健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

慢性非细菌性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者前列腺液中炎症因子差异表达的临床意义

Objective To investigate the role of inflammatory cytokines in the pathogenesis of chronic non-bacterial prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CAP/CPPS) patients. Methods The 38 cases with CAP/CPPS patients (18 cases of CAP and 20 cases of CPPS) and 20 cases of healthy controls were selected. The differential expressions of 40 kinds of inflammatory cytokines were detec-ted by antibody arrays in prostate fluid. Results The inflammatory cytokines which increased more than 1.5 times expression have been found. There were seven kinds in CAP including monocyte che-moattractant protein (MCP)-1, solution tumor necrosis factor receptor Ⅱ(s TNF R Ⅱ), platelet-de-rived growth faetor-BB (PDGF-BB), interleukin (IL)-β, IL-11、IL-6、MCP-2 and five kinds in CPPS groups including MCP-1、PDGF-BB、MCP-2、s TNF R Ⅱ、It-11 respectively, compared with healthy control group. The cluster analysis results showed that protein expression of Monocyte chemoattrac-tant protein 1 (MCP-1)and platelet-derived growth factor BB (PDGF-BB) were significantly increased in CAP (3.47 and 2.07 times) and CPPS (2.25 and 2.19 times) compared with healthy control group and were the final polymerization of inflammatory cytokines. The protein expression of interleukin 1 β (IL-1 β), MCP-1 and soluble tumor necrosis factor Ⅱ (s TNF R Ⅱ) in CAP group was increased more than 1.85,1.55,1.67 times compared with CPPS group. Conclusions Elevated expression of inflammatory cytokines may play an important role in the course of CAP/CPPS disease. The extent of the inflammatory response of CAP was higher than CPPS. The inflammatory factors of MCP-1 and PDGF-BB could serve as a novel diagnostic marker.     

靶向cyclinE小干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:以cyclinE基因编码区为靶位,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,观察转染后对HepG2细胞的影响.方法:针对cyclinE基因序列构建表达siRNA的真核表达载体pSilencer3.1-H1hygro,利用脂质体Metafectene转染CyclinE基因高表达的肝癌细胞株HepG2.流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot法观察转染后细胞cyclinE基因表达.结果:成功构建了表达siRNA的真核质粒载体,转染后cyclinE基因mRNA及蛋白表达水平分别下降了79%和65%.结论:靶向cyclinE基因的siRNA可有效沉默HepG2细胞高表达的cyclinE基因,从而抑制肝癌细胞的增殖并促进凋亡.     

冠心通络方对球囊损伤AS兔主动脉PKC-α、MCP-1表达的影响

目的:观察冠心通络方对球囊损伤后AS兔主动脉PKC-α、MCP-1表达的影响。方法:新西兰雄性大白兔60只随机分成治疗组(以下称SGDW)、对照组、假手术组,正常饮食雄性大白兔15只为阴性对照组。除阴性对照组外所有动物高脂饲料喂养4个月。4个月后冠心通络方组、模型组均采用球囊拉伤,假手术组仅予静脉切开但不行球囊拉伤术。冠心通络方组在高脂饮食喂养同时给予冠心通络方喂食,模型组及假手术组予高脂饮食。冠心通络方组行球囊损伤术后继续给药3天。给药完毕后处死动物,取胸主动脉组织固定后以备实验,采用免疫组织化学法检测MCP-1、PKC-α表达,按阳性细胞率作计量资料进行统计分析。结果:冠心通络方能明显降低球囊损伤AS兔血管组织MCP-1、PKC-α表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:冠心通络方能明显降低球囊损伤AS兔腹主动脉组织MCP-1、PKC-α表达,通过抑制炎症增殖而减少血管再生组织,减轻血管内膜增生和血管平滑肌增殖,从而防止血管再狭窄。     

不同剂量滋阴益气活血复方对糖尿病大鼠肾脏功能及血脂的影响

目的：观察不同剂量的滋阴益气活血复方对糖尿病大鼠肾脏功能及血脂的影响，并探讨其机理。方法：随机分组大鼠糖尿病模型，再给予不同剂量的滋阴益气活血复方，并观察血糖、尿量、血 Cr、 ALB、尿β 2MG等指标。结果：滋阴益气活血复方能有效地降低血 Cr、β 2MG的排泄量，升高血 ALB含量，使血清中 TG、 TC的高状态得到改善（ P ＜0.05)。加大滋阴益气药物剂量的复方与常规剂量复方相比较，其治疗效果并无显著性差异，降TG效果明显低于常规剂量组。结论：滋阴益气活血复方对糖尿病有一定的防治作用，加大滋阴益气药物剂量进行短期治疗，并不能有效地增强疗效。     

幽门螺杆菌对胆汁的耐受性研究

目的研究H.pylori对胆汁的耐受情况.方法将H.pylori与不同浓度的胆汁(0.01%～1.8%)共同培养,观察H.pylori的生长及形态学的变化.结果＜0.1%的胆汁对H.pylori无影响,0.1%～1.2%的胆汁部分抑制H.pylori的生长,≥1.4%的胆汁完全抑制H.pylori的生长.H.pylori在胆汁培养基中可出现球形体和丝状体,但耐受胆汁后形态可恢复正常.结论较高浓度的胆汁可以抑制H.pylori的生长,但H.pylori经诱导可耐受胆汁.     

