全肠外营养诱导线粒体应激介导的肝细胞凋亡的研究

目的探讨全肠外营养诱导新生乳猪线粒体应激介导的肝细胞凋亡的作用机制。方法以肠内营养乳猪作为对照，建立全肠外营养新生乳猪实验动物模型，喂养7d后获取肝脏组织，分离原代肝细胞，部分肝组织应用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡条带，通过凋亡蛋白活性测定、免疫组织化学、Western blot印迹法等检测全肠外营养诱导肝细胞发生凋亡的蛋白表达。结果全肠外营养组乳猪肝细胞活率为（49±21）％，明显低于肠内营养组的（88±14）％（P〈0．05）。全肠外营养乳猪肝组织DNA电泳呈现典型梯形凋亡条带，细胞凋亡ELISA检测发现细胞凋亡定量高达对照组的2．6倍，半胱天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3活性也明显升高，与肠内营养相比增高9．9倍，但ATP酶活性下降了24％。Westernblot显示全肠外营养组肝组织中相关凋亡蛋白酶PARP、caspase-9和-7蛋白酶原被活化，Bcl-2蛋白表达量下调，Bax蛋白量表达上调；同时线粒体内细胞色素C释放至胞浆内，使胞浆内细胞色素C表达水平升高。免疫组织化学也显示全肠外营养组Bax表达上调。结论全肠外营养可以损伤肝组织，并通过线粒体应激信号传导通路诱导肝细胞凋亡。     

Long term treatment of lamivudine in chronic hepatitis B patients with severe liver fibrosis——ten-year follow-up outcomes of NUCB 4006 trial

Objective To evaluate the clinical and histological outcomes in a cohort of chronic hepatitis B (CHB) patients who had histologically confirmed severe liver fibrosis and received lamivudine (LAM) therapy for up to 10 years. Methods Thirty-nine CHB patients with severe liver fibrosis (Ishak fibrosis score≥4) were treated with LAM for up to 10 years. Disease progression liver histological improvement, virological and biochemical responses were evaluated during follow-up. Data were analyzed using paired t test, Fisher exact test and Willcoxon test. Results Twenty-eight patients completed the 10-year follow-up. There were 5 (17.9% ) patients with disease progression.At the end of follow up, 16 patients received a second liver biopsy, which showed significant improvement of histological activity index (1.1 ± 1.4 vs 7. 1 ± 3.2, t =- 0.82, P＜0.01 ) and Ishak fibrosis score (3.6±2.2 vs 5.3±0.7, t= -2.89, P＜0.05) compared to baseline. There were 3 cases with Ishak fibrosis score improved from F5 to F0. Among 27 patients, 3(11% ) cases achieved hepatitis B surface antigen (HBsAg) loss and 2 (7 % ) achieved HBsAg seroconversion. At the end of follow-up, 19 out of 23 (83% ) hepatitis B e antigen (HBeAg) positive patients obtained HBeAg loss and 9 (39 % ) obtained HBeAg seroconversion. During LAM treatment, 11 patients experienced virological breakthrough or detected documented LAM-related resistance mutation. The viral loads of all patients were below 1 ×103 copy/mL at the end of follow-up after rescued by add-on or switch to another nucleotide analog.Conclusions Long-term LAM therapy can delay the disease progression in CHB patients with severe liver fibrosis, increase HBsAg and HBeAg loss rates, sustain suppression of HBV replication at a low level and even totally reverse the liver fibrosis in some patients. The effect of LAM resistance mutation on disease outcomes would be reduced by rescue therapy.     

葡萄冻干粉在线粒体应激介导肝细胞凋亡中的作用

目的 了解葡萄冻干粉（FDG）对线粒体应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制。方法用牛磺酸脱氧胆酸（TDCA）诱导Huh7细胞,建立线粒体应激凋亡模型,用不同剂量FDG进行干预。通过MTT、DNA ladder、Western blot、细胞凋亡率检测等方法,了解FDG对Huh7细胞生长、对TDCA诱导的Huh7细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白表达的影响。结果FDG（2μg／ml、20μg／ml、200μg／ml、4（10μg／ml和800μg／ml）与Huh7细胞共孵育,FDG可提高Huh7细胞的活力,以FDG400μg／ml时细胞活力最高。用400pMTDCA诱导Huh7细胞,随着诱导时间延长细胞活力下降、凋亡率增加,出现凋亡条带;Caspase-9和7蛋白酶原被活化,PCNA表达下调。用FDG干预TDCA诱导Huh7细胞48h后发现,FDG明显提高Huh7细胞活力、使细胞凋亡减少、凋亡信号蛋白的表达减少。结论TDCA能触发Huh7细胞线粒体氧化应激凋亡,而FDG能促进细胞生长,减轻肝细胞损伤,阻断线粒体氧化应激介导的肝细胞凋亡。     

HBsAg阴性伴抗-HBc阳性淋巴瘤患者化疗后乙型肝炎病毒再激活一例

患者,男性,50岁,已婚,公务员,江苏江都人,2006年3月起无明显诱因出现发热,体温38℃～39℃,伴咽痛,无盗汗、咳嗽、畏寒、寒战、腹痛和腹泻.既往每年体检均示HBAg阴性,抗-HBc阳性,肝功能正常.     

