抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原McAb的特性分析与初步应用

目的：通过对抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原单克隆抗体的特性分析，研制检测乙型副伤寒沙门菌的ELISA法，对副伤寒传染病进行早期诊断。方法：用杂交瘤技术制备单克隆抗体，并进行鉴定，用双抗体夹心ELISA建立检测乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原ELISA方法，对临床标本进行检测。结果：7株抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原的单克隆抗体IgG15株、IgG2a1株、IgG2b1株，均不与相关沙门菌、肠道菌反应，用菌体免疫制备的MeAb 3B5、3G12、7H1、2B5，与乙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原反应，而用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体1F4、5D3、3H7，只与乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原，385与7H1识别同一抗原表位，3B5、7H1与3G12、2B5相互识别不同抗原表位，1F4、5D3、3H7相互识别不同抗原表位。3B5包被、过氧化物酶（HRP）标记3G12建立双抗体夹心ELISA，鞭毛抗原、菌体的最低检出量分别为5ng／ml、10^5个／ml。检测159份献血员血清及70份发热待查血清为阴性，1份发热待查血清、9份血培养阳性患者血清为阳性。结论：用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体不适于检测乙型副伤寒沙门菌，菌体免疫制备的单克隆抗体特异性强，建立的双抗体夹心ELISA法，可对乙型副伤寒进行早期诊断。     

抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定

目的对抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化与特性鉴定,以获得可用于检测氯霉素残留试剂盒的单克隆抗体。方法用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体,用间接酶联免疫吸附试验、竞争ELISA等方法测定抗体效价、特异性、敏感性与亲和性以及抗体与其它氯霉素结构类似物的交叉反应率。结果纯化后抗体的纯度高达95%;对抗体进行相关性质的鉴定得出：4D10效价为1∶2.56×105,其亲和力常数可达2×108M-1,该抗体与CAP-BSA,CAP-OVA有反应,与BSA、OVA无反应;与氯霉素琥珀酸钠、氯霉素反应,而与其它氯霉素结构类似物无交叉反应。结论抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、特异性强、亲和力高,可利用该抗体制备检测氯霉素残留的ELISA试剂盒。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

面肩肱型肌营养不良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析

目的分析探讨面肩肱型肌营养不良（FSHD）实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）诊断方法的影响因素。方法通过改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNaseH酶用量和活性等,确定FQ-PCR诊断FSHD的最佳反应条件。结果退火温度55℃、时间20s、镁离子终浓度5．OmM、RNaseH酶用量IOOU、RNaseH酶在95℃下灭活8min为最佳反应条件,其中RNaseH的活性选择对FSHD诊断的特异性影响较大。结论通过降低RNaseH酶的活性可提高诊断的特异性,最终确立了FSHD的FQ-PCR基因诊断最佳反应条件。     

抗氯霉素抗体可变区基因的克隆与序列分析

[目的]克隆并分析抗氯霉素单克隆抗体(抗CAPmAb)的轻、重链可变区基因VL和VH. [方法]从分泌抗CAP mAb的杂交瘤细胞株4D10中提取总RNA,利用RT-PCR技术和一系列简并引物扩增VL和VH基因,扩增产物克隆于pMD18-T后测序,利用VBASE2数据库进行比对分析. [结果]有多对引物扩增到VL或VH基因,但同一基因的不同引物扩增到的序列相同.VL和VH基因长度分别为342 bp和357 bp,分别编码114个和119个氨基酸残基.编码产物均具有4个FR区、3个CDR区和2个特征性半胱氨酸残基,符合典型的KABAT结构特点,分别属于IGKV1亚群和IGH-V3609VH8家族.所克隆序列已被GenBank收录,序列号分别为FJ477893和FJ477894. [结论]成功克隆到抗CAPmAb的VL和VH基因,为进一步构建氯霉素残留检测用基因工程抗体打下了基础.     

黄芪注射液治疗糖尿病肾病（3期）疗效观察

目的探索黄芪对糖尿病肾病3期尿蛋白及血浆白蛋白变化的治疗效果。方法40例2型糖尿病（3期）患者分为两组，治疗组和对照组，两组均为20例。两组患者均给予低盐，低蛋白糖尿病饮食，原治疗方案不变，空腹血糖控制〈7．8mmol／L，餐后2h血糖〈11．1mmol／L。糖化血红蛋白（4hbaic〈8％）。在此基础上治疗组给予黄芪注射液治疗。观察4周。结果应用黄芪治疗组24h尿蛋白有明显下降，血浆白蛋白升高明显（P〈0．05），有统计学意义。结论黄芪治疗糖尿病肾病3期有一定疗效。     

痰液堵塞致肺不张1例报告

1病例资料 患者，男性，48岁，主因烧伤后7d、呼吸困难2d由烧伤科转入我科。查体：T37．7℃、R次／min、P120次／min、BP20／11KPa，神清。右手、躯干、会阴部、双下肢创面处纱布包裹，口唇无明显紫绀，右肺可闻及哮鸣音及少量湿性罗音，左肺尖部可闻及支气管呼吸音及哮鸣音，左肺中下野未闻及呼吸音，右肺叩清音，左肺肺尖部叩浊音，左下肺叩实音。心率120次／min，律齐。心音较有力，腹部带有胶带不能查。辅助检查：胸部CT示：左肺不张，纵隔及心脏明显左移，两侧少量胸腔积液，右肺代偿性肺气肿。入院后初步诊断：①左肺不张；②支气管肺炎；③烧伤Ⅲ度14％。入院后给予吸氧、鼓励患者咳嗽、变换体位、抗感染、祛痰、补液等治疗，6d后复查胸部CT、两肺CT示：未见明显异常征象，左肺膨胀良好，左侧胸腔积液。     

人乙酰肝素酶基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建人乙酰肝素酶基因（HPA）的真核表达载体pEGFP-N1/HPA,初步探讨其在人胚肾细胞293T中的表达情况.方法 以pOTB7/HPA质粒为模板,PCR扩增HPA基冈,经限制性内切酶酶切后,连接到pEGFP-N1载体上,并对重组表达载体pEGFP-N1/HPA进行酶切与测序鉴定.用脂质体lipefectmi...     

人乙酰肝素酶的体外表达及诱导表达条件的优化

目的构建人乙酰肝素酶重组表达质粒,以期获得足够的乙酰肝素酶蛋白,用于其功能研究。方法将人全长乙酰肝素酶cDNA克隆至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行体外表达,并探索C-端带一个His标签及C-端、N-端各带一个His标签对乙酰肝素酶表达量的影响。结果重组原核表达质粒能在大肠杆菌中高效表达人乙酰肝素酶蛋白。结论成功构建了人乙酰肝素酶原核表达系统,C-端、N-端均带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量明显高于仅在C-端带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量。     

检测食品中氯霉素残留的方法学研究进展

氯霉素在动物性食品中的残留会对人类的健康构成潜在危害,随着食品安全受到人们的日益关注,对其残留的检测方法也越来越受到人们的重视。探讨几种检测方法的优缺点,重点介绍目前在检测领域中应用较广的免疫层析法。