γ干扰素与阿霉素联用对成神经细胞瘤细胞生长及凋亡的影响

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对阿霉素抗人成神经细胞瘤细胞作用的影响,并探讨其影响机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析和流式细胞仪,研究IFN-γ与化疗药阿霉素联合应用前后人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率及凋亡率;免疫组化方法检测IFN-γ作用前后半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)蛋白的表达。结果阿霉素(0.03,0.10,0.30μg/ml)单独作用24h后,SY5Y细胞的存活率分别为(95.62±13.03)%,(82.62±7.94)%和(64.84±9.19)%,各组间差异显著。IFN-γ(10,100,1000U/ml)单独作用48h后,SY5Y细胞的存活率分别为(98.37±11.25)%,(97.15±5.36)%和(98.84±7.41)%,各组间差异无显著性。IFN-γ(1000U/ml)与不同浓度的阿霉素(0.03,0.10,0.30μg/ml)联合作用后,SY5Y细胞的存活率同单独应用阿霉素组比较明显下降,差异有显著性;阿霉素(0.30μg/ml)单独作用24h,SH-SY5Y的凋亡率为(22.00±6.55)%,IFN-γ(1000U/ml)单独作用48h,凋亡率为(8.22.±4.00)%。二者联合作用后,凋亡率较单用阿霉素组比较明显升高,差异有显著性;免疫组化方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8,IFN-γ作用48h后caspase-8表达阳性。结论阿霉素对成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,IFN-γ可以使其作用明显增强。其发生机制可能是通过IFN-γ上调caspase-8蛋白的表达而实现的。     

空卵泡综合征患者家系的LHCGR基因突变检测及系谱分析

目的 探究促黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体(LHCGR)基因突变与空卵泡综合征(EFS)的关系,指导相关生殖疾病的诊治。方法 通过基因测序对一例EFS的不孕症患者进行LHCGR基因突变和家系分析。结果 该患者LHCGR 基因第11 外显子处存在纯合突变:chr2:48915113A>G,c.1823T>C,p.Leu608Pro,突变使LHCGR 蛋白在第 608 位由亮氨酸(Leucine, Leu)突变为脯氨酸(Proline ,Pro)。对该患者进行家系分析并对其家庭成员测序发现,父母在此位点属于杂合突变,先证者弟弟(46,XY。未育)属于纯合突变,先证者妹妹(育有一女孩、一男孩)属于杂合突变。结论 LHCGR基因突变可导致EFS,进而导致相关生殖疾病的发生。     

应用4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法快速观察生物支架材料体外内皮化程度

目的:建立一种新的形态学方法,以简便快捷地观察生物支架材料体外内皮化的程度。方法:实验于2005-07/2006-02在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①新鲜的猪心瓣膜经过十二烷基磺酸钠和脱氧胆酸处理,获得去细胞生物支架。②采用消化法获得脐静脉内皮细胞。③将脐静脉内皮细胞(2×105/cm2)种植于支架上,静态培养10d。用0.5mg/L的4,6-联脒-2-苯基吲哚溶液对再内皮化支架进行直接的大体染色及染色后冰冻切片,同时用苏木精-伊红染色,免疫荧光染色和扫描电镜对支架的内皮化情况进行平行观察。结果:①猪心瓣膜的细胞成分完全脱去,胞外基质保存完好。②原代分离的脐静脉内皮细胞,培养5d后融合成扁平单层,梭形或多角形,具有典型的铺路石样形态;CD31免疫荧光染色细胞表面呈现黄绿色荧光。③脐静脉内皮细胞种植10d后,支架经4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色显示内皮化程度达90%以上,观察结果与电镜观察相同;冰冻切片观察显示支架表面有一融合的内皮细胞单层,与免疫荧光染色及常规苏木精-伊红染色结果相吻合。结论:4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法可直接观察生物支架再内皮化程度,简便、准确直观,是体外构建组织的一种有效的形态学检测方法。     

骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜及其抗血栓作用

目的：分析骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜的可行性，评价其抗血栓功能。方法：实验于2005-08／2006—04在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①人骨髓来源为中山医院胸外科手术摘除的一段肋骨（患者知情同意）；取健康志愿者静脉血进行血小板黏附观察；新鲜猪心瓣膜取自上海复新屠宰场。②利用胰酶-乙二胺四乙酸、核酸酶处理猪心瓣膜制备脱细胞支架。将摘除的一段肋骨无菌条件下用含肝素的磷酸盐缓冲液充分冲洗骨髓腔，进行骨髓间充质干细胞的分离培养及体外诱导分化。⑧经体外诱导成的内皮细胞后，种植于瓣膜支架，构建组织工程瓣膜。体外培养1周后，取组织工程瓣膜及未种细胞的空支架做血小板黏附试验。以CD31、vWF对细胞进行鉴定，采用苏木精-伊红染色、免疫荧光及扫描电镜对组织工程瓣膜进行评价。结果：①骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞及其性质鉴定：骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞后，CD31及vWF染色由阴性转为阳性，呈现出“铺路石”样形态。瞧糯膜组织形态观察结果：猪心瓣膜的细胞成分完全去除，胞外基质保存良好，组织工程瓣膜表面形成一连续的内皮细胞单层。⑧血小板黏附情况：扫描电镜显示空支架表面有大量血小板聚集和黏附，而组织工程瓣膜表面无此现象，显示了良好的抗血栓性能。结论：骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞叮以用来构建具有良好的抗血栓性能组织工程瓣膜。     

