RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成

目的 体外合成针对人环氧化酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA）,并转染人人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA.方法 分离、培养和传代人类风湿关节炎（类风关）滑膜成纤维细胞.设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA（1#-4#siRNA）,1条随机序列siRNA.设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组（NC）及未转染对照组（CTL组）.应用Lipofect AMINE 2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4 h后各培养孔加入终浓度为100 nmol/L的佛波酯.转染36 h、48 h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平.采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平.结果 转染36 h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.转染48 h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.转染24 h、48 h和72 h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低.结论 4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达.     

门诊风湿病就诊及其影响因素的调查和分析

目的：了解风湿科门诊的常见病种、发病危险因素和诊治状况等。方法：对2005年7月18日～7月27日就诊于中山医院风湿科门诊的98例患者以问卷的形式进行横断面调查，结果进行统计分析。结果：就诊患者以中年者居多，职业多为工人，痛风、类风湿关节炎（类风关）比例在一半以上。患者多在就诊后2年应用改变病情药物（DMARDs）。痛风患者以工人、科研工作者、经商者居多。类风关患者平均在关节痛出现3年后服用DMARDs，有81.48%的患者服用该类药物，其中绝大多数患者服用甲氨蝶呤（MTX），其次为MTX与青霉胺或与柳氮磺胺吡啶联合用药。类风关患者HAQ分值最高。结论：风湿疾病的疾病谱较前有所改变，痛风成为最常见病种。DMARDs的应用率较广，但未被早期应用。风湿疾病中以类风关患者的生活质量为较差，痛风者相对较好。     

克罗恩病患者焦虑抑郁状况及其影响因素分析

目的：分析克罗恩病（Crohn’s disease, CD）患者的精神心理状况，研究CD患者焦虑和抑郁相关影响因素及其对患者健康生命质量的影响。 方法：收集2021年2月至2022年2月就诊于复旦大学附属中山医院的CD患者共100例，采集人口统计学资料及疾病相关信息，研究对象填写焦虑自评量表( SAS)、抑郁自评量表( SDS) 、患者报告结局（PRO2）、炎症性肠病患者生活质量分析表（IBDQ）和FACIT-F疲劳量表。采用卡方检验和logistic回归检验分析焦虑、抑郁相关影响因素，独立样本t检验分析焦虑、抑郁对IBDQ和FACIT-F评分的影响。 结果：CD患者合并焦虑、抑郁的比例明显高于健康对照组（焦虑：58% vs 9.4%；抑郁：43% vs 11.8%，P < 0.001），SAS和SDS评分显著增高；患者为女性、具有肠外表现、根据患者自我报告症状评估疾病处于活动期为焦虑危险因素，文化程度和患者自我报告症状评估疾病处于活动期是抑郁危险因素；具有焦虑和抑郁情绪的患者IBDQ（焦虑：171.24 ± 24.30 vs 190.95 ± 20.61, P < 0.001；抑郁：170.47 ± 27.97 vs 186.35 ± 19.59, P = 0.002）和FACIT-F（焦虑：12.53 ± 6.15 vs 15.62 ± 7.65, P= 0.028；抑郁：9.44 ± 4.08 vs 17.14 ± 6.86 , P < 0.001）评分明显降低。 结论：CD患者发生焦虑、抑郁的风险高于一般人群，焦虑和抑郁发生风险与疾病活动密切相关，具有焦虑和抑郁情绪的患者更易感到疲劳，健康生命质量显著下降。     

育龄期风湿病妇女选择避孕措施的循证指导策略

风湿病诸如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)、多发性肌炎、大动脉炎、原发性干燥综合征(pSS)等均多见于女性患者,尤其是育龄期妇女.     

基于iTRAQ多重化学标记串联质谱技术筛选肝细胞癌的生物标记物

目的：利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选并鉴定合并乙肝病毒（HBV）感染的肝细胞癌（HCC）患者和慢性乙肝患者的血清差异表达的蛋白质。方法：收集HBV感染的HCC患者血清16例（HCC组）,慢性乙肝患者血清13例（慢性乙肝组）,组内等量混合后利用高效液相色谱柱去除高丰度蛋白,样本经iTRAQ试剂标记后利用二维色谱分离,经串联质谱鉴定并相对定量。结果：质谱共得到49784个多肽片段,经谱库搜索的鉴定的蛋白共279个,其中差异表达的蛋白有28种,HCC组较慢性乙肝组上调的蛋白有20种,下调的有8种。其中上调的蛋白包括α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白1、血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白,结合珠蛋白等5个急性相反应蛋白,提示炎性反应和肿瘤间存在一定的联系。结论：筛选出多种与肝癌相关的差异蛋白,提示iTRAQ技术对于血清蛋白质组学肿瘤标记物的研究有很好的应用前景。     

