SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集

目的分析甲基转移酶SETD2 表达改变对人鼻咽癌（NPC）细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取 SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag（TMT）标记蛋白质定量技术和串联 质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质 涉及信号通路富集。结果以表达倍数（FC）≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表 达蛋白质,其中904个表达上调,1145个表达下调。GO功能注释结果表明,SETD2敲除后在生物过程（细胞过程及调节,细胞运 动、代谢过程及细胞组分的生物合成）、分子功能（催化活性及分子结合、转录因子活性）和细胞组分（胞膜、细胞器、大分子复合 物）等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2 敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、 mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特 征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路,研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。     

上海市719名卖淫、嫖娼者的调查分析

卖淫、嫖娼是一个较特殊的群体 ,缺乏自己行为的认真审视和检点 ,随着改革开放的深入 ,外界性自由毒流的侵蚀 ,这一特殊群体人员还会不断地增加 ,导致ＳＴＤ的发病率不断地提高 ,给社会治安将造成很大的危害 ,因此 ,通过对本次卖淫、嫖娼这一特殊群体的年龄、性别、户籍地、ＳＴＤ的调查 ,为公安、执法机关提供合理的打击范围和必要的打击力度。1　对象和方法1 1　对象　受检对象均为 1998年各公安分局送检的部分卖淫、嫖娼者。1 2　方法　先做性病临床检查 ,尤其是皮肤、粘膜、生殖器、肛周的检查 ,然后采集宫颈口及尿道口分泌物涂片作镜检…     

1998年上海市719名受审人员的性传播疾病流行病学调查报告

近年来 ,上海市性传播疾病(ｓｅｘｕａｌｌｙｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｄｉｓｅａｓｅ ,ＳＴＤ)的发病呈急剧上升的趋势 ,发病率由 1994年的 90 .74/ 10万上升至 1997年的2 5 4.2 5 / 10万[1] 。为了解ＳＴＤ在高危人群中的流行状况 ,我们对 1998年全市公安局性病门诊鉴定的 719名收审人员进行ＳＴＤ的流行病学调查 ,现将调查结果报告如下。一、资料与方法1.调查对象 :为 1998年全市各公安分局的部分收审人员 (公安局抓获的卖淫嫖娼和其他流氓犯罪者 )。对受检人员实施全身皮肤粘膜检查 ,重点检查外生殖器和肛门 ,采集受检者的静脉血和泌尿生…     

上海地区性罪错人员性传播疾病的流行特征分析

20世纪80年代以来,随着改革开放的实施,国际间交往的增加,对外交流的扩大,如旅游、探亲、劳务输出、外籍人员进出境等等,性自由、性滥交、卖淫、嫖娼等丑恶现象也随之泛滥,使得我国已绝迹20多年的性传播疾病死灰复燃,且发病呈逐年上升趋势.为了解性传播疾病(STD)在高危人群中的流行状况,我们对2000～2001年公安部门收审的4 148例性罪错人员进行STD流行病学调查.现将调查结果报告如下:     

上海市在押犯性病调查报告

针对性病在我国逐渐蔓延态势,于1996年8月～1997年2月,对上海市在押犯人实施流行病学调查,了解性病发病状况,探讨防制对策.二调查对象和方法随机抽查上海市监狱、妇教所、拘留所和收审所在押犯258人.询问病史,检查全身皮肤、粘膜及妇科检查,重点检查外阴部及肛门.采集阴道后穹隆及宫颈口(男性取尿道口)分泌物直接涂片,镜检革兰氏阴性双球菌阳性者,再进一步作非淋球菌培养,同时,采血作梅毒血清学RPR检查.性病诊断按卫生部防疫司主编的《性病防治手册》制订的标准.     

基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P 0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P 0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P 0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P 0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。     

血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制.方法:应用SRF全长(SRF-Full,1～508 aa)、SRF-N(1～254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的...     

术前外周血循环肿瘤DNA在肝细胞癌微循环血管侵犯预测中的应用价值分析

目的 探讨术前外周血中采集的ctDNA针对肝细胞肝癌（HCC）病人的微循环血管浸润（MVI）是否存在预测价值。方法 收集59例来自北京大学深圳医院的确诊原发性肝癌的患者，术前一周内收集所有患者肿瘤相关术前的临床资料以及外周血ctDNA；术中采集患者的肿瘤标本进行病理分析判断有无MVI发生。采用logistic回归模型进行单因素和多因素分析确定影响MVI的独立危险因素。结果 在59例纳入研究队列的患者中，MVI阳性的患者有37例，MVI阴性患者有22例。采用受试者工作特性曲线（ROC）分析显示：ctDNA预测肝癌MVI发生的最佳截断值为0.80，曲线下面积为0.813，影响肝癌发生的危险因素分析：单因素分析显示：ALT>40 U/L，较晚的TNM、BCLC分期，肿瘤最大径>3.5 cm和ctDNA>0.80与肝癌MVI的发生有关。多因素分析显示：ctDNA>0.80、肿瘤最大径>3.5 cm、较晚的TNM分期，是影响肝癌MVI发生的独立危险因素。根据筛选出的危险因素建立列线图可更加直观的反应肝癌患者MVI的风险因素。比较不同水平ctDNA评分下的肝癌患者的临...