临床生物化学分析技术不断更新,生物化学实验便成了医学院校必修的一门独立的基础实验技术课程,其不仅能帮助学生巩固理论知识,而且能帮助学生掌握生物化学技术的基本操作技能。