小鼠半胱天冬酶-12特异性小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的 构建小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）基因特异性小干扰RNA（siRNA）表达载体并检测其表达。方法 参照siRNA模板设计原则，设计并合成3对针对caspase-12不同位点的siRNA，分别在脂质体介导下转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6，24h收集细胞；RT-PCR分析不同位点siRNA对靶基因mRNA表达的抑制，筛选出抑制效率最高的位点；将此位点siRNA模板序列插入质粒pRNAT-H1．1Neo中，PCR分析及基因测序进行鉴定；构建成功的重组质粒转染Hepal-6细胞48h和72h后，实时荧光定量PCR分析caspase-12 mRNA表达；Western印迹检测Caspase-12的表达。数据行t检验。结果 RT-PCR分析表明，第-对siRNA（siRNA＊1）对caspase-12基因表达的抑制效率最高；重组质粒pRNAT-H1．1Neo-caspasel2（pRNAT-caspl2）经PCR分析及测序表明，siRNA＊1模板序列成功插入预计位点，且序列正确；pRNAT-caspl2转染Hepal-6细胞48h和72h后，与空质粒对照组相比，caspase-12 mRNA水平分别下降72．5％和59．5％（P〈0．05）；pRNAT-caspl2转染后，caspase-12酶原表达量在24、48和72h分别下调17．1％、37．3％和60．1％，48h和72h的抑制率比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 成功构建小鼠caspase-12特异性siRNA真核表达载体，它对小鼠肝癌细胞caspase-12基因的表达具有显著和特异的抑制作用。     

肝豆状核变性的临床特征及其分子诊断

目的:观察肝豆状核变性患者的多样性临床表现,探讨建立分子诊断的方法。方法:采集62例肝豆状核变性患者的临床资料,包括临床表现、实验室检查和其他特征等,进行统计分析。应用序列分析方法检测ATP7B基因突变,并对p.Arg778Leu基因突变的基因型与表型的相关性进行分析。结果:27例(43.5%)患者诊断时年龄<8岁,且均缺乏典型的临床表现,仅有2例出现K-F环,而59.3%的患者仅表现为肝功能异常。与表现为肝脏疾病的患者相比,以神经系统为表现的患者诊断时年龄较大(P     

恩替卡韦治疗核苷(酸)类初治或经治慢性乙型肝炎患者7年临床疗效分析

目的了解恩替卡韦(ETV)对核苷(酸)类药物初治和经治的慢性乙型肝炎患者长期治疗的疗效、安全性和耐药性。方法回顾性分析本院感染科门诊随访恩替卡韦单药治疗的87例慢性乙型肝炎患者,观察肝功能、HBV DNA定量、HBsAg定量、HBeAg阴转、耐药发生率等指标。结果 87例患者中,32例(37%)为恩替卡韦初治患者,55例(63%)为拉米夫定(LAM)或阿德福韦酯(ADV)经治换用恩替卡韦的患者。恩替卡韦初治组,阿德福韦酯经治组和拉米夫定经治组,7年累计病毒学应答率分别为100%(32/32),97%(30/31)和62%(13/21);7年累计耐药率分别为3%(1/32),3%(1/31)和38%(8/21);7年累计HBeAg阴转率为47%(9/19),45%(13/29)和20%(3/15);其中阿德福韦酯经治组有两例患者达到HBsAg清除。在所有的患者中,HBeAg阴性患者较HBeAg阳性患者早期病毒学应答率更高(P=0.012),7年累计病毒学应答率分别为91%(21/23)和89%(57/64)。在恩替卡韦初治患者中,HBeAg阴性患者同样比HBeAg阳性患者早期病毒学应答率高(P=0.001),累计病毒学应答率分别为100%(13/13)和100%(19/19)。3组病毒学应答率比较,恩替卡韦初治患者早期病毒学应答率高于阿德福韦酯经治患者和拉米夫定经治患者(P0.001)。结论恩替卡韦初治患者长期疗效佳,耐药低,安全性好,阿德福韦酯经治患者序贯恩替卡韦仍能取得较好的长期疗效,但是对于拉米夫定经治患者来说,选用恩替卡韦长期治疗存在较高的耐药风险。     

慢性乙型肝炎病毒感染的处理

最近美国著名肝病专家Keeffe教授和Schiff等其他一些教授就慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染在临床处理中的检测方法、治疗对象、治疗时机、疗程和方法、治疗过程中如何监测病人等一系列问题提出了指导性建议,简要介绍如下。     

慢性乙型肝炎病毒感染的处理

最近美国著名肝病专家Keeffe教授和Schiff等其他一些教授就慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染在临床处理中的检测方法、治疗对象、治疗时机、疗程和方法、治疗过程中如何监测病人等一系列问题提出了指导性建议,简要介绍如下.……     

胸腺肽α1对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭疗效分析

目的观察胸腺肽α1对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)疗效及短期预后的影响。方法回顾性分析2012年1月至2018年10月于上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科住院的HBV-ACLF患者210例,在内科综合治疗的基础上加用胸腺肽α1治疗124例,观察组86例,动态比较两组患者临床特征及及转归。结果治疗组与观察组在治疗前及治疗后1、2、4、12周各实验室指标及MELD评分无统计学差异(P0.05)。治疗组与观察组相比,28 d的死亡率降低(17.7%/32.6%,P0.05)。137例合并感染患者中,治疗组与观察组相比,临床特征及治疗后1、2、4、12周各实验室指标及MELD评分无统计学差异(P0.05),降钙素原水平治疗组相比观察组显著下降(2周内)(P0.05);在治疗结束时有效率显著升高(35.7%/20.8%,P0.05);治疗组28 d的病死率相比观察组显著降低(23.8%/43.4%)(P0.05)。结论胸腺肽α1可以降低HBV-ACLF短期死亡率,提高合并感染患者早期感染控制率及住院期间总的有效率。