哌仑西平促进豚鼠巩膜成纤维细胞分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制

目的探讨哌仑西平促进豚鼠巩膜成纤维细胞（GSF）分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制。方法体外培养GSF,采用免疫细胞化学染色法及羟脯氨酸测定法分别观察不同浓度哌仑西平溶液（1％、2％、3％、5％）作用下,GSF中Smad3、CTGF、Ⅰ型胶原表达量的变化和GSF培养上清中胶原含量的变化。结果在1％、2％、3％、5％浓度的哌仑西平溶液作用下,GSF中Smad3、CTGF、Ⅰ型胶原表达量明显增强;GSF培养上清中胶原含量均较对照组明显增加。哌仑西平的最小有效质量浓度是1％,在1％-5％浓度范围内,哌仑西平可促进GSF中Smad3、CTGF、Ⅰ型胶原表达量增强,3％哌仑西平溶液的促增强作用最强,但与5％的哌仑西平无显著差别。结论哌仑西平具有促进GSF分泌胶原和增殖的作用,其作用可能是通过smad3-CTGF信号转导通路实现的。     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的半月板纤维软骨细胞的促进增殖作用

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对培养兔纤维软骨细胞增殖的影响，探讨其作用机制。方法：培养1月龄新西兰兔半月板纤维软骨细胞，以1，10，100μg／L的bFGF作用细胞，以四氮甲基唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况，并在10μg／L bFGF作用下，采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。结果：在1～100μg／L范围内bFGF对培养纤维软骨细胞的增殖均有促进作用，10μg／L bFGF即可有显著效果。实验组细胞周期较对照组明显缩短，DNA合成前期(G1期)，DNA合成期(S期)和分裂前期及分裂期(G2M)的时间分别为14．58，12．30，11．43h，对照组分别为22．77.17．90，20．62h。结论：bFGF对培养的半月板纤维软骨细胞增殖有促进作用，能缩短纤维软骨细胞DNA合成G1期及G2M期，从而缩短细胞周期、促进细胞分裂增殖。     

Caspase-8沉默——神经母细胞瘤耐药的新机制

神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)是小儿常见的恶性肿瘤之一，I、Ⅱ期NB预后较好，而进展期NB对目前的治疗方案仍耐药。NB耐药涉及多种机制，该文介绍一种NB耐药的新机制，即Caspase-8沉默。Caspase-8沉默是由于Caspase-8基因超甲基化所致，如何恢复Caspase-8基因的表达，进而逆转NB的耐药性将成为NB治疗的一个新的研究方向。     

胫骨平台骨折的治疗和术后并发症的预防

目的：总结胫骨平台骨折手术治疗的临床结果，分析术后并发症极其相关因素，提出有效的预防措施。方法：回顾性分析本院1996年1月～2000年6月收治的98例胫骨平台骨折手术患者，骨折类型按Sehatzker分型，其中Ⅰ型14例、Ⅱ型25例、Ⅲ型16例、Ⅳ型9例、V型12例、Ⅵ型22例。除Ⅰ型骨折采用空心螺钉固定外，其它各型采用开放复位，钢板螺钉内固定，缺损处自体骨植骨。对手术后并发症及其发生的相关因素进行分析。结果：98例获得随访，平均随访时间3．6(2～5)年，功能评价采用Hohl膝关节功能分级系统，临床结果优良率达到86．7％。术后发生各种并发症22例，其中创伤性关节炎12例，关节强直4例，关节不稳6例。结论：手术内固定是治疗胫骨平台骨折的有效方法，术后并发症的发生与术前并发症及骨折的严重度密切相关，术中骨折的解剖复位，恰当的内固定，正确处理术前并发症和术后早期、适当的功能锻炼是预防术后并发症的有效措施。     

DT-60干化学化析仪的保养及测定结果的回归校正

干化学分析仪由于具有快速、方便、准确等优点,在临床检验中广泛应用特别适用于急诊检验,与全自动生化分析仪相比,在方法学上有很大差异.进行同一样品的测定有时相差很大,对于肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(FBS)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等急诊频率高的项目来说结果有一定的差距.因此在对DT-60干化学分析仪进行必要的保养的同时,参照TBA-40FR全自动生化分析仪对DT-60干化学分析仪进行回归校正,使两种仪器所测定的结果有了可比性.     

介绍一种精液涂片染色新方法

建立精液固定、快速染色新方法。经试验配制5mmol/L戊二醛磷酸缓冲液固定液固定精液涂片,经快速血球染液染色与巴氏、H—E、瑞—吉氏染色法对31例(其中不液化 7例、液化不良 8例)精液涂片固定后,脱膜率分别为:6％(2/31)、29％(19/31)、39％(12/31)、49％(15/31)。与巴民染色法对精子形态分析结果比较,异常精子百分率分别为:21％、23％,经统计学处理配对t检验无显著性差异(P>0.05)。该法操作简便,固定良好,染色迅速,精子着色清晰易辨,精细胞、不成熟精细胞和白细胞易区分,适合精液常规中精子形态的检测。