基因芯片用于SARS早期诊断和病毒载量时相监测研究

目的：采用基因芯片技术对严重急性呼吸综合征(SARS)患者进行病毒载量时相监测，为SARS早期诊断提供参考指标。方法：4例确诊非重症SARS患者，在病程的3～30d中，间隔2-6d共7次连续采样。检测标本种类为血液和呼吸道分泌物(痰或鼻、咽拭子)。血标本26份，呼吸道分泌物标本24份．共计50份。对SARS—CoV复制酶(replicase)1A、刺蛋白(spike glycoprotein)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein)的编码序列区域进行检测和杂交。基因芯片有严格的反应内控体系和防止污染手段。结果：4例SARS患者在病程第4天第1次采样时，2例患儿呼吸道标本阳性，在病程9～18d第2、3次采样时，4例患者的所有标本检测均为强阳性或中等程度阳性。在病程18～23d、第4、5次采样时，所有标本均表现为阳性程度减弱或转为阴性。到病程的22—30d第6、7次采样检测时．4例患者的呼吸道分泌物和血标本已全部无病毒核酸检出。结论：基因芯片技术为SARS早期诊断和病毒载量时相监测提供了有参考意义的实验数据．     

1例COVID-19患者的实验室指标变化及意义

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是单链正义RNA病毒,属于β类冠状病毒,与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)同种属^[1-2]。现有的研究结果显示,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的传染性和病死率都非常高,围绕该病毒的诊断和治疗亟待突破。尤其是对病毒感染免疫的研究将在实验室诊断和疫苗的研发中发挥至关重要的作用。本文就上海首例COVID-19患者整个诊治过程中的实验室指标变化进行报道,为COVID-19的诊断治疗提供信息。     

基于凝集素芯片的蛋白质糖基化修饰检测方法

目的:建立针对组织和血清样本中蛋白质糖基化的凝集素芯片检测方法 ,并结合凝集素印迹法验证,以实现样品间糖基化修饰差异的高通量筛选。方法:采用包含91种凝集素的凝集素芯片,利用生物素标记的组织总蛋白质样品,比较实验的重复性及不同上样量的芯片实验效果。利用生物素标记的去高丰度蛋白质血清和全血清样品,比较两者芯片实验的检出情况及全血清样品不同上样量的芯片实验效果。以最优条件筛选癌组织与癌旁组织样品之间及不同疾病患者血清样品之间的糖基化修饰差异,采用凝集素印迹法验证凝集素芯片实验结果。结果:芯片重复性良好(r>0.94),组织样品在0.625~1.250μg/m L时实验效果较佳;去高丰度蛋白质血清和全血清样品以高浓度上样时(≥20μg/m L),两者检出相近。标记后的全血清样品取2μL稀释至150μL时,实验效果最佳。筛选出检测信号有差异的凝集素经凝集素印迹法验证,结果与芯片检测一致。结论:该凝集素芯片实验体系稳定、可靠,可用于筛选临床样本间的糖基化修饰差异,有助于发现疾病相关的糖蛋白生物标志物。     

胶体金标记/银染信号放大法在寡核苷酸芯片检测人HCM突变中的应用

目的　验证胶体金标记 /银染信号放大法在寡核苷酸芯片检测人肥厚型心肌病 (HCM )基因突变中对单碱基错配的灵敏性和特异性。方法　不对称PCR扩增、生物素标记待检测的人 β 肌凝蛋白重链基因片断 ,与构建的低密度HCM寡核苷酸芯片杂交 ,胶体金标记 /银染放大法检测 7种HCM恶性突变位点 ,观察胶体金标记 /银染信号放大法对单碱基错配形式的判别率。结果　胶体金标记 /银染信号放大法在寡核苷酸芯片中的单硝基突变的平均判别率为 16 2 ,可以鉴别所有的单碱基错配和三碱基缺失。结论　胶体金标记 /银染信号放大法代替荧光标记法用于寡核苷酸芯片靶标分子的标记和结果检测 ,可以区分所有的单碱基错配形式 ,实现了芯片杂交结果的普通光学显微镜检测 ,提高了DNA芯片的实用性。     

蛋白质芯片用于疾病监测的现状和趋势

蛋白质芯片是一种新型的高通量蛋白质组学技术,因其具有高通量、微型化、平行快速等优点,在疾病监测等方面具有广泛的应用前景.     

超低温冷冻对人精子糖被的影响

目的研究超低温冷冻对人精子糖被的损伤。方法利用凝集素芯片比较精子冷冻前、后的凝集素结合谱。结果通过比较冷冻保护剂和冷冻方法对精子复苏率的影响,确定了Cryo Sperm TM以及一步熏蒸法为最佳精子冷冻试剂和方法;通过凝集素芯片比较精子冷冻前、后的凝集素结合谱观察到在91种凝集素中,有33种发生了显著变化,其中,冷冻后显著下调的有9种,显著上调的有24种,并且显著下调的MAA及显著上调的PSA、ABA和AIA经流式验证,结果与芯片一致。结论精子糖被经过冷冻之后发生了显著变化,对精子起保护作用的唾液酸大量丢失,同时也暴露糖链内部的糖基,因此精子糖被的冷冻损伤可能是由于低温冷冻引起精子生育力低下的原因之一。     

3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立

采用ＨＳＶ1、ＨＳＶ2和ＨＣＭＶ 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液 ,用冻融法、煮沸法、蛋白酶Ｋ法、ＮＰ40 (乙基苯基聚乙二醇 )法、综合法及改良通用法提取病毒ＤＮＡ。综合法是将 3种病毒细胞培养混合物各 2ｍｌ,2 5 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 10ｍｉｎ ,用2ｍｌ冷ＰＢＳ缓冲液溶解沉淀 ,12 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,用 1ｍｌ胰酶 (0 2 5 % )溶解沉淀 ,5 0℃保温 18ｈ ,加入等体积的酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5 2 4 1) ,30 0 0ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ ,取水相加入 1/ 2体积 7 5ｍｏｌ/Ｌ的ＮＨ4 (ＡＣ) ,2倍无水乙醇 , 2 0℃放置 30ｍｉｎ ,10 0 0 0…