Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡性能评估

目的评估Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335和AST-P639中国定制药敏卡的性能。方法随机收集权威机构质控菌株73株和2018年1—6月华山医院住院患者首次临床分离株112株。以权威机构提供的质控菌株为检测对象,采用3种中国定制药敏卡及微量肉汤稀释法(BMM)进行平行试验,以室间质量评价结果为参考标准,评估中国定制药敏卡及BMM的可靠性。以临床分离株为检测对象,以BMM结果为参考标准,评估中国定制药敏卡对临床分离株耐药多样性检测的准确性。结果以质控菌株为检测对象,以权威机构提供的抗菌药物敏感性试验结果为标准,AST-N334、AST-N335、AST-P639的分类一致率(CA)分别为95.5%(126/132)、96.8%(179/185)、99.5%(182/183)。以临床分离株为检测对象,以BMM药物敏感性试验结果为参考标准,AST-N334标准一致率(EA)为88.4%(961/1087)、CA为94.6%(903/955)、非常重大错误(VME)占0.3%(3/955)、重大错误(ME)占1.9%(18/955)、微小错误(MIE)占3.2%(31/955);AST-N335 EA为89.9%(1388/1544)、CA为95.1%(1414/1487)、VME占0.3%(5/1487)、ME占0.8%(12/1487)、MIE占3.8%(56/1487);AST-P639 EA为95.4%(541/567)、CA为98.7%(389/394)、ME占0.5%(2/394)、MIE占0.8%(3/394)。结论Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡准确性高,具有临床应用可信度,但也存在一定的错误率及局限性,实验室检测人员应予以关注。     

革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验

目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株(96.9%)准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株(90.8%)准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.

Abstract：

Objective To reduce the turnaround time for laboratory diagnosis of bacteremia, the feasibility of rapid identification and susceptibility testing using samples taken directly from positive blood culture bottles was evaluated. Methods The growth of microorganisms in blood culture bottles was screened by the BACTEC 9000 blood culture system. 65 positive blood culture bottles containing gram-negative bacteria were adopted to test. Culture fluid was injected into BD SST vacutainer and centrifuged to pellet blood cells. After collecting required McFarland units, they were cultured on Phoenix 100 NMIC/ID-4(identification-gram-negative bacteria and susceptibility testing) cards using 0.25 McF and 0.5 McF methods respectively. They were also evaluated by the standard method, involving subculture tests from positive blood culture bottles. Results 63 of 65 gram-negative bacteria (96. 9% ) were correctly identified with 0. 25 McF method. 59 of 65 gram-negative bacteria(90.8% ) were correctly identified with 0.5 McF method. For antimicrobial susceptibility testing, the 0.25 McF direct method had an agreement rate more than 94% , the 0.5 McF method was more than 85.7% and direct blood sample KB method was more than 93.8% compared to the standard method. But the overall minor error rate in susceptibility testing of direct blood sample KB method is higher than other methods. Conclusion Applying 0. 25 McF and 0. 5 McF rapid identification and susceptibility test was practical. During to possessing more prominent advantages, laboratory put the 0. 25 McF direct method into practice had a timely, remarkable significance.     

同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒bla_(KPC-2)基因

目的建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应(PCR)分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段,采用重叠延伸基因扩增(SOE-PCR)技术构建融合片段,以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导,同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子,用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析(MLST)型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。     

六年间血流感染的金黄色葡萄球菌的分子特征分析

目的 分析上海三级甲等医院2004-2010年血流感染的金黄色葡萄球菌克隆分型特点以及随时间的变化趋势,检测不同克隆株耐药和毒力基因携带情况.方法 收集上海华山医院2004-2010年从不同患者血液样本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌103株,通过苯唑西林MIC测定和SCCrnec基因分型等方法对MRSA进行检测;按照国际通用的多位点保守基因测序(MLST)以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析,采用PCR方法对103株细菌的耐药以及毒力基因携带情况进行分析.结果 103株金黄色葡萄球菌共检出MRSA66株(64.1%),其中SCCmecⅡ型35株,SCCmecⅢ型29株,SCCmecⅣ型2株,MSSA 37株(35.9%).66株MRSA的克隆分型以ST5(33株)和ST239(29株)为主,另外还包括2株ST59.1株ST641,1株ST6;其他克隆型均为MSSA.从2009年开始ST5和ST239克隆株在血流感染中的分离率明显下降(ST5从52.9%降至15.4%;ST239从61.1%降至15.4%),而其他类型以及新出现的MSSA克隆株分离率明显增加(如2009年ST7分离率为41.7%;2010年新出现ST188及ST15等),2010年血流感染的MSSA为84.6%.103株金黄色葡萄球菌mupA耐药基因阳性19株(18.4%),qacA/B耐药基因阳性41株(39.8%),70.6%的ST239杀菌剂耐药基因qacA/B阳性.在这103株血流感染的金黄色葡萄球菌中发现5株动物来源的克隆株,分别为4株ST398以及1株ST9.22个毒力基因除了sasX、lukSF以及arcA外,同一克隆株无论MRSA还是MSSA其毒力基因携带情况无明显差异,但是不同克隆株携带毒力基因有明显的差异.结论 以ST5和ST239为主的MRSA在血流感染中的分离率明显下降,新的MSSA克隆株分离率明显增加,不同的克隆株耐药以及毒力基因的携带情况存在明显差别.     

革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验

目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株(96.9%)准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株(90.8%)准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.     

