人源性治疗性抗体的应用与制备进展

治疗性抗体在疾病的诊断和治疗方面具有重要意义。鼠源性单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、亲和力低和半衰期短等,随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成熟,人源性治疗性抗体飞速发展,在肿瘤治疗、自身免疫性疾病的治疗、感染性疾病的治疗及减轻移植排斥反应、体内定位诊断、免疫调节等方面发挥重要作用。本文综述了治疗性抗体在肿瘤及免疫、移植等疾病中的治疗应用及人源性治疗性抗体的制备。     

人源性抗体库技术及其应用前景

抗体是机体免疫系统的重要效应分子。抗体制备经历了多克隆抗体（PcAb）、单克隆抗体（McAb）、和基因工程抗体的过程。抗体库技术的问世,加速了人源化抗体的开发,生产了大量用于研究、更适于体内诊断和治疗的基因工程抗体。抗体药物已成为生物制品类药物的重要部分,截止2004年底,经美国食品药品管理局（FDA）批准的抗体药物已有近20种,其中80％是基因重组抗体,目前正在进行临床验证的抗体药物也有数百种。重组人源性抗体作为药物具有广阔的应用前景。     

全人源抗体制备技术研究进展

抗体是能与相应抗原特异结合的具有免疫功能的球蛋白.1888年 Emile Roux及Alexander Yersin 从白喉杆菌的培养上清液中分离到可溶性毒素,后者注入动物体内可引起典型的白喉发病症状.Von Behring 及其同事Kitasato(北里)报告,以白喉或破伤风毒素免疫动物后,其血中可产生一种中和毒素的物质,能阻止毒素引发疾病.来自实验动物的抗毒素血清用于感染的患儿,获得明显的治疗效果,尤其是在发病的早期.于是将能中和毒素的物质称为抗毒素(antitoxin),后引入抗体一词.     

人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定

目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。     

卵巢癌人源性核糖体展示抗体库的构建

目的构建库容量大、多样性好的卵巢癌人源性核糖体展示抗体库。方法从10名卵巢癌患者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过聚合酶链式反应（PCR）技术扩增人全套重链可变区基因（variable region of heavychain,V_H）和轻链可变区基因（variable region of light chain,V_L）,用重叠PCR技术对它们进行拼接,构建卵巢癌人源单链抗体库,并连接T载体转化大肠杆菌,经蓝白筛选,挑选阳性克隆,测序鉴定。结果成功构建卵巢癌人源单链抗体库,库容6.5×10~（13）,经测序验证多样性良好。结论成功构建的卵巢癌人源单链抗体库可用于进一步筛选目标抗原,为开发治疗性人源抗体奠定了实验基础。     

人源性噬菌体抗体库中抗CEA单抗的筛选与初步鉴定

目的：探讨利用噬菌体抗体库技术制备抗CEA的人源性单抗的可行性。方法：以纯化的CEA为抗原，应用噬菌体表面呈现技术，通过3轮亲和 富集及2轮淋巴细胞吸附实验，从已构建好的人源性噬菌体抗体库中筛选出抗CEA的人源性单抗，随机挑出10株单克隆在大肠杆菌中进行表达，并采用ELISA 、SDS－PAGE及基因测序进行初步鉴定。结果：ELISA显示有9株单抗具有与CEA特异性结合的能力，挑选其中2株具有较高亲和力的单克隆，经12％SDS－PAGE蛋白电泳，在分子量约为25kd处可见一新增蛋白带，与基因编码蛋白的理论计算相符合，基因测序结果与Gene Bank等相比对具有较高的序列同源性。结论：噬菌体抗体库技术是研制人源性单抗的有效途径。     

