压力及维生素B1作用下视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达

目的:探讨压力及压力加维生素B1联合作用下SD大鼠视网膜神经细胞p53、MDM2及Ref1基因的表达情况。方法:新生SD大鼠视网膜神经细胞体外培养,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况,细胞分单纯加压组、实验加压组(加入维生素B1)及未加压对照组,于加压后2 d(培养第9~10天)行苔盼兰染色检查计数细胞成活率,p53免疫组化检查并提取细胞总RNA,用逆转录聚合酶链反应法检测p53、MDM2及Ref1基因的表达。结果:单纯压力组p53／MDM2基因的表达较正常未加压组增强,Ref1基因表达无增强;而维生素B1作用后的加压组,其p53／MDM2基因的表达较单纯加压组明显减弱。结论:压力作用下视网膜神经细胞的损害有凋亡机制参与,维生素B1对压力作用下视网膜神经细胞具有保护作用。     

四种DNA提取法在遗传性眼病DNA库中的比较

目的通过对低渗溶血法、盐酸胍法、氯化钠法、NP-40法提取人类基因组DNA的比较，以得到一种最稳定、可靠、实用的DNA提取方法，应用于遗传性眼病DNA库的建立。方法用四种方法提取眼遗传性疾病患者的血液基因组DNA，紫外分光光度测定，用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增鉴定提取的基因组DNA。结果低渗溶血法提取基因组DNA量最多，纯度最高，PCR扩增效果最好，有利于遗传性眼病DNA库的建立。结论低渗溶血法是一种实用、可靠、稳定的提取方法，在眼遗传性疾病家系DNA库建立上值得推广应用。     

泪液中特异表达的基因

泪液中特异表达的基因不多。本文综述了三个特异表达的基因 :杀菌的泪 lipocalin基因、泪膜中粘液胶结构与骨架分子之一粘蛋白基因 ( m ucin)和基底膜蛋白 BM180基因     

从rds小鼠视网膜克隆视网膜色素变性相关差异片段

目的 从遗传性视网膜色素变性动物模型rds小鼠中克隆视网膜色素变性发病过程中特异表达的基因。方法 应用差异显示技术,分析rds小鼠发病过程中视网膜的mRNA。对特异性表达的mRNA片段进行克隆测序。结果 在视网膜色素变性发病过程中,rds小鼠的视网膜存在着相当明显的基因表达差异。在所测序分析的5个差异显示片段中其中一个与GenBank刚登录的功能未知的、从成年男性睾丸组织中克隆出来的cDNA序列较高同源（同一率为86％）另外4个为低同源序列。25天rds小鼠高表达的一个差异片段,与37天正常鼠表达而rds小鼠不表达的另一个片段,长度相同,177个碱基只相差两个。结论 视网膜色素变性这类慢性病变,存在着多个基因的表达及调控。     

发生在成视网膜细胞瘤蛋白大袋立体结构外的错义突变

目的:了解成视网膜细胞瘤(RB)患者RB1基因突变至RB发生中RB蛋白(pRB)的变化。方法: 提取RB患者的基因组DNA, PCR扩增后, SSCP/异源双链筛查RB1基因的启动子和全部27个外显子, 克隆测序鉴定突变, 并分析突变产物对pRB的影响。结果:RB患者RB1基因的外显子4存在着错义突变, 该突变发生在pRB的大袋立体结构外。RB患者RB1基因存在着不影响pRB大袋的生殖细胞性突变, 这是迄今为止第4例报道。结论:pRB氨基末端可能参与pRB对细胞的生长抑制。     

PCR扩增技术在新生儿结膜炎中的诊断应用

目的 探讨PCR扩增技术在新生儿结膜炎临床诊断中的价值。方法 采用PCR扩增技术和直接涂片镜检两种方法，分别检测1997年9月～2002年10月到中山大学中山眼科中心就诊的200例新生儿结膜炎息儿的结膜标本中的淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体。结果 PCR扩增检测出18例淋球菌阳性(9％)，65例沙眼衣原体阳性(32．5％)，8例解脲支原体阳性(4％)；直接涂片镜检法检出14例淋球菌阳性(7％)，47例沙眼衣原体阳性(23．5％)，5例解脲支原体阳性(2．5％)。PCR扩增的阳性率比直接涂片镜检高。结论 PCR扩增技术是一种快速、简便、灵敏的检测新生儿结膜炎常见致病病原体的方法，与传统直接涂片镜检法比较，具有一定的优势。     

