粘连性肠梗阻50例治疗体会

粘连性肠梗阻是普外科常见疾病之一．在肠梗阻中其发病率占首位。在临床工作中对本病若重视不够，或处理不当，常会造成严重的并发症，甚至死亡。我院从1995年10月-2005年10月共收治粘连性肠梗阻50例。现就对本病的治疗体会介绍如下。     

经气调控仪治疗原发性高血压病40例疗效报告

经气调控仪治疗原发性高血压病４０例疗效报告喻国雄，钟传，李先茂（第一军医大学珠江医院中医科，广州５１０２８２；西藏军区１１５医院）主题词高血压／穴位疗法，经气调控仪高血压病是一种严重危害人类健康的循环系统常见疾病，又是导致死亡的主要疾病如冠心病、脑血...     

霍奇金淋巴瘤CD99基因表达缺失的意义

目的:探讨经典型霍奇金淋巴瘤(cHL) R-S细胞CD99蛋白表达情况. 方法:将8例cHL全部按WHO新分类标准进行确诊,采用免疫组织化学SABC法进行CD99染色,观察每一病例R-S细胞阳性表达率;流式细胞仪检测B淋巴瘤DG75细胞株,T淋巴瘤Jurkat细胞株,霍奇金淋巴瘤L428, HDLM-2细胞株CD99蛋白表达情况. 结果:8例cHL中R-S细胞CD99阴性表达率为100% (8/8); DG75细胞株CD99表达阳性(87.3±0.4)%,Jurkat细胞株CD99表达阳性(96.8±0.6)%,L428细胞株CD99表达阳性(3.8±0.4)%,HDLM-2细胞株CD99表达(66.4±0.3)%阳性. 结论:CD99基因在霍奇金淋巴瘤表达缺失可作为诊断cHL的参考依据.     

血管内皮生长因子受体结合肽介导颗粒酶B靶向性抗肿瘤血管生成

目的　观察血管内皮生长因子受体 (VEGFR)结合肽 -颗粒酶 B(Gra B)融合蛋白抗血管生成的作用 .方法　抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 Gra B c DNA;抽提 L o Vo细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 VEGFR结合肽c DNA,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物经亲和层析纯化后 ,以人血管内皮细胞 (ECV30 4 )和鸡胚尿囊膜血管测定其生物学活性 .结果　表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,且具有抑制血管内皮细胞增殖及破坏鸡胚尿囊膜血管形成的活性 .结论　 VEG-FR结合肽 - Gra B融合蛋白具有抑制血管生成的功能 ,在肿瘤生物靶向治疗中有一定潜在价值     

LMP1与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒的制备

目的: 制备EB病毒LMP1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒. 方法: 采用RT- PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆到带绿色荧光蛋白慢病毒表达载体质粒FUGW中. 经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体. 在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-LMP1导入病毒包装细胞293FT, 荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,PCR鉴定. 结果: 限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与GenBank中的数据完全吻合; LMP1准确克隆入FUGW的多克隆位点. 慢病毒的3种质粒可高效转染入293FT细胞,荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光. 绿色荧光位于细胞的胞膜及胞质. 结论: 成功制备了LMP1与GFP融合基因慢病毒,为研究EBV瘤基因LMP1在多种疾病中的作用机制提供适合的稳定转染细胞的载体.     

颗粒酶B直接裂解部分断裂的基因组DNA--颗粒酶B诱导细胞凋亡新途径

目的：颗粒酶B(Granzyme B，GraB)对核内物质具亲和力，体外除去核膜的细胞核中可观察到大量GraB聚积，观察GraB是否直接作用于基因组DNA。方法：通过抽提人外周血淋巴细胞总RNA，进行RT-PCR克隆GraB cDNA，构建GraB原核表达载体，用限制性酶切和DNA测序进行鉴定；异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTC)诱导表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物。表达产物经亲和层析纯化后，观察其对基因组DNA的功能。结果：表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中，具有良好的抗原性和特异性，特异性底物检测有活性，且具有直接作用于部分断裂的基因组DNA，使其发生进一步裂解的活性。结论：Grab直接作用于部分断裂的基因组DNA，这可能是GraB诱导细胞凋亡新的作用途径。     

血管内皮生长因子受体结合肽介导颗粒酶靶向性抗肿瘤血管生成

目的：观察血管内皮生长因子受体（VEGFR）结合肽－颗粒酶B（GraB）融合蛋白抗血管生成的作用。方法：抽提人外周血淋巴细胞总RNA，进行RT－PCR克隆GraBcDNA；抽提LoVo细胞总RNA，进行RT－PCR克隆VEGFR结合肽cDNA，用限制性酶切和DNA测序进行鉴定，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）分析表达产物，表达产物经亲和层析纯化后，以人血管内皮细胞（ECV304）和鸡胚尿囊膜血管测定其生物学活性。结果：表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中，具有良好的抗原性和特异性，且具有抑内管内皮细胞增殖及破坏鸡胚尿囊膜血管形成的活性，结论：VEGFR结合肽－GraB融合蛋白具有抑制血管生成的功能，在肿瘤生物靶向治疗中有一定潜在价值。     

小鼠A20RS样细胞模型的初步建立

目的：研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)转染小鼠B淋巴瘤细胞A20能否诱导出霍奇金淋巴瘤H／R-S样细胞．方法：采用RT-PCR方法获得LMP1全外显子片段，使之克隆到真核表达载体PLXSN中，限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体；运用脂质体介导转染技术，将LMP1的真核表达重组质粒和空载体质粒导入．420细胞．结果：扩增的LMP1cDNA长度为1．1kb，测序结果与已知序列吻合，重组真核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子；经G418筛选获得稳定整合了LMP1和空载体的亚克隆细胞，Western Blot印迹鉴定PLXSN-LMP1组有LMP1蛋白的表达，出现了H／R—S样细胞形态改变．结论：建立了小鼠A20RS样细胞模型，为下一步建立霍奇金淋巴瘤动物模型，研究其发病机制奠定了基础．     

颗粒酶B的表达纯化和鉴定

目的：克隆颗粒酶B(GraB)，构建GraB的原核表达载体，从而建立其原核表达体系，获得高效表达的重组GraB。方法：抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA，构建GraB原核表达载体，用限制性酶切和DNA测序进行鉴定；异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物。表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定，以GraB底物测定其活性。结果：表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中，具有良好的抗原性和特异性，并能作用于GraB特异性底物。结论：建立了GraB原核表达系统。