培养大鼠海马胆囊收缩素阳性神经元的电生理学特性

目的 探索海马内胆囊收缩素(CCK) 阳性（CCK⁺ ）神经元的电生理学特性。方法 用整合有CCK启动子-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒对培养海马CCK⁺神经元进行标记,应用全细胞膜片钳技术对标记CCK⁺神经元的电生理学特性进行研究。结果 CCK⁺神经元的胞体长径为(22.85±0.77)μm,短径为(16.21±0.42)μm (n=20),静息电位 (RMP)为(-55.90±1.30)mV,膜电容 (Cm)为(45.77±2.06)pF,膜阻抗 (Rm)为(711.00±46.69)MΩ; CCK+神经元500 ms内100 pA去极化电流诱发动作电位的发生频率为(26.17±3.41)Hz (n=12); CCK⁺神经元的自发抑制性突触后电流的发生频率［(5.26±0.71)Hz, n=7］显著高于自发兴奋性突触后电流的发生频率［(3.24±0.62)Hz, n=6］。 结论 CCK⁺神经元的相关电生理学特征可能与其在中枢神经系统内重要的调节功能相关。     

低氧对苯肾上腺素诱导的豚鼠肠系膜动脉收缩反应的影响

目的:探讨不同时段低氧对苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的豚鼠肠系膜动脉收缩反应的影响及其作用机制。方法:应用压力肌动图技术,在急性分离的豚鼠肠系膜动脉2级血管(直径300~400μm)上,观察20、40和60 min低氧(95%CO2和5%O2混合)对内皮非依赖的血管收缩剂PE收缩血管直径的影响。结果:PE(0.1~100μmol/L)可以浓度依赖性收缩豚鼠肠系膜动脉。低氧引起生理盐溶液p H值从7.4下降到6.3。低氧能显著抑制PE引起的血管收缩幅度,用正常生理盐溶液洗脱20 min此抑制作用仍难以恢复。低氧抑制PE引起的肠系膜动脉的收缩反应具有时间依赖性,抑制程度依次为低氧60 min>40min>20 min。将生理盐溶液p H降低至6.3也可抑制PE对血管收缩的作用。结论 :低氧能够时间依赖性地抑制PE对豚鼠肠系膜动脉的收缩作用,其作用机制可能与p H的下降有关。     

缺氧对乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元外向电流的影响及其环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷含量变化的研究

目的  观察缺氧时间对体外培养的耳蜗螺旋神经节神经元（SGNs）外向电流的影响及其细胞内第二信使环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）含量变化。方法  体外原代培养新生1～3 d SD大鼠SGNs并进行免疫荧光鉴定。用膜片钳全细胞记录模式观察缺氧外液灌流SGNs时,外向电流的变化趋势和特点。用酶联免疫吸附实验检测缺氧5、15和20 min时SGNs内cAMP和cGMP的浓度变化。结果  ①酶解分离可获得生存状态良好的神经元,经免疫荧光鉴定为SGNs。②当电压钳制在-60 mV时,急性缺氧增强SGNs外向电流,主要增强0～+60 mV电压区间的激活电流幅度。缺氧5 min时,+60 mV激活电流幅度从（971.2±50.3）pA增强到（2361.0±207.4）pA,差异有统计学意义（P <0.01）。随后出现下降趋势,11～15 min时,增强的电流幅度与对照组基础电流比较,差异无统计学意义（P >0.05）。③分别检测缺氧5、15和20 min后SGNs中cAMP和cGMP的含量变化。缺氧5 min组与正常对照组比较,cAMP浓度升高,差异有统计学意义（P <0.01）。缺氧15 min组与正常对照组比较,cAMP浓度变化差异无统计学意义;缺氧20 min组与正常组对照组比较,cAMP浓度水平下降（P <0.01）。cGMP浓度随着缺氧时间的延长,总体呈下降趋势,但在20 min后有部分回升（缺氧15 min vs 缺氧20 min,P <0.01）。结论  在SGNs急性缺氧损伤过程中,外向电流增强,增强幅度随缺氧时间变化先升后降,推测在短期缺氧时细胞通过降低兴奋性,影响听觉信息的传导,且该过程与胞内第二信使cAMP和cGMP浓度的改变相关。