幽门螺杆菌感染动物模型研究新进展

幽门螺杆菌动物感染模型对幽门螺杆菌致病性的研究具有重要意义。除应用较多的小鼠与蒙古沙鼠外,其他多种动物(如猕猴、大鼠、猪、犬和猫等)已被用于制作幽门螺杆菌动物感染模型。本文就近年对各种幽门螺杆菌动物模型的研究进展作了综述。     

组织微阵列

随着科技的发展,尽管人类对某些肿瘤的病因、发病机制及相关预后因素有了一定的认识,也有了一些相应的治疗方法,但对相当多的肿瘤仍显得力不从心。新近,基因工程生物技术的快速发展促使人们对疾病的分类重新予以考虑,即不再以形态学和临床表现为基础,而是以病变所表达的分子标记物为出发点,这样可将那些组织学上雷同、但生物学行为和预后不同的肿瘤区别开来。加之人类基因组序列的测定即将完成,所有人类遗传信息的第一手资料也会随之获得,运用DNA微阵列可很容易筛选出在某一疾病中发生了异常改变的基因,但如何实现这些基因的转化,即如何将…     

麝香配伍乳香促虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎的动物实验研究

目的:观察麝香、乳香配伍组合对虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织病理及炎症因子表达的影响。方法:53只健康雄性Wistar大鼠,5只用于大鼠前列腺蛋白提纯液的制备,48只随机分为麝香配伍乳香+虎杖提取物组、虎杖提取物、模型组、正常对照组共4组。除正常对照组外,应用大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂制备实验性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,造模60 d时正常对照组、模型组予生理盐水,虎杖提取物、麝香配伍乳香+虎杖提取物组分别予生药量虎杖1.575 g/(kg.d)、麝香0.021 g/(kg.d)、乳香1.05 g/(kg.d)按组别选用连续灌胃,各组给药14 d时处死,检测指标包括病理学,ELISA法检测前列腺组织匀浆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平,RT-PCR及Western印迹方法检测炎症因子MCP-1(CCL2)、CCR2 mRNA及蛋白表达。结果:麝香配伍乳香+虎杖提取物组前列腺组织结构改善,无明显炎性细胞浸润,虎杖提取物组可见炎性细胞浸润。麝香配伍乳香+虎杖提取物组明显降低前列腺组织炎症因子(TNF-α:11.04±4.07、IL-1β:16.94±4.26、IL-6:110.08±28.42、IL-8:26.28±7.36,pg/ml),优于单纯虎杖提取物组(TNF-α:63.21±21.37、IL-1β:41.32±14.62、IL-6:177.64±42.65、IL-8:96.37±37.61,pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。麝香配伍乳香+虎杖提取物组大鼠前列腺组织炎症趋化因子MCP-1(CCL2)及其受体CCR2的mRNA(MCP-1:0.32±0.17;CCR2:0.28±0.11)及蛋白(MCP-1:0.28±0.15;CCR2:0.11±0.04)表达水平与模型组(MCP-1 mRNA:1.15±0.39;MCP-1蛋白:0.93±0.34;CCR2 mRNA:0.83±0.26;CCR2蛋白:0.93±0.34)比较显著降低(P<0.01),显著优于虎杖提取物组(MCP-1 mRNA:0.65±0.27;MCP-1蛋白:0.56±0.22;CCR2 mRNA:0.78±0.24;CCR2蛋白:0.25±0.09),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:麝香乳香配伍组合的应用具有促进虎杖提取物对慢性前列腺炎的治疗,降低炎症反应程度,从而促进前列腺组织结构修复的作用。     

小干扰RNA有效抑制乙型肝炎病毒的动物实验

目的 以乙型肝炎病毒（HBV）S区为靶位，观察小干扰RNA（siRNA）在动物体内抗HBV的效果。方法 以流体动力学法建立HBV感染的动物模型，将pcDNA3．1-HBV和细胞体外实验证明有效的siRNA尾静脉共注射Balb／c小鼠，用时间分辨免疫荧光分析法（IFMA）检测小鼠血清中HBsAg，用定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测血清HBV DNA，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HBV S-mRNA，用免疫组织化学法检测肝组织HBsAg和HBcAg。结果 在小鼠体内，siRNA能有效抑制HBsAg的分泌，降低HBVDNA的滴度，免疫组织化学结果也证实HBsAg、HBcAg刚性细胞数明显减少，干扰效果至少持续3d，而无关siRNA则无抑制作用。结论 在动物体内靶向HBV S区的siRNA能有效特异抑制HBV。