Multi-parameter prediction of HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen

Objective To predict the HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Methods By using 3 epitope prediction databases which including MHC binder ( BIMAS and SYFPEITHI databases) and proteasome cutting site ( PAProC databases), the epitopes of PCNA were predicted by analyzing several parameters and methods. Results After comprehensive analysis,we have obtained two possible HLA-A0201 restricted CTL epitopes SMSAD-VPLV (228-236, score 447 633. 595 ) and LINEACWDI ( 22-28, score 127 966.779);two HLA-A24 re-stricted CTL epitopos DYEMKLMDL ( 113-121, score 563 994.9 ) and EFARICRDL ( 143-151, score 40 540.7);two HLA-A1101 restricted CTL epitopes LTSMSKILK (72-80, score 1334. 2680 ) and DVPLV-VEYK (232-240,score 736.9236). Conclusion The multi-parameter epitope prediction method is feasi-ble for cytotoxic T lymphocyte epitope prediction.     

表达白细胞介素-18的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

目的 观察表达IL-18的溶瘤腺病毒(ZD55-IL18)对裸鼠肾癌移植瘤生长及血管形成的抑制作用.方法 荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只.瘤体内注射ZD55-IL18、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达IL-18的增殖缺陷腺病毒Ad-IL18及PBS,每次注射病毒7×108PFU/只,连续注射3 d.注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤E1A、IL-18、CD34、VEGF表达及凋亡.第50天时处死动物测量肿瘤体积.结果 ZD55-IL18、ZD55-EGFP、Ad-IL18及生理盐水处理组肿瘤体积(mm3)分别为:299.7±52.9、536.8±90.3、570.3±99.0、766.1±145.8,ZD55-IL18与各组之间差异有统计学意义(P<0.01).Ad-IL18处理组肿瘤无E1A蛋白表达,ZD55-IL18处理组有大量E1A蛋白表达,表明病毒复制.ZD55-IL18处理组肿瘤IL-18表达及凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-IL18处理组.ZD55-IL18处理组肿瘤CD34、VEGF表达均显著低于Ad-IL18处理组.结论 表达IL-18的溶瘤腺病毒ZD55-IL18比增殖缺陷腺病毒Ad-IL18具有更强的抑制肾癌生长及血管形成作用.     

表达白细胞介素18的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及抗肿瘤作用

目的 观察表达白细胞介素18(IL-18)基因的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及其对Ketr-3细胞的杀伤作用.方法 通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的条件增殖腺病毒(ZD55-EGFP)在肾癌Ketr-3细胞中的感染和增殖情况.分别将表达IL-18的条件增殖腺病毒(ZD55-IL-18)及表达IL-18的普通腺病毒(Ad-IL-18)感染人肾癌Ketr-3细胞系,通过Western blot法检测病毒E1A和IL-18蛋白的表达;免疫细胞化学染色检测IL-18抗原表达;TUNEL法检测Ketr-3细胞的凋亡情况;噻唑蓝(MTT)比色法检测Ketr-3细胞存活情况.结果 ZD55-EGFP能有效感染肾癌Ketr-3细胞并在其中大量增殖.Westem blot检测结果 发现ZD55-IL-18能在肿瘤细胞内表达E1 A并有效介导IL-18表达,在病毒感染Ketr-3细胞48 h后,ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18蛋白表达量分别为255.6±3.1、118.7±2.90免疫组织化学检测显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18抗原阳性率分别为(82.4±3.2)%和(23.4±1.9)%.TNUEL检测结果 显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的细胞凋亡率分别为(52.2±3.5)%和(25.5±1.9)%.病毒感染4 d后,MTT检测结果 显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组细胞存活率分别为(32.6±2.3)%和(73.3±2.5)%,表明ZD55-IL-18对Ketr-3细胞有显著的杀伤作用.结论 ZD55-IL-18能在Kerr-3细胞中高效特异性表达IL-18基因并显示出良好的抗肿瘤作用.     

表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

Objective To investigate the antitumor effect of oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene for renal cancer therapy. Methods Nude mice were divid-ed randomly into 4 groups (8 mice/group),and were treated by intratumoral injections of ZD55-hTERT ( an oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) ,ZD55-EGFP ( an on-colytic adenovirus) and Ad-hTERT (replication-defective adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) with three consecutive daily at 7 × 108 pfu/day or treated with PBS as a control. The expression of E1A and hTERT, and apoptosis of tumor xenografts were assessed by immunohistochemi-cal technique at the 7th day after injections. The tumor volume was measured at the 50th day after injec-tions. Results The tumor volume in ZD55-hTERT treatment group ( 124.1±27.5) was significantly less than that in ZD-EGFP (499.8±77.1 ) and Ad-hTERT ( 609.0±102.5 ) treatment groups. The E 1A pos-itive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly higher than that in Ad-hTERT treatment group. The hTERT positive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly lower than that in Ad-hTERT treatment group. ZD55-hTERT treatment of tumor xenografts resulted in an increased apoptotie cell death as compared with ZD55-EGFP and Ad-hTERT treatment. Conclusion The antitumor effect of ZD55-hTERT was more potent than oneolytie adenovirus ZD55-EGFP and Ad-hTERT.     