     

GABA_A受体亚基在神经病理性痛大鼠DRG神经元的表达

目的:观察神经病理性痛模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上GABAA受体亚基表达的改变。方法:建立坐骨神经压榨性损伤动物模型(CCI),热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期(TWL);并取大鼠L4-L6DRG神经元进行膜片钳实验,观测术后DRG神经元GABA介导的内向电流的变化;分别应用Western Blot技术和免疫荧光技术检测术后GABAA受体γ2和α2亚基表达的变化。结果:(1)CCI模型鼠的TWL比正常组明显缩短(P0.05);(2)膜片钳实验观察到术后14 d CCI术侧DRG神经元GABA介导的内向电流较正常组明显减小(P0.05),对侧电流较正常组明显增强(P0.05);(3)Western Blot检测观察到CCI术侧和对侧DRG神经元上GABAA受体γ2亚基的表达量较对照组均明显下调(P0.05),术侧和对侧磷酸化γ2亚基表达量较对照组明显上调(P0.05);(4)术侧GABAA受体α2亚基表达量下调(P0.05),对侧表达量上调(P0.05)。结论:神经病理性痛时,磷酸化GABAA受体γ2亚基表达的增多以及GABAA受体亚基组合方式的变化,可能参与了痛觉形成的过程。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ2基因多态性与高血压相关性的Meta分析

目的评价过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 (peroxisome proliferator activated receptorγ2,PPARγ2)基因rs1801282多态性与高血压的相关性。方法运用Review Manager 5.3、STATA 12.0软件对纳入的文献资料进行Meta分析。结果根据纳入、排除标准,共纳入17篇研究。累计高血压患者9 586例,对照10 748例,共20 334名。纳入研究人群的同质性较好。Meta分析结果显示:PPARγ2基因rs1801282多态性与高血压相关性具有统计学差异。等位基因模型:OR=0.76,95%CI=0.62～0.94,POR=0.01;杂合子基因模型:OR=0.73,95%CI=0.65～0.82,POR0.001;显性模型:OR=0.76,95%CI=0.62～0.93,POR=0.007,这种相关性在亚洲人群明显。无明显发表偏倚。结论 PPARγ2基因rs1801282多态性与高血压易感性有关联,Ala等位基因是其潜在保护因素。     

尼氟灭酸对福尔马林致痛大鼠行为学的影响

目的：应用大鼠福尔马林致痛模型,通过观察大鼠的痛反应行为,探讨尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）在痛觉传入过程中的作用及可能机制。方法：将24只SD大鼠随机分为3组：生理盐水（NS）组、福尔马林（F）组和NFA组,分别观察各组缩腿次数、舔爪时间。结果：NFA组第一相0-5min缩腿次数及舔爪时间较F组显著增高（P〈0.05）。NFA组与F组相比第二相缩腿次数20-25min、30-35min、35-40min、40-45min明显减少,舔爪时间20-25min、25-30min、30-35min、35-40min短于F组。结论：NFA对福尔马林大鼠致痛模型的行为学第一相急性痛反应有致痛作用,对第二相持续痛反应有镇痛作用。     

CGRP对辣椒素致痛大鼠热刺激缩足反射潜伏期的影响

目的：通过测大鼠的PWTL,探讨CGRP对辣椒素致痛大鼠热痛觉过敏的影响。方法：雌性SD大鼠48只,体重200—220g,随机分为6组,每组都为8只,A组：正常对照组;B组：生理盐水组;C组：大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;D组：腹腔注射生理盐水＋大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;E组：腹腔注射CGRP＋大腿背侧坐骨神经干周围注射辣椒素组;F组：腹腔注射CGRP8-37大腿背侧坐骨神经千周围注射辣椒素组。分别在注射前及注射后10、20、30、40、50、60min进行热板实验。结果：辣椒素组,大鼠的PWTL比实验前明显缩短（P〈0．05）,给予CGRP干预后,大鼠的PWTL与实验前和单独注射辣椒素组相比明显缩短（P〈0．05）,给予CGRP受体竞争性拮抗剂CGRP8-37干预后,发现大鼠的PWTL较GGRP干预组明显延长,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：CGRP能促进辣椒素致痛大鼠痛阈降低、痛觉过敏,而CGRP8-37能对抗这种伤害效应。     

