茶多酚对氧化型低密度脂蛋白损伤后内皮细胞微管蛋白的影响

目的研究茶多酚(TP)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)α-微管蛋白和β-微管蛋白的影响。方法将实验分为四组TP组(25μg/ml),ox-LDL(200μg/ml)+TP组(25μg/ml),ox-LDL组(200μg/ml)及对照组(等体积溶剂)。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性,免疫组化法测定α-微管蛋白和β-微管蛋白的表达。结果MTT结果显示,ox-LDL可明显抑制HUVEC增殖,与对照组相比,增殖率降低了40%(P<0.05)。TP和ox-LDL共同培养,细胞增殖率明显上升,与对照相比仅降低7.8%(P>0.05)。免疫组化结果显示,ox-LDL下调HUVECα-微管蛋白和β-微管蛋白表达,分别为35%(P<0.01)和40%(P<0.01),TP与ox-LDL共同培养后,α-微管蛋白表达无明显升高(12%,P>0.05),β-微管蛋白表达升高了32%(P<0.05)。结论TP具有抑制ox-LDL诱导的HUVEC生长抑制的作用,且可以逆转ox-LDL引起的β-微管蛋白表达的降低作用。     

人源治疗性抗体研发技术进展

1986年美国食品和药物管理局（Food and Drug Administration,FDA）批准了首个单抗药物。30多年来,抗体药物领域的发展日新月异,截至2019年12月,获得FDA批准上市的单抗药物达79种,用于治疗癌症、自身免疫性疾病、传染病等多种疾病。人源抗体具有特异性强、不良反应小的优点,已经成为新药开发的主流,全球销售额排名前十的药物中,人源抗体药物占据了半壁江山。本文着重对近年来抗体药物研发技术进展,包括抗体人源化、噬菌体展示、转基因小鼠、单细胞PCR等进行述评。     

茶多酚对内皮细胞粘附分子表达影响

目的 研究茶多酚(Tea Polyphenols,TP)在同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)粘附分子表达改变中的作用.方法 将处于对数生长期的HUVEC分为对照组、TP组、Hcy组、TP Hcy组,采用四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)测定细胞活性,免疫细胞化学方法分析细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和E选择蛋白(E-selectin)的表达.结果 MTT结果显示,Hey可明显抑制HUVEC的生长(36.0%,P＜0.05),加入茶多酚后则明显降低Hcy所致的细胞生长抑制(7.9%,P＞0.05).免疫细胞化学方法测定结果显示,与对照组比较,Hcy组细胞ICAM-1和E-selectin表达分别升高29.9%和37.7%(P＜0.05);茶多酚与Hcy共同培养后,ICAM-1和E-selectin表达分别下降了17.9%和24.6%(P＜0.05).结论 TP对Hcy诱导的HUVEC粘附分子ICAM-1和E-selectin表达改变有一定的逆转作用.     

子痫的产科处理与护理体会

<正> 子痫是产科急症,是妊娠中毒症最严重的阶段,随时都威胁着母子生命,如不积极处理产科情况则会再次发生抽搐,而且越来越严重。因此,当发生子痫时,除立即控制抽搐外,还应不失时机地进行产科处理,以保证母子生命的安全。我科从93年4月至96年4月共收治子痫38例,现将处理与护理体会总结如下: 二、临床资料:38例子痫,死亡5例,占13.2％,治愈33例,占86.8％;其中产前子痫24例,占63.2％,产时子痫9例,占23.7％,产后子痫5例,占13.1％;年龄18—31岁;农村29例,占76.3％,城市9例,占23.7％;经产妇4例,占10.5％,初产妇     

抗人CD40功能性嵌合抗体的制备及其高效表达

目的构建抗CD40嵌合抗体的真核表达载体,实现在真核细胞中的高效表达。方法采用RT-PCR法,从分泌鼠源抗人CD40抗体的杂交瘤细胞系5C11中钓取其轻、重链基因,进行序列测定。将5C11轻重链可变区基因分别克隆入表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体（c5C11）的轻链真核表达载体5C11L-pCMV及重链真核表达载体5C11H-pCMV。将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,利用夹心ELISA法测定上清中c5C11的浓度,通过流式细胞术检测c5C11与膜抗原的特异性结合。通过生物信息学相关方法对c5C11的氨基酸序列进行合理改造,尝试在保持生物学功能的基础上提高c5C11的表达量。结果成功钓取鼠源单抗5C11的轻重链可变区基因并构建了真核表达载体,实现了c5C11的分泌表达;嵌合抗体较好地保留了鼠源母本抗体的抗原识别能力。利用计算机辅助设计,一定程度上提高了c5C11的表达量。结论为后续研究嵌合抗CD40抗体对B淋巴瘤等肿瘤的治疗提供了一定的依据。     

