用显微分光光度计对几种不同类型肺癌癌细胞DNA含量的初步观测

本文用显微分光光度计对39例手术切除的不同组织学类型的人体肺癌标本癌细胞核的DNA含量进行了测量。其中高、中、低分化的鳞癌分别为3、6和5例;高、中、低分化的腺癌分别为3、5和5例;未分化癌大细胞型和小细胞型各为3例和6例。结果发现各类型肺癌的DNA含量均有统计学上的差异(P<0.01)。各DNA含量直方图的峰值部位及分布范围亦不同。从而提示了根据DNA含量的不同,可能有助于肺癌组织学类型及其分化程度的判别:而DNA含量直方图对肺癌类型的判别亦可能是有益的。     

肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶

目的 蛋白质组学分析鉴定与肿瘤细胞共培养T细胞的表达差异蛋白.方法 双向电泳分离有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白,PDQuest软件分析筛选肿瘤细胞诱导表达异常的蛋白点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)对酶解消化样品进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,结合数据库搜索鉴定蛋白质.结果 PDQuest分析有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白双向电泳图谱,70余个蛋白点表达水平差异显著,其中与肿瘤细胞共培养的T细胞有一明显表达下调的蛋白点,质谱分析结合数据库检索表明该蛋白点为腺苷脱氨酶.结论 肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶.     

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

目的：检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法：采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞和CD8^high T细胞表面KIR分子表达，并与正常外周血比较。结果：慢性乙型肝炎患者外周血中CD8^high T细胞KIR表达明显高于对照组CD8^high T细胞。正常外周血CD4^＋T细胞几乎不表达KIR，慢性乙型肝炎患者外周血中CD4^＋T细胞表达KIR。结论：慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。     

免疫磁珠法分离人外周血CD4+CD25+调节性T细胞

目的 建立人外周血单个核细胞中CD4 CD25 调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离力(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率.方法 采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人周血单个核细胞中的CD4 CD25 调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CIM细胞,再用抗CD25 的磁珠阳性分选CD4 CD25 T细胞.分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;内因子染色检测其转录因子FOXV3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4 CD25-T细脆殖抑制效应.结果 阴性分选CD4 T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4 CD25 Treg细胞的纯度(95.1±1.2)%.胞内因子染色FOXF3在CD4 CD25 Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%.3H-TdR掺入法检测其对CIM CD25-T细胞具有明显的抑制作用.结论 采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4 CIY25 Treg,为进一步研究其功能提供了方便.     

羊胎盘免疫调节因子对 60Co γ射线致免疫损伤小鼠T细胞免疫功能的促进作用

目的 研究羊胎盘免疫调节因子对⁶⁰Co γ射线辐射所致免疫损伤小鼠T细胞功能的影响。方法 5 Gy ⁶⁰Co γ射线一次性全身照射建立BALB/c小鼠免疫损伤动物模型,MTT法测定ConA 诱导的T淋巴细胞的增殖反应;直接免疫荧光抗体标记,FACS分析测定脾淋巴细胞CD₃、CD₄、CD₈阳性细胞百分率、胸腺淋巴细胞CD₄ CD₈亚群细胞数目;ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ水平。结果 羊胎盘免疫调节因子显著促进ConA 诱导的T淋巴细胞增殖,提高⁶⁰Co γ射线所致免疫损伤小鼠CD₃⁺、CD₄⁺和CD₈⁺阳性细胞百分率及胸腺细胞CD₄⁺ CD₈^-和CD₄^- CD₈⁺单阳性亚群数目,减少胸腺细胞CD₄⁺ CD₈⁺双阳性亚群数目,促进小鼠血清IL-2、IFN-γ的生成水平。结论 羊胎盘免疫调节因子对⁶⁰Co γ射线辐射所致免疫损伤小鼠T细胞免疫功能具有促进作用。     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究

目的 通过检测乙型肝炎(简称乙肝)疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞(CD4+ CD25+ regulatory T cell,简称Treg细胞)的频率,探讨CD4+ CD25+ 调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和(或)无应答之间的关系.方法 利用流式细胞分析方法 对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析,另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照.结果 强应答组Treg细胞的频率为(4.32±1.21)%,弱应答组Treg细胞的频率为(7.01±1.06)%,无应答组Treg细胞的频率为(12.75±2.01)%,无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高(t=8.426,t=3.289,P值均＜0.01).结论 乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞频率升高存在一定关系.     

肌腱愈合及粘连形成机制的研究：胰岛素样生长因子1基因真核表达载体的构建及表达

目的：探讨真核表达载体介导外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染肌腱细胞的可能性。方法：组织块法培养原代肌腱细胞，体外重组真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1，并以脂多胺DOGS为介导转染培养的肌腱细胞，反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IGF-1mRNA的表达，ELISA法检测IGF-1活性蛋白表达。结果：成功构建真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1；RT-PCR检测显示转染后的肌腱细胞成功表达IGF-1mRNA；ELISA结果显示转染组IGF-1蛋白表达较对照组明显增高(t=-2．873，P&;lt;0．05)。结论：重组的真核表达载体pcDNA3．1(+)-IGF-1能够将IGF-1cDNA成功导入肌腱细胞并表达。     

SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

MicroRNAs途径在RAW264.7细胞中作用的初步研究

目的通过检测microRNAs生成的关键酶Dicer在RAW264.7细胞不同功能状态下的表达差异研究microRNAs途径在其中产生的作用。方法采用QRT-PCR、流式细胞术等对RAW264.7细胞在不同功能分化状态下的Dicer酶进行检测。结果GMCSF与MCSF分别刺激RAW264.7细胞诱导其增殖分化后,Dicer酶的mRNA水平显著增高,但随刺激时间呈现不同趋势(P<0.01);在诱导凋亡死亡状态下,RAW264.7中Dicer酶的表达下降30%(P<0.01);LPS与IL-4分别诱导RAW264.7细胞分化为M1和M2型,Dicer的表达与M1、M2型相关炎性因子的表达有相关性。结论 MicroRNAs调控途径参与并影响RAW264.7不同功能状态。     

内皮细胞表达CD137分子介导对T细胞的抑制效应

目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应.方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表达变化;CCK-8试剂盒检测T细胞存活率,并观察用融合蛋白抗-CD137阻断CD137-CD137L共刺激通路后T细胞分泌细胞因子的变化.结果采用细胞共培养后,T细胞分泌IL-2、IL-10和IFN-γ的水平下降,而且CD25、CD69的表达水平降低,T细胞存活率下降,应用抗-CD137单克隆抗体阻断CD137-CD137L相互作用后,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平升高,CD25、CD69的表达上调,T细胞存活率上升.结论活化的内皮细胞诱导表达CD137蛋白分子与活化的T细胞上诱导表达的CD137L相互作用,通过CD137L向T细胞内传递抑制信号,抑制了T细胞合成和分泌细胞因子的功能.表明CD137-CD137L信号通路在内皮细胞与T细胞的信号作用中有着重要的地位.