RNAi沉默PLCε对Crocin抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用调控的研究

目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响.方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLC?转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLC ε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组.MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用.RT-PCR法检测转染后对PLCε mRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cellnuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达.Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达.结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达.pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01).RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLC?联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAiPLC ε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05).结论:沉默PLC ?基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关.     

藏花素促膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的研究

目的研究藏花素诱导膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的作用及分子机制。方法通过MTT比色法分析藏花素对T24细胞增殖的影响;应用光镜观察细胞形态学的改变;Annexin V-FITC／PI荧光双标流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响,RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达变化。结果藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;随藏花素作用时间的延长,G0／G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2／M期细胞比例逐渐减少,早期凋亡细胞逐渐增多,同时可以上调Bax和下调Bcl-2的基因表达水平。结论藏花素可明显抑制T24细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能与Bcl-2和Bax等凋亡调控基因有关。     

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的：研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌(TCCB)增殖、凋亡的影响及作用机制。方法：用crocin处理后，四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对T24细胞增殖的影响；流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率。建立人膀胱癌T24细胞株裸鼠移植瘤动物模型。随机分为对照组和处理组。50 mmol·L^-1 crocin处理后，观察其对肿瘤的抑制作用；电镜观察肿瘤组织形态改变；SP-免疫组织化学法分析Bcl-2，Bax，survivin，Cyclin D₁蛋白表达。结果：Crocin能明显抑制人膀胱癌T24细胞的生长，并使T24细胞呈明显的G₀/G₁ 期阻滞现象；T24细胞早期凋亡率随crocin作用时间的延长而逐渐增加。Crocin对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用，电镜观察可见细胞凋亡的形态学改变，免疫组化结果显示，经Crocin处理后Bcl-2, survivin,Cyclin D₁的表达下调，而Bax的表达上调。结论：Crocin对人膀胱癌T24细胞株的体内外增殖均具有良好的抑制作用，其机制可能是改变细胞周期分布和诱导细胞凋亡，作用机制与下调Bcl-2, survivin,Cyclin D₁基因表达和上调Bax的基因表达有关。     

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞VEGF-C表达水平的影响

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor,VEGF-C)表达水平的影响.方法:采用MTT法测定不同浓度及不同时间藏花素对T24细胞抑制率,选出最佳药物浓度和最佳作用时间.用RT-PCR和基因芯片分别检测最佳作用时间和最佳药物浓度作用前后T24细胞VEGF-C的表达.结果:MTT显示藏花素抑制T24细胞生长具有时间和剂量依从性,3mmol/L藏花素作用48h对T24细胞的抑制率最高.RT-PCR显示藏花素组VEGF-C表达明显减少,基因芯片扫描结果中藏花素组VEGF-C表达也显著下调.结论:藏花素抑制T24细胞增殖,可能与下调VEGF-C的表达,从而减少肿瘤血管的生成有关.     

shRNA沉默PLCε基因表达对肾癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的:探讨经短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)基因表达后对肾癌786-0细胞增殖的抑制及其作用机制.方法:脂质体介导重组质粒(pGenesil-PLCε)和空质粒(pGenesil-NP)转染786-0细胞48 h后,RT-PCR检测PLCε mRNA的表达;MTT法检测转染24、48和72 h后细胞增殖的抑制率;转染48 h后采用FCM方法分析细胞周期;RT-PCR和免疫细胞化学法分析转染48 h后p27和Ki67的表达情况.结果:转染重组质粒后可明显抑制PLCεmRNA的表达,其抑制率为69.7%;转染24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为21.2%,31.6%和32.7%;FCM结果显示转染重组质粒后细胞周期的分布发生了改变,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,细胞阻滞于G0/G1期,并出现了亚二倍体"凋亡峰".RT-PCR和免疫细胞化学结果均表明p27表达上调,而Ki67表达下调.结论:RNA干扰技术阻断PLCε基因表达后可抑制肾癌786-0细胞增殖,其作用机制可能是诱导p27表达上调和Ki67表达下调.     