急性有机磷中毒的院前急救护理

急性重度有机磷中毒发病急、死亡率高,通过院前及时进行催吐、洗胃、清除污染皮肤的毒物,并肌肉注射长托宁、静脉注射阿托品、静脉滴注解磷定,抢救中加强病情的动态监测,做好预见性的抢救准备,重视清醒患者的心理护理,可以有效缓解中毒症状。总结15例急性大量口服有机磷中毒患者的院前急救护理经验。     

抗相思子毒素抗体的嵌合改造与功能评价北大核心CSCD

目的:制备并评价针对相思子毒素(Abrin)的具有中和活性的特异性人源化嵌合抗体。方法:从鼠源单抗中钓取抗体可变区轻重链序列4条,两两配对载入人源化IgG1表达载体pFRT-KIgG1,经表达、纯化等步骤得到4株人源化嵌合抗体;间接ELISA测定嵌合抗体与Abrin的结合力;ForteBio测定嵌合抗体与Abrin的亲和力;体外细胞学实验鉴定抗体的中和功能;无细胞体系评价抗体是否阻碍Abrin抑制荧光酶合成;选择6~8周雌性BALB/c小鼠,腹腔注射Abrin和不同浓度抗体,观察抗体的体内保护效应;流式细胞术分析抗体是否阻断Abrin与细胞的结合。结果:ELISA和ForteBio结果显示,4株嵌合抗体中仅H1L1嵌合抗体与Abrin的结合[EC_(50)=(0.1212±0.0040)μg/ml和亲和力(亲和常数3.97×10^(-10)M)]与母本抗体[EC_(50)=(0.15825±0.00235)μg/ml,亲和常数5.59×10^(-10)M]相似;体外细胞保护试验显示,H1L1[EC_(50)=(3.7455±0.0575)ng/ml]约为母本抗体[EC_(50)=(1.5825±0.5335)ng/ml]中和作用的42%;无细胞体系荧光素酶合成试验显示,H1L1[EC_(50)=(0.6729±0.0755)μg/ml]与母本抗体[EC_(50)=(1.0365±0.0045)μg/ml]接近,均能逆转Abrin抑制蛋白合成的作用;BALB/c小鼠体内中和保护实验结果显示,H1L1与10D8均能提供良好的体内保护作用;流式细胞术分析发现,H1L1并不能通过抑制Abrin黏附或进入细胞抑制其毒性。结论:4株嵌合抗体中,仅H1L1是轻、重链正确配对且拥有良好中和活性的候选抗体,有潜在的用于Abrin中毒救治的开发价值,应用前景良好。     

人IgE Cε2-4蛋白稳定表达细胞株的建立与鉴定

目的 建立稳定高表达人IgE Cε2-4蛋白(E24)的工程细胞株,考察E24蛋白与膜受体(FceR Ⅰ)的结合.方法 从SKO-007细胞中钓取E24基因,分别克隆人真核表达载体PcDNA3.1(+)(需要在E24基因前加信号肽序列)和pCMV-L载体;瞬时转染293T细胞,利用双夹心ELISA法鉴定转染上清中的目的 蛋白;选择表达量相对高的质粒转染CHO细胞,G418筛选获得稳定细胞株;RT-PCR法在转录水平上检测E24基因,ELISA法鉴定稳定株上清中的E24蛋白,流式细胞术检测E24蛋白与FceR Ⅰ的结合.结果 成功构建了3种真核表达质粒SP-E24-P3.1、SP Ⅱ.E24-P3.1和E24-PL,瞬时转染293T细胞,上清中的目的 蛋白表达量分别为19.1、19.4和8.7μg/ml.以质粒SPⅡ-E24-P3.1转染CHO细胞,经3轮亚克隆获得了2株稳定高表达E24蛋白的细胞株,表达量均超过25 μg/ml.RT-PCR可扩增出细胞株中的E24基因;流式细胞术显示E24蛋白可以与FceR Ⅰ呈剂量依赖性的结合.结论 经筛选获得了2株表达E24蛋白的工程细胞株,且E24可以特异性的结合FceRⅠ.     

2型糖尿病患者生存质量相关因素的研究

目的探讨影响2型糖尿病患者生存质量的相关因素，为制定针对患者的干预措施提供依据。方法采用糖尿病人生存质量特异性量表(DSQL)及相关因素调查表对210名2型糖尿病患者进行问卷调查，并进行简相关和逐步回归分析。结果糖尿病生存质量与生理、心理、社会多种因素有关。逐步回归分析表明，应对倾向、学历、饮食控制、主观支持、病程、支持利用度被选入回归方程。结论应加强对2型糖尿病患者生存质量各种影响因素的干预，努力提高其生存质量。