重组apo(a) Kringle Ⅳ-10的纯化及生物活性

目的:通过研究重组apo(a) Kringle Ⅳ-10(KⅣ-10) 的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据.方法:将含apo (a) 野生型KⅣ-10 (wt-KⅣ-10 / Trp72)和突变型KⅣ-10 (mut-KⅣ-10/Arg72)基因片段的重组质粒,分别转化至E.coli DH5α菌株中并表达含这2个重组片段的融合蛋白,通过Glutathione-Agarose beads亲和层析进行分离和提纯,经L-Lys-Sepharose 4B亲和层析检测其赖氨酸结合能力.再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基,观察这2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响.结果:实验结果显示:在E.coli DH5α菌株中表达的GST-wt-KⅣ-10/Trp72能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合;而GST-mut-KⅣ-10/Arg72在任一浓度范围内均无这种抑制作用.结论:apo (a) KⅣ-10对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关;而KⅣ-10的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72有关.     

氚-胆固醇标记血浆脂蛋白方法的研究

本研究用~3H-胆固醇标记血浆脂蛋白,血浆经3.75％PAGE,可将脂蛋白分成HDL、LDL和VLDL。分别测定各脂蛋白的每分钟计数(cpm),并计算放射化学纯度。HDL、LDL和VLDL的放射化学纯度分别为99％、96％和94％。本法标记的脂蛋白具有一定的化学稳定性,不改变生物活性和其他理化性质等优点。可通过制备性PAGE纯化~3H-胆固醇标记的脂蛋白。该方法操作简单,~3H-胆固醇半衰期长,可广泛应用于血浆脂蛋白代谢的研究。     

阿魏酸钠拮抗氧化型脂蛋白(a)对人动脉平滑肌细胞的作用

目的:研究脂蛋白(a)氧化前后致人动脉平滑肌细胞(SMC)增殖及细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的变化,观察阿魏酸钠(SF)对其的影响。方法:Lp(a)经体外Cu²⁺氧化法氧化,硫代巴比妥酸(TBARS)比色法检测氧化程度,培养的人动脉SMC中分别加入不同浓度SF,作用12h后再与天然和氧化型Lp(a)共同孵育,以MTT比色法、流式细胞仪检测细胞增殖状况,采用荧光探针Fura-2/AM检测细胞[Ca²⁺]_i。结果:氧化型Lp(a)促人动脉SMC增殖的同时亦明显增加了[Ca²⁺]_i水平,作用较天然Lp(a)明显,SF(40,80mg/L)可显著抑制氧化型Lp(a)所致的细胞增殖和[Ca²⁺]_i增加,并呈剂量效应关系,而对天然Lp(a)所致的细胞增殖和[Ca²⁺]_i增加无明显影响。结论:氧化型Lp(a)通过升高[Ca²⁺]_i而显著促动脉SMC增殖可能是其致动脉粥样硬化的机制之一,SF拮抗这种作用可能与其抗氧化能力有关。     

脂类代谢与冠心病的关系Ⅵ、高脂蛋白血症的分型与冠心病及高血压病

在高脂蛋白血症的诊断和定型过程中,主要依据各种脂蛋白的数据并参考血脂值。多数情况下,血清胆固醇和甘油三酯分别与β-脂蛋白和前β-脂蛋白一致。对于少数特殊病例的分型,本文根据 WHO 表型分类提出了某些修正和补充。测定了58例冠心病和119例高血压病患者的血脂和脂蛋白。发现胆固醇的增高主要来自β-脂蛋白而不象高令健康人主要来自α-脂蛋白,甘油三酯的增高主要来自前β-脂蛋白。冠心病组中伴有高脂蛋白血症患者占74%,为正常组5.9倍;高血压病组中则占43.6%,为正常组3.5倍。从高脂蛋白血症的分型来看,冠心病组与高血压病组几乎全层Ⅱ型或Ⅳ型,冠心病组中Ⅱa,Ⅱb及Ⅳ型分别占23.3%,32.6%及44.1%,高血压病组则相应为11.5%,48.1%及38.5%,仅1例为Ⅲ型,占1.9%。冠心病组中胆固醇及甘油三酯含量的频数分布与正常组的重叠均小于高血压病组的重叠。以上结果说明高脂蛋白血症Ⅱ型与Ⅳ型肠患心血管疾患,因此测定血脂和脂蛋白对予示、辅助诊断及防止冠心病和高血压病具有一定忌义,其中对冠心病价值较大。     

八个家族性高脂血症系谱分析

对八个家族性高脂血症家系(包括20个小家系)进行了分析。从先证者家系成员的发病率、男女发病率及连续几代的发病情况推断,高胆固醇血症,高甘油三酯血症及高胆固醇高甘油三酯血症遗传信息的传递方式是一种常染色体显性遗传。在八个家族性高脂血症家系中层于单基因者5个,其中高胆固醇血症1个,高甘油三酯血症4个,属于两种单基因在同一个体联合表现者3个。根据分离定律可予测单基因家系成员的发病机率,而两种单基因联合表现的家系成员的发病机率及其表现型则可根据自由组合定律予测。推断出的家系成员发病率与调查结果基本上一致,说明上述予测方法是合理的。关于家系成员基因型,本文首先从所测出子女及其父母的表现型推出其父母的基因型,再从父母的基因型判断子女的基因型。当一种表现型可能存在几种基因型时,则应参照血脂水平作出判断。(本文于1979.12月在湖北省遗传学会宣读)     

冠心病、高血压病患者血清载脂蛋白B水平的研究

五十年代以来,人们已注意到冠心病患者的血清极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)平均浓度比健康人高。以后认识到 LDL 为动脉硬化的危险因子。国外用荧光免疫法测定血清VLDL 或 LDL 时发现,当二者水平增高时,动脉内膜下载脂蛋白(apo)中 apoB 数量大于其他 apo。因此,认为 apoB 是 VLDL 和 LDL 导致动脉粥样     

血清脂蛋白四种电泳方法的比较

<正> 血清脂旦白电泳技术是研究脂类代谢紊乱和进行高脂旦白血症分型的重要手段之一。目前国内普遍采用的方法有纸上电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂(米广)电泳,也开展了聚丙烯酰胺凝胶电泳。本文以同一血清标本同时进行上述四种电泳,目的是比较它们的结果,并讨论其优缺点。