纸片法头孢西丁敏感的青霉素耐药葡萄球菌分析

目的 评估不同检测方法 对纸片法头孢西丁敏感,苯唑西林耐药葡萄球菌耐药性状的检测能力,并对非mecA基因介导苯唑西林耐药的匍萄球菌进行药敏谱分析.方法 收集2007年1月至2009年5月间复旦大学附属华山医院就诊患者呼吸道、尿、分泌物和无菌体液标本中分离得到的255株金黄色葡萄球菌,采用苯唑西林纸片法、苯唑西林MIC法、头孢西丁纸片法、头孢西丁MIC法枪测金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性:用苯唑西林MIC法和头孢西丁纸片法检测75株凝固酶阴性萄萄球菌对苯唑西林的敏感性:将所有葡萄球菌进行mecA基因检测,结合试验结果 分析葡萄球菌苯唑西林耐药原因,并对非mecA基因介导的苯唑西林耐药葡萄球菌用MIC法进行抗菌药敏谱分析.结果 255株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的金黄色葡萄球菌苯唑西林纸片法检测出6株中介,4株耐药;头孢西丁纸片法、头孢西丁MIC法、苯唑西林MIC法全敏感、mecA基因检测全阴性.75株纸片法头孢西丁敏感、青霉素耐药的凝固酶阴性葡萄球菌,苯唑西林MIC法59株敏感,16株耐药;mecA基因阴性为71株,阳性为4株.12株非mecA基因介导苯唑西林耐药的葡萄球菌庆大霉素敏感为10株,克林霉素8株、环丙沙星11株、红霉素6株、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑11株,头孢菌素类、替考拉宁、万古霉素、哌拉西林/他唑巴坦、四环素12株.结论 金黄色葡萄球菌用头孢西丁检测mecA基因介导的苯唑西林耐药,具有很好的可靠性.凝固酶阴性葡萄球菌最好同时使用头孢西丁纸片法和苯唑西林MIC法检测mecA基因介导的苯唑西林耐药,以提高检出率.非mecA基因介导的苯唑西林耐药,临床可依据实际药物敏感实验结果 选择性使用β内酰胺酶稳定的青霉素、β内酰胺酶抑制剂复合药、头孢类和碳青霉烯类药物治疗.     

血培养瓶增菌法快速鉴定和快速药物敏感性试验可行性分析

目的探讨用血培养瓶增菌法培养脑脊液样本,将报阳样本直接离心富集细菌后,采用激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行快速鉴定和快速药物敏感性试验的可行性。方法收集2018年12月—2019年7月华山医院脑脊液样本1 446例,随机抽取345例采用血培养瓶增菌法培养,1 101例采用常规浓缩集菌培养法培养,比较2组样本阳性率。分别采用快速法(BD凝胶分离血清管富集细菌)和常规法(转种过夜孵育获取纯细菌)对血培养瓶增菌法阳性样本进行质谱鉴定和体外药物敏感性试验,分析菌种鉴定符合率和体外药物敏感性试验结果一致率。结果与常规浓缩集菌培养比较,血培养瓶增菌后样本阳性率明显增高(χ²=60.889,P=0.000)。48例血培养瓶增菌法阳性样本中,快速法与常规法菌种鉴定符合率为89.80%,2种鉴定方法差异无统计学意义(χ²=0.116,P=0.990)。快速法与常规法体外药物敏感性试验结果比较,革兰阴性菌除微量肉汤稀释法的替加环素外,其他方法和抗菌药物的一致率均为100%;革兰阳性菌除纸片扩散法的红霉素、微量肉汤稀释法的红霉素和庆大霉素、仪器法的克林霉素和庆大霉素一致率略差外,其他抗菌药物一致率均为100%。隐球菌快速药物敏感性分类一致率及标准一致率为100%。以纯细菌微量肉汤稀释法为标准,快速微量肉汤稀释法和快速仪器法的标准一致率分别为98.56%和97.83%。结论用血培养瓶增菌法进行脑脊液培养,可在不延长报阳时间的情况下提高脑脊液样本培养阳性率和难培养菌的检出率,采用BD凝胶离心直接取菌的快速鉴定和药物敏感性试验方法快速、准确,可大大缩短临床报告时间,及时为临床用药提供实验室依据。     

新的细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布

目的 研究细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布及对细菌耐药性的影响.方法 随机收集上海华山医院2004、2007和2010年从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌共300株,收集同时期社区健康人群的鼻咽拭子分离鼻腔内定植的金黄色葡萄球菌170株.按照国际通用的MLST以及葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)方法进行克隆株的鉴定分析.通过苯唑西林MIC值测定方法对MRSA进行检测.采用PCR结合测序方法对金黄色葡萄球菌携带sasX基因情况进行分析,采用纸片琼脂扩散法药敏试验分析临床sasX阳性和sasX阴性金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药性.结果 300株从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离到的致病性金黄色葡萄球菌克隆分型以ST239(110株,36.7％)和ST5(122株,40.7％)为主.2004至2010年,sasX基因在致病性的金黄色葡萄球菌中的阳性率从17％上升至39％,sasX基因在健康人鼻腔内分离的金黄色葡萄球菌中阳性率平均为0.59％.ST239中sasX的阳性率从47.2％上升至83.8％.携带sasX基因的MRSA百分率从26.4％上升至50.8％,携带sasX基因的MSSA的比率只约占10％.sasX基因阳性组对部分目前临床常用的抗菌药物的耐药性高于sasX基因阴性组.结论 sasX基因主要存在于医院环境内致病性的金黄色葡萄球菌中,SasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染毒力因子之一,sasX基因的存在与细菌的耐药有关.     

中枢神经系统真菌感染的病原谱和实验室指标

中枢神经系统（CNS）真菌感染以病情严重、诊断困难、治疗棘手而具挑战性。本文介绍了导致CNS真菌感染的高危因素、病原谱和实验室指标。由于CNS真菌感染患者常伴有免疫功能低下,尤其需要临床采取有效预防措施,一旦感染则需要早发现、早诊断,及时有效开展优化诊疗方案,预防病情进一步恶化。