胆囊结石与胆囊黏膜细胞IL-1β成熟分泌的相关性研究

探讨胆囊结石与胆囊组织IL1-SymbolbA@表达及其成熟分泌的相关性。 〖HT5”H〗方法〖HT5”K〗〓收集胆结石胆囊及其胆汁样本21例,其中胆固醇结石4例、色素结石7例、混合结石10例,采用PCR检测细菌感染情况,ELISA检测胆汁中IL1-SymbolbA@, 蛋白印迹杂交方法检测IL1-SymbolbA@蛋白表达,免疫组化检测胆囊黏膜IL1-SymbolbA@表达,并分析临床相关性。结果在排除伴有细菌感染的情况下, 结石患者胆汁IL1-SymbolbA@含量在1.93～11.80ng/ml,混合结石组胆汁IL1-SymbolbA@（4.753±2.651）显著高于胆固醇结石组（2.640±0.167）和色素结石组（2.762±1.081） （P＜0.05）;免疫组化、蛋白印迹杂交检测表明胆囊黏膜proIL1-SymbolbA@、IL1-SymbolbA@高表达,推测是胆汁IL1-SymbolbA@重要来源之一、 并示胆结石患者胆囊黏膜有炎症小体激活。结论胆结石患者在非细菌感染情况下,胆汁IL1-SymbolbA@增加可能与胆囊黏膜细胞炎症小体的激活密切相关。     

INVESTIGATION OF REGULATORY T CELLS IN PATIENTS WITH NON-SMALL CELL LUNG CANCER

Objective To evaluate the prevalence of CD4 ^＋ CD25^high regulatory T cells （ Treg cells） in the peripheral blood mononuclear cells （PBMC） and tumor-infiltrating lymphocytes （TIL） of patients with non-small cell lung cancer （NSCLC） and to investigate immunosuppression to the progression of cancer. Methods Peripheral blood and tumor tissues were collected from 20 patients with NSCLC at the time of surgery. None of the patients received surgery, radiotherapy, chemotherapy, or other medical interventions before this study. Cancer stages of the patients were Ⅰ-Ⅲ A. Venous blood samples were obtained from 20 health donors. PBMC were isolated from blood samples by differential centrifugation over Ficoll-Hypaque. TILs were isolated from tumors by differential centrifugation over Ficoll-Hypaque and Percoll. Percentage of CD4^＋ CD25^highTr/CD4＋T in PBMC and TIL was assessed by the flow cytometry. Results The percentage of CD4^ ＋ CD25high Tr/ CD4 ^＋T in PBMC [ （4. 87 ± 1.22 ） % ] of NSCLC patients was significantly higher than that in healthy donors [ （ 2.36 ± 0. 72 ） % ] （ P 〈 0.01 ）. The percentage of CD4^＋ CD25^highTr/ CD4^＋ T in PBMC [ （5.40 ± 1.20） % ] of NSCLC patients in stage Ⅱ-Ⅲ A was significantly higher than that in stage Ⅰ [ （3. 87 ± 0. 22 ） % ] （ P 〈 0. 01 ）. The percentage of CD4 ＋ CD25hiShTr/ CD4 ＋ T in TIL[ （ 8. 66 ±0. 76） % ] of NSCLC patients in stage Ⅱ-Ⅲ A was significantly higher than that in stage Ⅰ [ （ 7. 04 ± 0. 80） % ] （ P 〈 0. 01 ）. Conclusion The prevalence of CD4 ^＋ CD25^highTreg cells in PBMC and TIL of NSCLC patients was significantly higher than that in healthy donors. These Treg cells may be preventing appropriate antitumor immune responses. The population of CD4^ ＋ CD25^highTreg cells in PBMC and TILs of NSCLC patients with Ⅱ-Ⅲ A stage was significantly higher than that of NSCLC patients with Ⅰ stage. These Treg cells may facilitate development of tumors.     