辅助腺病毒载体及其介导的基因治疗研究进展

腺病毒是基因治疗的常用载体,但第一、二代腺病毒由于引起宿主的免疫应答和细胞毒性反应影响了治疗效果,限制了临床应用,辅助腺病毒载体避免了第一、二代腺病毒的缺点,而充分发挥了腺病毒载体的优点,在研究中所表现出来的特点使大多数研究者认为它是一个很有希望的理想的基因治疗转导载体,本文将其在基因治疗相关进展作一综述。     

高浓度抗CD3单抗诱导人外周血单个核细胞凋亡及细胞因子对？…

使用抗ＣＤ３单抗诱导新鲜分离的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡，同时观察细胞因子对其影响，１８ｈ后电镜发现处理组发生典型凋亡改变，ＤＮＡ电泳出现典型阶梯状条。ＴＵＮＥＬ法流式细胞仪检测发现处理组凋亡发生率３９．６％，显著高于对照组（Ｐ〈０．０１），ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α可显著增强抗ＣＤ３单抗诱导的凋亡，ＩＬ－１￣ＩＬ－３，ＴＮＦ－α对凋亡无明显影响。ＣｓＡ可抑制剂ＣＤ３单抗诱导的凋亡，但加入ＩＦ     

流式细胞双标记技术定量检测淋巴细胞亚群凋亡

目的建立定量检测淋巴细胞亚群凋亡的方法.方法设立经甲基泼尼松龙(MP)处理人外周血淋巴细胞的MP处理组和未经MP处理的对照组.以电镜、DNA电泳对人外周血淋巴细胞行凋亡定性检测,以流式细胞TUNEL技术(TUNEL法)定量检测淋巴细胞凋亡发生率,采用PE-CD3联合FITC-TUNEL双标记法定量检测淋巴细胞亚群发生率.结果TUNEL法MP处理组淋巴细胞凋亡检出率(68.2±6.4)%,显著高于对照组(10.2±2.2)%(P＜0.01).双标记法凋亡检出率(70.2±3.6)%,与TUNEL法无显著差异.双标记法检测MP处理组CD3+细胞凋亡率(87.6±4.7)%,CD3-细胞凋亡率(23.0±3.2)%,CD3+细胞凋亡率显著高于CD3-细胞凋亡率(P＜0.01).结论流式细胞双标记凋亡定量检测技术可同时检测凋亡细胞及其表面标志,适用于淋巴细胞各亚群凋亡的定量检测.     

抗膀胱癌免疫毒素BDI-1-PEA特异杀伤肿瘤细胞的研究

新近利用抗原处理细胞(APC细胞)处理制备瘤疫效疗较为肯定,认为天然免疫细胞DC细胞瘤疫更有其应用价值.红细胞也是天然免疫细胞.能否用红细胞处理补体调理过的肿瘤细胞制备瘤苗是值得探讨的.有的学者认为红细胞是T细胞活性的调节器,我们的实验有可能为此提供的依据[Arosa FA, Currpharm Des, 2004, 10(27): 191].     

125I标记Ki67反义多肽核酸对裸鼠人肾癌移植瘤的抑制作用

放射性核素反义治疗是近年来提出的一种新的肿瘤治疗策略,它将反义技术阻抑癌基因表达与放射性核素基因靶向照射有机结合,从而提高治疗效果.我们既往研究发现125I标记肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(125I-PNAs)具有较强的体外抑制肾癌细胞增殖、促进凋亡作用.本研究通过建立裸鼠人肾癌移植瘤模型,进一步观察其在体内对靶基因表达及肿瘤生长的抑制作用.     

血透中心信息化管理的实践与探讨

本文结合血透中心在日常管理和运行过程中存在的问题和需求,独立开发了血透临床信息管理系统.该系统提高了血透中心的管理效率,降低了医务人员的工作量,实现了血透中心的质量趋势,满足了“以病人为中心”的服务要求.在浙医一院运行1年多来,获得临床广泛的好评.