代谢组学在肿瘤诊断应用中的新进展

代谢组学是近几年发展起来的对某一生物或细胞所有低分子量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科,是系统生物学的重要组成部分。本文简要介绍了代谢组学的概念和研究方法,对当前代谢组学在肿瘤诊断中的应用进展进行综述。     

RNAi抑制类风湿关节炎成纤维细胞环氧合酶-2合成及对炎症因子的影响

目的体外合成和筛选特异性阻断人滑膜成纤维细胞（RASF）环氧合酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA），同时了解COX-2抑制对炎症因子表达水平的影响。方法设计4条针对人COX-2mRNA siRNA（1#-4#siRNA），1条随机序列作为对照。分成A～H组，A组为空白阴性对照，B～F组处理依次为随机siRNA、1#-4#siRNA。应用LipofectAMINE 2000将上述siRNA转染入RASF，各培养孔加入100nmol／L的佛波酯。转染48h后，分别应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western Blot检测hCOX-2mRNA和蛋白表达水平。采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测各组上清液中前列腺素E2（PGE2）和白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果4#siRNA转染的RASF表达hCOX-2mRNA和蛋白水平明显低于其他siRNA干预组和阴性对照，且其上清液PGE2和IL-1β、IL-6、TNF-α、VEGF水平较其他各组明显下降。结论4#siRNA能有效抑制COX-2mRNA表达和COX-2蛋白的合成，且上清液中PGE2和IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF水平最低。     

Toll样受体3基因缺陷促进四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化损伤

目的:探讨Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠模型肝纤维化损伤程度的影响。方法:将20只野生型雄性小鼠和20只TLR3基因缺陷型(TLR3-/-)雄性小鼠分别分为野生型对照组、野生型造模组、TLR3-/-对照组和TLR3-/-造模组,每组各10只。对照组腹腔注射玉米油,造模组腹腔注射四氯化碳。造模8周后采集血液标本,应用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)水平;采用马松三色染色法对肝组织胶原沉积程度进行分析;采用α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)免疫组织化学染色法检测肝星状细胞的激活情况;应用试剂盒检测肝组织中的羟脯氨酸含量;采用实时荧光定量PCR法检测肝组织中纤维化标志物Ⅰ型胶原、炎性因子[包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)和单核细胞趋化因子1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)]以及促纤维化分子[包括转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)和血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)]的表达。结果:TLR3基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠血清中的ALT、AST、TBIL、ALB水平变化无影响。TLR3基因缺陷可加重四氯化碳诱导的肝组织胶原沉积和肝星状细胞激活;促进四氯化碳诱导的小鼠肝组织中羟脯氨酸的升高;使四氯化碳诱导的肝纤维化标志物Ⅰ型胶原增多,也使肝组织中炎性因子TNF-α、IL-6和MCP-1以及促纤维化分子TGF-β、TIMP1和PDGFR表达升高。结论:TLR3基因缺陷可促进四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织中的胶原沉积和肝星状细胞激活,促进肝组织炎性因子释放,使肝促纤维化分子上调。以上提示,TLR3是肝纤维化病理过程中的一个保护性基因。     

造血干细胞移植治疗炎症性肠病进展

炎症性肠病(IBD)是胃肠道慢性炎性肉芽肿性疾病,其发病与环境、遗传因素相关,传统治疗包括抗炎和抑制免疫等治疗.新近的研究提示造血干细胞移植(HSCT)治疗IBD有效,此文就HSCT治疗IBD的研究现状和存在的问题进行概述.     

肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及临床意义

目的：探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）和慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清分泌型卷曲相关蛋白-1（secreted frizzled-related proteins, sFRP-1）和β-catenin水平及临床意义。方法采用ELISA法检测36例HCC、36例CHB和36例正常人血清sFRP-1和β-catenin水平,应用Spearman相关分析,分析血清sFRP-1和β-catenin水平与年龄、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白蛋白和总胆红素等的相关性。结果 HCC和CHB患者血清sFRP-1水平分别为（1136.28±332.43）pg/ml和（1194.53±156.84）pg/ml,均显著低于正常人[（1477.26±563.12）pg/ml,P＜0.05];HCC患者血清β-catenin水平为（527.2±20.9）pg/ml,显著高于正常人和CHB患者[分别为（369.8±21.5）pg/ml和（374.0±8.3）pg/ml,P＜0.05];HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-catenin水平与年龄、ALT、白蛋白、总胆红素无显著相关性。结论肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1降低,而肝细胞癌患者血清β-catenin水平升高。