p53和MDM2在3种RP小鼠视网膜中的表达

目的 了解凋亡相关基因p53和MDM2与视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP)发病的关系。方法 以RP模式动物rds小鼠，rd小鼠，C3H小鼠及正常对照C3B小鼠为材料，提取不同发病时间（出生后7，12，17，23，29，37和50d)视网膜的总RNA，以β-actin和L19核糖体蛋白基因为内对照，RT－PCR分析小鼠发病过程中视网膜p53和MDM2的表达。结果 在C3B小鼠视网膜中，p53和MDM2的表达完全同步。出生后7d，高表达；7－12d期间，表达量迅速下降；12－50d期间，表达水平低，但基本稳定；p53和MDM2在rds小鼠的表达水平低，但基本上是同步，稳定表达。在rd小鼠中，p53的表达变化不大，但MDM2的表达则与p53不同步，类似于C3B小鼠MDM2的表达。在C3H小鼠的视网膜，p53和MDM2的表达也不同步。7－23d期间，p53的表达基本稳定；自23d后逐步下降，其中23－29d期间，p53的表达下降最快。而MDM2的表达总体变化不大。结论：在这3种RP模式动物中，虽然凋亡相关基因和MDM2存在着表达差异，但其发病过程中视网膜细胞的变性死亡可能是通过p53非依赖型途径进行的。     

1200009K10基因在小鼠视网膜中的表达

背景：1200009K10基因来源于成年小鼠肺cDNA基因库，于2002-01公布，其功能暂时还未明确。预测其蛋白含有5个区域：Kelch基序，Kelch区．BTB／POZ区，BTB区以及13推进区，以上所有结构均参与蛋白之间的相互作用和一些酶的活性表达。 目的：观察1200009K10基因在小鼠视网膜中的表达方式。 设计：观察对比实验。 单位：中山大学眼科中心研究所。 材料：实验用rd小鼠和rds小鼠以及正常对照的C3B小鼠传代小鼠模型购自Jackson实验室（巴港，缅因州04609，美国），所有动物均在中山大学实验动物中心二等动物单元饲养。 方法：从小鼠中提取分离视网膜RNA，通过急速冷凝cDNA扩增法扩大1200009K10基因，采用基因特性定量聚合酶链反应对rd小鼠和rds小鼠以及正常对照的C3B小鼠视网膜中该基因的表达进行分析。 主要观察指标：3种小鼠视网膜1200009K10基因的表达含量和表达方式。 结果：从小鼠视网膜中提取分离的视网膜RNA经过急速cDNA冷凝扩增后，获得了1种与小鼠1200009K10基因序列基本相同的克隆物。小鼠视网膜12000109KIO基因的表达分为6个阶段：出生后7，12，25，37，50d（接近性成熟）及出生后150d。rds，rd和C3B小鼠视网膜中1200009K10基因表达于小鼠出生后7d较低，7～12d较高，12-50d稳定，最后略有增加。C3B小鼠视网膜中1200009K10基因表达趋势和水平与rds，rd小鼠基本相同，出生12d后1200009K10基因的表达水平高于rds，rd小鼠。rds，rd和C3B小鼠视网膜1200009K10基因表达水平有所不同，其表达方式在3者之间无明显差异。 结论：1200009K10基因可能不参与视网膜变性的发展过程。     

快速筛选杂合性突变克隆

目的：建立一种快速、简便、可靠的筛选杂合性突变克隆的方法。方法：采用加热裂解，直接PCR扩增插入目的片段，并与常规酶切法相比较。结果：加热裂解，直接PCR扩增是一种快速、简便、行之有效的筛选鉴定方法，可节省时间和提高效率。     

常染色体显性视网膜色素变性NRL基因的突变研究

目的 对中国人常染色体显性视网膜色素变性（RP）NRL基因的突变现状进行研究。方法 抽取120例RP先证者的静脉血提取DNA。行NRL基因的引物设计合成，PCR扩增，琼脂糖电泳鉴定，异源双连-SSCP电泳。结果 120例散发型RP患者未发现NRL基因突变。结论 中国人RP NRL基因的突变频率很低。