人诱导多能干细胞分化来源心肌细胞特征及促成熟方法研究进展

人诱导多能干细胞分化来源的心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs)为心脏修复、心脏药物测试、体外心脏建模等提供了理想细胞来源。但hiPSC-CMs与心肌细胞相比并不成熟,表现在缺乏某些特定基因表达,结构、代谢、电生理不成熟,Ca 2+处理水平低等方面。许多研究都聚焦于促进hiPSC-CMs成熟的方法,包括生化刺激、物理刺激、共培养、3D培养、miRNA等。本文对hiPSC-CMs特征及其促成熟方法进行综述,并展望该领域的发展方向。     

Torin1、Nutlin-3a促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究

目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin-3a和Torin1可以抑制3T3细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。Western blot检测结果显示,Nutlin-3a组和Torin1组cTnT、cTnI蛋白表达量相比DMSO组有增高的趋势。qRT-PCR结果表明,Torin1处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中Torin1组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1组和Nutlin-3a组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1组和Nutlin-3a组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。结论用Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。     

组织工程软骨构建种子细胞来源的研究进展

耳、鼻、喉、气管及关节等部位均主要由软骨构成,由于软骨自愈能力欠佳,使得各种原因引起软骨缺损的修复一直以来都是临床的一大难题。如应用异体软骨组织和人工组织代用品存在着严重的免疫排斥反应;自体软骨组织移植则必须以牺牲人体正常组织为代价,具有一定创伤性且来源有限。组织工程软骨构建的出现有望解决上述问题。而理想的种子细胞来源是软     

小肠黏膜下层复合骨髓间充质干细胞体外构建心肌组织薄片的实验研究

目的 探讨利用小肠黏膜下层（SIS）复合骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外构建心肌组织薄片的可行性。方法 将自大鼠骨髓分离培养的BMSCs经5-氮胞苷（5-Aza）诱导培养3周后种植在经脱细胞处理的SIS浆膜面,在体外动态条件下共培养2周,构建组织工程心肌组织薄片,并进行病理组织学、超微结构和免疫组织化学染色观察。结果 与BMSCs体外共培养2周的SIS经苏木精-伊红（HE）染色显示,细胞在SIS上不只局限于材料表层,呈多层分布,部分细胞逐步向深层迁移和渗透。扫描电子显微镜观察发现,细胞较好地在SIS上黏附、生长和迁移,细胞分泌大量的细胞外基质。免疫组织化学染色结果显示,SIS上的细胞为表达α-actin、cTnⅠ和connexin-43的心肌样细胞。结论 在体外将SIS复合经5-Aza诱导的BMSCs,成功地初步构建出组织工程化心肌组织薄片。SIS是一种良好的心肌组织工程生物支架材料。     

腹腔镜下良性卵巢囊肿剥除术92例分析

目的：评价腹腔镜良性卵巢囊肿剥除术的效果。方法：回顾分析92例腹腔镜下良性卵巢囊肿剥除术的临床资料。结果：92例均获成功。术中单纯性囊肿36例,内膜异位囊肿23例,卵巢成熟畸胎瘤20例,浆液性囊腺瘤10例,黏液性囊腺瘤3例。囊肿直径为2～13cm,平均7.5cm,手术时间为30～150min,平均70min,术中出血20～230ml,平均65ml,术后住院4～7d,平均5d,随访1～36个月,平均12个月,无复发。结论：腹腔镜下良性卵巢囊肿剥除术具有传统与微创的优点,安全可行。     

清醒与麻醉状态经典型热射病大鼠模型比较

目的 构建清醒状态经典型热射病(CHS)大鼠模型,与传统麻醉状态CHS大鼠模型进行比较,为研究自然状态下CHS的发病机制奠定基础.方法 雄性SPF级SD大鼠32只,随机分为高温清醒状态组(C-CHS)、高温麻醉状态左股动脉插管组(N-CHS)和相应的正常对照组(C-NC和N-NC组),每组8只.CHS组大鼠予39℃热打击,监测核心体温(Tr)和动脉收缩压(SBP)变化,比较Tr、SBP调节反应和生存时间的差异.结果 C-CHS和N-CHS组大鼠表现为不同的Tr和SBP调节特征.尽管最大Tr无显著差异,但是与C-CHS组大鼠比较,N-CHS组大鼠核心体温上升速率显著加快(P＜0.05),成模时间显著缩短(P＜0.05),总热负荷和重度热负荷均显著减少(P＜0.05),预后也更差(p＜0.05).结论 清醒状态CHS大鼠模型接近大鼠生理状态,更适合于实验性大鼠CHS的研究.对于清醒状态CHS大鼠模型的进一步研究,可以促进对CHS发病机制的理解.     

呼吸机管道系统清洗和消毒方法探讨

[目的]探讨呼吸机管道清洗、消毒方法,控制呼吸机相关性肺炎(VAP)发生.[方法]选择10台使用后的呼吸机,采用无菌盐水拭子涂抹呼吸机管道出入口内面,雾化罐内表面培养分离细菌;采取规范的清洗、消毒程序后,仍在上述部位采样培养分离细菌.[结果]未清洗、消毒前,污染菌主要有铜绿假单胞菌、表面葡萄球菌、革兰阳性杆菌等;采取规范的清洗、消毒程序处理后,无菌生长.[结论]呼吸机污染是医院感染潜在的、不可忽视的危险因素,规范呼吸机管道的清洗、消毒程序,对预防医院感染有重要意义.     

胃病患者不同舌苔的细菌学及炎性细胞观察

目的:观察胃病患者不同舌苔的细胞学及炎性细胞变化,以探讨胃病患者黄苔的发生机制.方法:66例胃病患者,均经胃镜及病理检查明确诊断,分为黄苔组及白苔组,各33例,经刮舌获取舌苔进行细菌培养及直接涂片查白细胞及上皮细胞.结果:黄苔组的细菌阳性率(涂片法)为60.6%,白苔组为36.4%,两组间的差异有统计学意义(P＜0.05);黄苔的细菌数量、炎性细胞及上皮细胞均较白苔增多(均P＜0.05).结论:胃病患者出现黄苔与舌苔中的细菌数量、炎性细胞及上皮细胞增多有关.     

类胚体中残留未分化胚胎干细胞的初步研究

目的 探讨类胚体中残留未分化胚胎干细胞(ESC)的特性.方法 小鼠R1和Oct-4-GFP转基因ESC细胞株,体外类胚体分化20 d后消化打散,重新给予ESC常规培养液培养.观察类胚体中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光染色检测和观察残留细胞表面标志物及体外再次分化能力.将残留细胞扩增后注射入裸鼠背部皮下和大腿肌肉内,6周后注射部位取材进行大体和组织学检查.结果 分化20 d的类胚体中存在残留未分化ESC,生长形态呈克隆样,表达SSEA1、CD31、CD9和Oct-4等未分化ESC标志;细胞能反复传代,并可在体外再次分化和残留.残留细胞注射部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织.结论 胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化全能ESC,残留细胞在体内、外可再次分化,并能在体外分化中再次残留.     

计算机第二课堂教学开展的实践与探索

第二课堂活动的主要目的是丰富中学生的学习生活,激发其创新精神,培养其实践能力.计算机第二课堂教学是培养计算机专业后备人才的重要方式,它不仅推动学校信息学教育的深入开展,而且为学生提供获取科学知识和实践技能的新途径,使得学生的学习富有独立性和创造性.现从计算机软硬件设备建设、提升教师技术水平、做好延伸教学的准备工作和采用多种灵活的教学形式等方面探讨搞好计算机第二课堂教学的做法.