人源化IgM抗体小鼠生物学特性的研究

我中心与英国 Babraham研究所合作 ,引进了人源化 Ig M抗体小鼠。该小鼠的 Igμ链、κ链基因被敲除后 ,再通过转基因技术将人 Ig H、Igκ、Igλ基因导入小鼠基因组内 ,产生人源化 Ig M抗体小鼠。作者介绍了人源化 Ig M抗体小鼠的生长繁殖特性和血清中人源和鼠源Ig含量测定的实验结果 ,为制备人源化单克隆抗体做好前期准备人源化IgM抗体小鼠生物学特性的研究@黄裕香$上海转基因研究中心!上海201203 @马炜炜$上海转基因研究中心!上海201203 @汤家铭$上海转基因研究中心!上海201203 @成国祥$上海转基因研究中心!上海201203IgM;…     

人源性抗地高辛单链抗体（scFv）及diabody的获取

目的：从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体（scFv），并构建双价抗体（diabody）．方法：以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选，4轮后挑取集落，用ELISA法鉴定其特异性，并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序分析，选取活性好的抗体基因进行改造，构建diabody．结果：在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象，获得4株可与Dig特异性结合的人源单链抗体，经DNA指纹分析及测序分析证明为不同抗体基因，     

抗埃博拉病毒治疗性抗体研究进展

埃博拉病毒(EBOV)是一种烈性病毒,能够引起人类和灵长类动物发生埃博拉病毒病,死亡率高达50%~90%。它的生物安全等级为4级,高于艾滋病和严重急性呼吸综合征(SARS),后二者均为3级。2014年以来,EBOV在西非蔓延,已经夺去了数千人的生命。目前,在研的针对EBOV的防治药物包括疫苗、小分子药物和抗体等,其中抗体药物以其相对安全、靶向特异、副作用小等特点而倍受关注。国际上已经报道了16F6、KZ52等多株单抗,以及MB-003、ZMAb和ZMapp等在体内展现出优于单一抗体疗效的"鸡尾酒抗体组合"。实验性抗体ZMapp在应急条件下用于EBOV感染者的治疗,疗效显著;在中国,类似的抗体组合MIL77也完成应急储备,可在应急条件下用于患者治疗。本文将简述抗EBOV治疗性抗体的研究进展。     

治疗性单克隆抗体研究进展及临床应用现状

19世纪末,动物来源的抗血清用于肺炎、白喉、麻疹等传染病的早期治疗,显示了一定效果,但毒副作用大,特别是异源蛋白易产生过敏反应.1975年杂交瘤技术问世,开创了抗体技术的新时代.单克隆抗体(以下称单抗)高度的特异性和均一性使其在实验研究和临床检测中得到了广泛应用.自1982年单抗首次应用于人体治疗以来,应用单抗治疗肿瘤、自身免疫疾病,组织器官移植排斥反应等疾病的报道渐多,同时鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显,使单抗在人体治疗中的应用受到很大限制.随着分子生物学技术的发展,尤其是抗体库技术、鼠抗体人源化改造技术以及近年利用转基因技术研制完全人抗体的突破,为单抗进入临床治疗提供了良好的应用前景.本文就单克隆抗体人源化改造、抗体库技术、转基因小鼠技术研究进展及目前单抗在临床治疗中的应用现状予以综述.     

艾滋病合并痴呆的研究进展

在高效抗逆转录病毒治疗（HAART）用于人免疫缺陷病毒（HIV）感染者以前,艾滋病痴呆综合征（ADC）是艾滋病患者死亡的一个重要原因。但随着对ADC的发病机制的深入研究及HAART在HIV感染者中的广泛运用,ADC的发病率明显下降,预后也有很大的改善。本文就艾滋病痴呆的研究进展进行综述。     

人体铸型标本制作技术及研究进展

目的概述人体解剖学铸型标本制作技术及研究进展。方法通过国内外文献的检索,对铸型标本制作技术及方法步骤,进行分析、归纳、概括。结果人体解剖铸型标本,已应用于我国高等医学院校的教学、科研和临床,效果明显。结论随着铸型标本制作技术的发展、与现代高科技技术的紧密结合,必将对我国临床医学的发展和医学理论教学起推动作用。     

幽门螺杆菌疫苗研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H·pylori)是世界上感染率较高的病原菌之一,我国流行病学研究发现中国约90%以上的十二指肠溃疡和70%以上的胃溃疡患者存在着H·pylori感染[1]。研究表明H·pylori除与慢性胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、胃癌等消化系统疾     

