免疫层析试验与镜检法、聚合酶链反应诊断疟疾的比较

目的　评价免疫层析试验 (ICT)诊断疟疾的临床应用价值。方法　以镜检法和聚合酶链反应 (PCR)为对照 ,同时用ICT检测 89份门诊可疑疟疾感染患者的血标本。结果　ICT与镜检法和PCR比较 ,阳性检出符合率分别为 93 .4 %和 86.4 % ;敏感性分别为 90 .16%和 83 .3 3 % ;特异性分别为92 .86%和 91.3 0 %。当虫体密度 >10 0个 / μl时 ,ICT的敏感性为 10 0 % ,虫体密度 <10 0个 / μl时 ,敏感性为 72 .73 % ,虫体密度 <5 0个 / μl时 ,敏感性降低到 66.67%。 结论　ICT适用于疟疾检测的初筛 ,但尚不能完全替代镜检法     

时间分辨荧光免疫分析的研究进展及应用

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroinununoassay，TRFM)是一种新型的体外超微量分析技术。它具有高精度、自动化、大样本快速测定(1～2h就能出结果)等技术优点。其在灵敏度和准确性方面明显高于ELISA，特异性又明显高于聚合酶链反应(PCR)。因而，其应用已不再局限于临床诊断，已渗透入生物学研究的各个领域。本文就该技术的研究进展及应用做一简要综述。     

胸椎骨折合并迟发性胸腔积血的诊治体会

1 临床资料 入院情况:年龄23-45岁,性别男4例,女1例,损者伤机制:车祸4例,坠落伤1例,均为多发伤.ISS评分12-34分,平均为20分;无胸背部疼痛2例,有胸部症状者3例,无神经症状者 2例,双下肢感觉异常者3例,有胸椎骨折诊断4例,漏诊者1例, X线检查胸腔未见明显异常,无肋骨骨折,胸椎为单纯椎体骨折,范围从胸6至胸12椎体,椎体高度压缩为I-II.CT检查骨折仅累及椎体前柱或部分中柱,椎管内占位不明显.胸椎骨折行保守治疗.     

乙型肝炎病毒全基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的 建立乙型肝炎病毒（HBV）复制状态模型。方法 体外连接HBV DNA获得6.4 kb的双拷贝DNA片段,然后将其插入pcDNA3载体的Eco RV位点,通过聚合酶链反应（PCR）和酶切筛选获得头尾串联双拷贝HBV全基因重组真核表达质粒,再通过脂质体介导法转染肝癌细胞。结果 通过G418筛选,对阳性克隆细胞进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹分析,证明已将HBV全基因重组真核表达质粒转染至肝癌细胞并获得稳定表达。结论 通过脂质体介导法将HBV全基因转染至肝癌细胞,成功建立了HBV复制状态的细胞模型。     

噬菌体随机肽库筛选抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶单抗2A5的识别表位

目的利用噬菌体随机肽库技术筛选恶性疟原虫乳酸脱氢酶(pfLOH)抗体2A5的识别表位。方法以抗pfLDH的单抗2A5筛选噬菌体随机12肽库,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。通过ELISA、竞争抑制试验鉴定获得的噬菌体短肽与单抗2A5之间的结合特性。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出21株可与2A5单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列SQK(R)L,该序列与pfLDH的一级序列具有一定同源性。竞争抑制实验显示,带有核心序列的噬菌体克隆可与pfLDH竞争结合单抗2A5。结论 SQK(R)L是pfLDH单抗2A5特异识别的表位。     

抗PSMD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗PSMD10的单克隆抗体(McAb),并对其特异性进行鉴定。方法用柱层析纯化的重组PSMD10蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,用Protein-G亲和层析纯化接种杂交瘤细胞的小鼠腹水,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,Western-blot分析其特异性。通过免疫组织化学染色法检测PSMD10在肝细胞肝癌组织中的表达部位。结果筛选出2株能稳定分泌抗PSMD10单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗均为IgG2,Western-blot分析显示,2株单抗都与重组的PSMD10发生特异性结合。免疫组织化学染色分析显示,PSMD10表达在肝细胞肝癌的细胞浆内。结论制备的抗PSMD10杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单克隆抗体,可望用于进一步研究肝细胞肝癌的发生发展、诊断和治疗。     

抗凋亡蛋白Fortilin基因的克隆、表达与鉴定

目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin。方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coliBL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45000,与预期理论值相符。结论Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础。     

降钙素原的临床诊断价值

降钙素原是有激素活性降钙素的前体物质。在正常人体中降钙素原的血清浓度极低未能检测出，而在严重全身细菌性感染其血清浓度可见明显增高，并且已证实降钙素原是脓毒血症时最早出现的炎症标记物之一。本文就降钙素原的结构，来源，生物学功能及临床应用作一综述。     

人附睾分泌蛋白4光激化学发光免疫分析法的建立

目的 采用光激化学发光免疫分析技术建立快速定量检测人附睾分泌蛋白4(HE4)的方法.方法 用两株配对的HE4单克隆抗体,一株HE4单克隆抗体包被受体微球,另一株HE4单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂.结果 自制HE4试剂分析灵敏度为0.81 pmol/L,分析内和分析间的精密度分别为4.3％～7.2％和6.1％～7.7％,均低于10％,与癌抗原15-3 (CA15-3)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)无明显交叉反应,120份临床血清样本用本试剂与罗氏电化学发光检测试剂盒平行检测,其相关系数为0.95.结论 自制HE4光激化学发光免疫分析试剂各项指标均能达到临床要求,有望替代国外同类产品.