siRNA联合顺铂抑制骨肉瘤细胞增殖的研究

目的构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用。方法应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化。Annexin V法检测细胞凋亡。MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用。结果构建Survivin基因siRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与MG63、阴性对照细胞比较,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓。MG63/PsiS细胞中Survivin的mRNA及蛋白表达明显减少。MG63/PsiS凋亡率增加为17.8%(P<0.01)。1 mg/L顺铂作用下,MG63/PsiS死亡率是其他各组的2.3倍(P<0.01)。结论特异性siRNA能够明显阻断Survivin基因的表达促进MG63细胞凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA在体内对U251细胞移植瘤的影响

Surivin基因属于凋死蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis,IAP）家族，具有抗细胞凋亡、促细胞增殖和促血管形成等多种生物学活性，其在脑胶质瘤发生和发展过程中的作用尚不完全明确，本研究结盟在观察稳定转染靶向Survivin基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法：将U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWHI-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWHI的U251-P细胞，分别接种于裸鼠背部皮下，建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型，定期观察肿瘤生长情况，测定肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线，观察45天后处死动物、称瘤重，采用免疫组化SABC法检测Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell muclear antigen，PCNA）以及八因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达，采用TUNEL法检测凋亡细胞，分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（proliferative index,PI），凋亡指数（apoptotie index,AI）以及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：与U251、U251-SR组肿瘤标本，U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟，肿瘤生长缓慢，肿瘤体积及瘤重均明显减小（P〈0.01）；U251-P组裸鼠相丝，U251-SR组肿瘤标本Survivin蛋白表达明显下调：PI和MVD明显减少，AI明显升高（P〈0.001）。结论：靶向Survivin基因的sbRNA能够在体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成，Survivn基因可作为脑胶质瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference,RNAi）技术可为脑胶瘤基因治疗的一个良好靶点，而RNA干涉（RNA interference，RNAi）技术可为脑胶质瘤的基因治疗提供新的重点手段。     

异体DBM骨粒复合rhBMP-2及骨水泥材料修复骨缺损的实验研究

目的探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨粒、骨水泥（BC）及重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）复合材料修复实验性骨缺损的能力。方法复合材料植入兔实验性尺骨骨缺损部位（A组），B组植入纯骨水泥棒材作为对照。不同时间行组织学、印度墨汁动脉血管灌注及材料自然断面扫描电镜观察。结果材料植入第2周表面纤维组织样完整包膜形成，材料外周及两端血管形成密集，并向材料中长入；第4、8、12周新生血管明显增多，且深入至材料中央，新生间充质组织继续大量长入；包绕DBM骨粒的间充质组织部分4周转化为软骨。第8、12周软骨趋于成熟，可见含有造血骨髓的新生骨组织形成，其间可见较多的哈佛氏系统；同时，可见明显DBM骨粒被新生组织爬行吸收现象。第4周原自然裂隙部分已被结构紊乱的胶原纤维束充填。第8至12周，可见大量排列紊乱的矿化骨结构沿多方向长入，新生骨组织附于脱钙骨基质骨粒及骨水泥表面，原自然裂隙几近消失。植入B组材料者除外被纤维膜外余无变化。结论脱钙骨基质骨粒、骨形态发生蛋白、骨水泥复合材料具有良好的骨诱导及骨引导生成作用，是良好的骨缺损修复材料。     

年龄对肺癌外科治疗的影响

目的:探讨年龄与肺癌外科治疗的关系。方法:回顾性分析我科2005年2月~2006年2月手术治疗肺癌患者217例的临床资料。结果:在各年龄段,肺癌好发部位均为肺上叶,鳞癌多见。随着年龄的增加,肺癌患者术前合并其他疾病增多,肺功能下降,手术方式的选择趋于保守,术后并发症逐步增加。但只要加强围手术期的管理和治疗,大多数术后并发症均可治愈。结论:对于各年龄段肺癌患者,在选择适当的手术方式和正确的围手术期处理的基础上,应积极手术治疗。     

tBid基因的表达及其对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用

目的：观察tBid基因在骨肉瘤细胞中的表达及其对转染的SOSP-9607细胞的凋亡作用。方法：采用脂质体转染的方法,将tBid基因转染骨肉瘤细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达和细胞形态学变化,进一步电镜观察其超微结构改变。MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况,通过Annexin V、染色流式细胞仪检测来观察其促凋亡作用。结果：转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测tBid的表达,细胞出现凋亡。电镜观察呈现出典型的凋亡特征。MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制。Annexin V染色流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与对照组细胞（凋亡率为6%）相比,其凋亡率为35.8%。结论：tBid基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

临床骨科见习教学浅见

见习教学是临床医学教学工作的重要组成部分，骨科见习又是外科见习的重点与难点之一。通过多年的教学实践，结合当前的医疗现状，我们以医德教育、素质教育为本，启发学生正确的临床思维，锻炼学生良好的临床基本工作能力，取得了较好的效果。本文对此进行总结归纳，为进一步提高骨科临床教学工作质量提供参考。     

应用RNA干扰技术抑制骨肉瘤细胞中基质金属蛋白酶-1基因表达的研究

目的构建针对人基质金属蛋白酶-1（MMP-1）基因的特异性短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，并观察其在人骨肉瘤细胞MG63中对MMP-1基因表达的抑制作用。方法培养骨肉瘤细胞MG63，根据MMP-1基因cDNA编码序列，设计并合成针对MMP-1基因的特异性RNA干扰片断，将其克隆入pSilencer 3．0-H1 neo质粒，构建MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNA MMP-1。与阴性对照质粒分别转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。采用RT—PCR、Western blot检测MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平，同时进行体外侵袭试验。结果成功构建了MMP-1基因shRNA真核表达载体siRNA MMP-1。获得了稳定转染siRNA MMP-1载体和阴性对照载体siRNA neg的细胞系，并发现MG63／siRNA MMP-1细胞MMP-1 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制，细胞侵袭能力也显著下降。结论特异性shRNA能够明显抑制MMP-1基因在MG63细胞中的表达，这为进一步研究MMP-1在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

部分肿瘤抑制基因在新建骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的表达及意义

目的：探讨骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７的发生发展与部分肿瘤抑制基因及早期生长反应基因表达的关系。方法：采用原位杂交及免疫组织化学ＳＡＢＣ染色方法检测肿瘤抑制基因p５３,ｐ１６,Ｒｂ及早期生长反应基因ｅｇｒ－１在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中的表达;用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测肿瘤抑制基因ＤＣＣ在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中是否缺失。结果：ＳＯＳＰ－９６０７细胞中ｐ１６,Ｒｂ基因表达未见异常改变,未检测到突变型Ｐ     

骨肉瘤HER2基因表达增加肺转移发生危险度

目的:研究骨肉瘤中HER2基因表达与骨肉瘤患者发生肺转移的关系。方法:对43例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性研究,应用HER2单克隆抗体对组织切片进行免疫组织化学染色,并将上述资料与随访患者发生肺转移情况进行统计学分析。结果:骨肉瘤患者HER2表达与患者发生肺转移相关(P<0.05),HER2高表达的骨肉瘤患者发生肺转移的可能性大。结论:HER2检测是判断骨肉瘤发生肺转移的一项有价值的指标;同时,HER2基因为骨肉瘤的生物治疗提供一种可能的靶点。