RNAi沉默PLCε基因对膀胱癌BIU-87细胞株的增殖调控作用

目的 探讨RNA干扰技术沉默PLCε基因表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖的抑制作用.方法 构建靶向PLCε基因特异性shRNA重组质粒pGenesil-PLCE,经脂质体介导转染BIU-87细胞株,蛋白质印迹法、RT-PCR方法检测PLCε在癌细胞蛋白及mRNA水平的表达,噻唑盐法观察重组质粒对BIU-87细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学染色分析增殖细胞核抗原(PCNA)含量改变,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 构建的重组质粒pGenesil-PLCε能明显抑制PLCE基因表达,且能明显抑制BIU-87细胞增殖;转染重组质粒0、24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为2.01%、32.85%、39.78%、37.19%,重组质粒组与对照组、阴性质粒组比较,差异有统计学意义(P<0.01).细胞内PCNA表达下调了33.08%;G0/G1期细胞(71.50±4.48)%与空白对照组(40.75±2.30)%、阴性质粒组(40.00±1.76)%比较明显增多,G2/M期细胞(8.16±0.51)%与空白对照组(31.20±1.76)%、阴性质粒组(35.94±1.58)%相比减少.差异均有统计学意义(P<0.01),细胞阻滞于G0/G1期,细胞增殖状态受到明显抑制.结论 PLCε基因在促进膀胱癌细胞增殖中发挥莺要作用,可能成为膀胱癌生物学治疗潜在的分子靶点.     

糖尿病视网膜病变患者血清S100A8/A9变化与视网膜炎症反应的关系

背景 炎症-免疫机制是目前糖尿病视网膜病变(DR)机制研究的热点之一,研究表明,S100A8/A9蛋白复合物与炎症相关,但S100A8/A9蛋白是否参与DR的发生和发展有待探讨. 目的 测定糖尿病(DM)及DR患者血清S100A8/A9蛋白质量浓度,探讨其在疾病发生和发展中的作用. 方法 采用病例对照研究设计,选取2014年1-6月在上海市徐汇区中心医院诊治的DR患者(DR组)和无视网膜病变的2型DM患者(DM组)30例,以及健康体检者(正常对照组)30人,依据DR的病变程度将DR组亚分为非增生性DR (NPDR)组和增生性DR (PDR)组.采集受检者空腹静脉血并分离血清,采用ELISA法测定受检者血清S100A8/A9蛋白质量浓度,分别采用免疫透射比浊法和免疫凝集法测定受检者血清超敏C反应蛋白(hsCRP)质量浓度和糖化血红蛋白(HbAlc)含量.结果 DR组、DM组和正常对照组受检者血清S100A8/A9质量浓度分别为(9.74±0.59)、(11.41±0.64)和(6.46±0.62) μg/L,其中DM组和DR组患者血清S100A8/A9质量浓度均明显高于正常对照组,DM组患者血清S100A8/A9质量浓度明显高于DR组,差异具有统计学意义(均P=0.00);DR组、DM组和正常对照组受检者血清hsCRP质量浓度分别为(1.40±0.34)、(1.27±0.13)和(1.11±0.12) mg/L,其中DR组、DM组患者血清hsCRP质量浓度均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P=0.00);DR组和DM组患者血清HbAlc含量明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P=0.00),而DR组与DM组差异无统计学意义(P=0.12).NPDR组与PDR组间患者血清S100A8/A9和hsCRP质量浓度及血清HbAlc含量的差异均无统计学差异(t=-0.10,P=0.92;t=-0.17,P=0.87;t=0.66,P=0.51).血清S100A8/A9蛋白质量浓度与血清hsCRP质量浓度间呈弱正相关(r=0.36,P=0.00). 结论 S100A8/A9蛋白是炎症标志物分子之一,可能参与DM相关微血管病变的发生及发展,控制血糖浓度能够减缓DM患者的炎症反应.     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

老年患者泌尿系感染革兰阴性杆菌的分布及耐药情况分析

目的了解本院老年患者泌尿系感染革兰阴性杆菌分布特点及耐药特征,指导临床合理使用抗菌药物。方法采用西门子Microscan WalkAway 96plus型全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药敏试验,统计分析317株革兰阴性杆菌的分布及耐药率。结果尿液培养检出的317株革兰阴性杆菌中,位于前5位分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌。药敏结果显示:肺炎克雷伯产ESBLs株耐药率小于30%的药物为亚胺培南(25%)及替卡西林/棒酸(28.1%)。大肠埃希菌产ESBLs株对亚胺培南、氧哌嗪青霉素/他唑巴坦、替卡西林/棒酸、阿莫西林/棒酸、丁胺卡那霉素较敏感,耐药率介于3.4%～28.7%。鲍曼不动杆菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌的耐药率都有着不同程度的变化。结论老年患者泌尿系感染细菌以革兰阴性条件致病菌为主,耐药性呈增长趋势,应加强抗菌药物的监督管理,注重医院感染的控制,防止医院感染尤其是多重耐药菌株和泛耐药菌株的传播。