Differential expression of alpha-adrenoceptor subtypes in rat dorsal root ganglion after chronic constriction injury

Summary： mRNAs of alpha-adrenoceptor （α-AR） subtypes are found in neurons in dorsal root ganglion （DRG） and change after peripheral nerve injury. In this study, the distribution of α-AR subtype proteins was studied in L5 DRG of normal rats and rats with chronic constriction injury of sciatic nerve （CCI）. Using immunofluorescence technique, it was found that α1A-, α1B-, and α2A-AR proteins were expressed in large, medium, and small size neurons in normal DRG, and significantly increased in all size neurons 14 days after CCI. α1D- and α2C-AR was also expressed in all size neurons in normal DRG. However, α1D-AR was significantly increased and α2C-AR was decreased in small size neurons 14 days post CCI. α2B-AR neurons were not detectable in normal and CCI DRG. Co-expression of α1A- and α2A-AR in the same neuron was observed in normal DRG and increased post CCI. Collectively, these results indicated that there is distinct distribution of α-AR subtypes in DRG neurons, and the distribution and levels of expression of α-AR subtypes change differently after CCI. The up-regulation of α-AR subtypes in DRG neurons may play an important role in the process of generating and transmitting neuropathic pain.     

咪达唑仑对神经病理性痛大鼠DRG神经元GABA-AR激活电流的增强作用

目的:观察大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury CCI)致神经病理性痛后,咪达唑仑对背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上γ-氨基丁酸A受体(gamma-aminobutyric acidA receptor,GABA-AR)激活电流的调控作用.方法:运用全细胞膜片钳技术,记录假手术、CCI组、正常组GABA-AR激活电流的变化、以及咪达唑仑对坐骨神经慢性压迫性损伤后GABA-AR激活电流的影响.结果:CCI组GABA(0.1～1000μmol/L)激活的电流幅值显著小于假手术组和正常组.假手术组和正常组由GABA (0.1～1000μmol/L)激活的电流幅值差异无统计学意义.不同浓度咪达唑仑(0.03～100 μmol/L)对CCI组GABA-AR激活电流均有增强作用,且随咪达唑仑浓度升高,对DRG神经元GABA-AR激活电流的增强率逐渐升高,3.00 μmol/L咪达唑仑时达峰值(P＜0.05或0.01).结论:在CCI组中,DRG神经元GABA-AR功能的改变导致的突触前抑制作用的减弱可能是疼痛产生的关键因素之一.咪达唑仑对CCI组GABA-AR功能有增强作用,增强GABA-AR参与突触前抑制作用,可能是其在脊髓水平产生镇痛的机制之一.     

GABAA受体α2亚基参与神经病理性痛

目的探讨GABAA受体α2亚基参与神经病理性痛的可能机制。方法分别运用全细胞膜片钳和免疫荧光技术观察坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型手术侧、手术对侧及假手术组背根神经节(DRG)神经元GABAA受体特异性激动剂Muscimol激活电流幅度以及GABAA受体α2亚基表达。结果①CCI模型鼠热缩足反射潜伏期与假手术组或手术对侧组相比显著缩短(P<0.01)。②Muscimol在DRG上记录到3种典型的反应形式,均对特异性GABAA受体阻断剂Bicuculline敏感。③在3组DRG神经元上,Muscimo(l0.1～1 000.0μmol/L)引起浓度依赖的内向电流。假手术组、CCI模型鼠手术侧和对侧组DRG神经元上1 000μmol/L Muscimol引起内向电流幅度分别为(1 487.0±92.9)、(541.0±63.3)和(1 945.0±284.4)pA,组间比较差异有统计学意义,3组的EC50值差异无统计学意义。④GABAA受体α2亚基表达于DRG神经元膜上,CCI模型手术侧组DRG神经元GABAA受体α2亚基较假手术组表达减少,而手术对侧表达增强。结论神经病理性痛可能通过下调GABAA受体α2亚基的表达使GABA介导的突触前抑制作用减弱,易化伤害性信息的传入,产生痛觉敏化。