抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。     

抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达

目的 构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位（SLT2A）单链抗体基因（scFv），并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 通过连接肽（Gly4Ser），将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体（mAb）5F3的VL和Va连接成scFv基因VH-Linker-VL并在Va基因5′端和VL基因3′端引入Sfi Ⅰ和Not Ⅰ的酶切位点，克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中，转化Ecoli HB2151，IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后，SDS-PAGE和Westem blot分析鉴定。结果 经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实，基因构建正确。SDS-PAGE和Westem blot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达，表达产物的相对分子质量为27000，与理论预期值相符，且可与相应抗原特异结合。结论 成功地实现了抗SLT2A scFv基因的原核分泌表达，为探讨0157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。     

超微粉碎云芝子实体对云芝多糖提取的影响

目的:探讨超微粉碎云芝子实体的云芝多糖提取工艺条件.方法:采用超微粉碎技术对云芝进行预处理,所得微粉(5μm)与云芝子实体进行多糖提取的对比试验,然后对云芝微粉提取多糖进行正交实验,优化提取工艺.结果:云芝微粉的多糖提取收率比云芝子实体的多糖得率平均高出61%,云芝超微粉碎处理后最优提取工艺为:100℃,80 min,提取3次.结论:超微粉碎有利于云芝多糖的提取.     

大豆平衡氨基酸营养价值的研究

大豆平衡氨基酸是水解大豆蛋白后,添加蛋氨酸和色氨酸制成的一种氨基酸组成比较平衡的氨基酸混合物,其必需氨基酸含量达46.5％(含胱氨酸和酪氨酸);第1限制氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸,氨基酸分(AAS)为0.97,化学分(CS)为0.55,必需氨基酸指数(EAAI)为91.53,均较酪蛋白高。动物试验表明,大豆平衡氨基酸可促进幼年大鼠生长;蛋白质功效比值(PER)达3.38±0.23,净蛋白质比率(NPR)达4.65±0.34,真消化率(TD)达96.44±102,生物价值(BV)达77.06±1.41,净蛋白质利用率(NPU)达74.14±0.89,与酪蛋白组比较,除消化率与酪蛋白一致外,其余各项指标均显著高于酪蛋白组,研究结果提示,大豆平衡氨基酸是“要素膳”的理想氮源。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体。方法以重组GST-STX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108。结论成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应。     

肠出血性大肠杆菌0157:H7 LexA蛋白的表达、纯化及鉴定

目的 对EHEC 0157:H7 lexA达、纯化,并检测其免疫活性.方法 lexA基因片段插入表达载体pET22b( ),在E..coli BL21(DE3)中表达.包涵体经洗涤并用8 mol/L尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第-步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定LexA蛋白的浓度,将纯化的kxA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗lexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western blot分析LexA的免疫活性.结果 lexA以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的 蛋白,经HPLC测定目的 蛋白的最终纯度为98%,表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性.结论 在E.coli BL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性.     

合成大蒜素防治动脉粥样硬化症的研究

大蒜作为食品和民间药物已有几千年的历史,至今还在世界许多国家和地区用于多种疾患的防治。近年来,国外报道大蒜有防治动脉粥样硬化的作用。由于大蒜的有效成分性质极不稳定,文献报道多用提取的新鲜大蒜汁、大蒜油,实际应用颇为不便。近年来上海第二制     

强化混合酶解蛋白营养评价

酶解猪血纤维蛋白氨基酸种类齐全,必需氨基酸占氨基酸总量的40％,但由于氨基酸组成不够平衡,其营养价值不如酪蛋白。为提高其营养价值,本文进行了氨基酸组成的改善实验,并用化学分析法及生物学法对改善氨基酸组成后的酶解蛋白混合物(以下简称混合酶解蛋白)进行了营养评价。     

高原肺水肿发病机理的探讨

高原肺水肿 (ＨＡＰＥ)是一种由低地急速进入海拔 3 0 0 0米左右以上地区的常见病。最低发病高度国外资料为 2 590米[1] ,国内为2 957米 ,大多数病例发生在 3 0 0 0～ 50 0 0米之间。发病率国外为 0 57～ 1 5 5%[2 ] ,国内为1～ 5 8%[3] ,一般为 0 5～ 1 %左右。六十年代以前国内外报导的病死率为 5～ 1 0 %左右[2 ,3] ,近年来由于诊治水平提高 ,病死率已大为下降。国外最早报道ＨＡＰＥ病例始于本世纪初 ,早期学者将其描述为肺炎或充血性心力衰竭 ,直到本世纪六十年代 ,随着心内导管技术在医学中的兴起 ,Ｈｏｕｓｔｏｎ首次将其用于…