去泛素化酶X染色体连锁的泛素特异肽酶9的研究进展

X染色体连锁的泛素特异肽酶9(ubiquitin-specifitin peptidase 9 x-Linked,USP9X)是去泛素化酶中的一种。泛素化与去泛素化是重要的蛋白质翻译后修饰,去泛素化酶能从特异性底物上移除泛素异肽酶类从而逆转泛素化进程。USP9X在许多生物进程(包括胚胎发育、细胞黏着与极化、凋亡、转录调控等)中都有着重要的作用。迄今为止,已发现USP9X在多种类型的恶性肿瘤中都存在着表达异常,而且与肿瘤的分期及预后相关,甚至还可能参与了肿瘤化疗的耐药,是近年来研究的热点。因此,针对USP9X的靶点治疗将会为难治性肿瘤开辟出一条新的路径,对其更进一步研究有着深远意义。     

RNA干扰技术的演进及其在基因功能和基因治疗研究中的应用

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指双链RNA（double strands RNA, dsRNA）引起的mRNA水平互补序列基因表达的关闭,即序列特异性转录后基因沉寂,是生物体进化过程中抵御外来基因和病毒感染的进化保守机制。RNA干扰技术不仅被广泛地运用于基因功能研究,而且在基因治疗中显示出极大潜力。体外RAN干扰技术包括双链RNA的合成、基因导入及干扰作用评价等。本文阐述了近年来这一新兴生物学技术的发展与演进以及在基因功能及基因治疗研究中的应用和前景。     

噬菌体抗体库技术构建HPV16 E7人源化单克隆抗体

目的：构建抗ＨＰＶ１６Ｅ７的噬菌体抗体库。方法：由感染者抗凝血中分离外周淋巴细胞，提取细胞总ＲＮＡ，以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），用人ＩｇＧ　Ｆａｂ基因特异引物，从合成的ｃＤＮＡ中分别扩增出抗体轻链和重链可变区基因，回收纯化ＰＣＲ产物。用ＳｐｅＩ＋ＸｈｏＩ酶切重链可变区基因，ＸｂａＩ＋ＳａｃＩ酶切轻链可变区基因，先后克隆入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３。结果：ＰＣＲ产物经电泳证实分子量大小正确，酶切电泳证实质粒构建正确。结论：成功构建抗体轻链和重链基因克隆，建立抗ＨＰＶ１６Ｅ７噬菌体抗体库。     

核基质在消化系统肿瘤中的研究进展

核基质是指真核细胞的细胞核依次去除膜脂、可溶性蛋白及染色质后所残留下来的以非组蛋白为主的网架结构,包括外周核纤层、内部纤维-颗粒状网架结构体系和核仁基质3部分。核基质作为细胞核的支架结构,决定着核型,与DNA的复制、转录及转录后修饰以及染色体的组装等许多重要的生命活动相关。组织的细胞种类不同,核基质蛋白成分也有一定的差别。本文对核基质在消化系统肿瘤发生和诊断中的价值做一简要综述。     

应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库

目的应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库。方法采集登革确诊患者恢复期外周
血,分离外周血淋巴细胞并提取其总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链（LCκ）和重链可变区（VH）基因,构建抗体轻链基因
库和抗体重链基因库;将抗体基因库转染CHO细胞、用流式细胞仪分析抗体在CHO细胞表面的表达。结果以1.2 μg总RNA
为模板,用6 套引物扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,轻链基因库容量为1.45×104,重链基因库容量为
1.8×105;随机挑选的10个轻链克隆和10个重链克隆,经过测序鉴定,轻链有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序
列,重链有7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析含有正确阅读框架的单克隆和抗体基因库,
均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达,抗体库中可表达的抗体多样性达到109。结论以1.2 μg 总RNA为模板,通过
RT-PCR扩增,成功构建可表达库容量达到109的登革病毒特异性全长人抗体基因库。