LPS和IL-10对低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的影响

目的探讨动脉粥样硬化早期泡沫细胞形成与致炎症因子脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和抗炎因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)的相互作用关系。方法以佛波醇酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导单核细胞株THP-1细胞分化为巨噬细胞,再以氧化型低密度脂蛋白刺激巨噬细胞形成泡沫细胞,采用油红O染色法同时观察致炎症因子LPS及抗炎因子IL-10在这一过程中对泡沫细胞形成的干预作用。结果氧化型低密度脂蛋白单独刺激巨噬细胞24 h后泡沫细胞的形成率由对照组的(9.77±1.70)%增加到刺激组的(16.27±2.27)%,且随时间延长增加更明显;LPS的协同作用能增加到40%以上,并随浓度升高而增多;IL-10能有效地抑制泡沫细胞形成,拮抗氧化型低密度脂蛋白和LPS的作用,且与浓度呈正相关。结论氧化型低密度脂蛋白能诱导泡沫细胞形成,LPS能明显加快泡沫细胞的转化,而抗炎因子IL-10能显著抑制这一过程。揭示血管炎症能加速泡沫细胞形成,而IL-10能抑制泡沫细胞的形成,这对延缓动脉粥样硬化进程具有重要作用。     

清道夫受体SR-AII基因定点突变的研究

目的　利用聚合酶链反应( PCR)技术对清道夫受体SR-AII基因进行定点突变的研究。方法　利用PCR定点突变技术, 首先设计两对包含预定突变位点的引物, 通过3轮PCR法扩增出含有所需突变位点的片段, 通过酶切连接方法将突变点引入到pEGFP-C1-SR-AII中, 随后用TRANSfection转染试剂介导转染293T细胞。结果　在真核表达载体pEGFP-SR-AII基础上获得了SR-AII cDNA A1201G和A1202C的突变体, 测序结果表明在序列中发生了预期的突变。结论　SR-AII定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

白细胞介素10对血管内皮细胞E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的研究白细胞介素10对人血管内皮细胞表面黏附分子E选择素、细胞间黏附分子1及血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响,探讨白细胞介素10抗动脉粥样硬化可能的机制。方法将人脐静脉内皮细胞随机分为四组进行不同处理24 h:即空白对照组、氧化型低密度脂蛋白组、白细胞介素10组和白细胞介素10与氧化型低密度脂蛋白联合刺激组。采用流式细胞术检测细胞表面黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1表达的变化;采用实时定量PCR和Western Blotting分别检测血凝素样低密度脂蛋白受体1的mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组比较,细胞经氧化型低密度脂蛋白刺激24 h后,其表面的黏附分子E选择素表达量显著增加了20%,血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量也显著增加了25%,而同时加入白细胞介素10联合刺激组E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量与氧化型低密度脂蛋白组比较均出现显著下降(分别为20%和40%),回到基线水平。而单独使用白细胞介素10对E选择素及血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达没有影响;本实验未能检测到氧化型低密度脂蛋白对细胞间黏附分子1表达的影响。结论抗炎因子白细胞介素10能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑...     

清道夫受体SR—PSOX基因定点突变的研究

目的构建清道夫受体SR—PSOX点突变体,揭示该受体与脂质结合的关键位点,为确定SR—PSOX在脂质摄取、泡沫细胞形成中的作用提供模型。方法利用分子克隆及PCR定点突变技术,构建不同突变点的片段并克隆到pEGFP—N3中,形成含有SR—PSOX各联合突变的pEGFP—SR—PSOX突变体质粒。转染293T细胞后采用流式检测受体表达情况。结果从THP-1源性的巨噬细胞中成功克隆SR—PSOX受体并在真核表达载体pEGFP—SR—PSOX基础上获得了SR—PSOX三种突变体（R78、R82H85、R78R82H85）。测序结果表明SR—PSOX序列中发生了预期的突变．使SR—PS0x受体中第78位精氨酸单点突变,第82位精氨酸、第85位组氨酸双点突变。第78、82位精氨酸和第85住组氨酸三点突变,均突变为丙氨酸,并将所有pEGFP—SR—PSOX突变体在293T细胞膜表面成功表达。结论定点突变PCR可以成功构建SR—PSOX受体的3种突变体,使之在293T细胞表面获得表达。为进一步研究SR—PSOX的功能奠定了基础。     

黄芪注射液对左室肥厚大鼠心肌钙超载及肌浆网钙泵表达的影响

目的：探讨黄芪对压力过载致左室肥厚大鼠心肌钙含量及肌浆网钙泵(SERCA2a)表达的影响。方法：采用缩窄腹主动脉法制备压力过载性心肌肥厚模型。大鼠随机分为假手术组，模型组，低、中、高剂量黄芪组(5，10，20 g·kg^-1·d^-1)和卡托普利组(0.05 g·kg^-1·d^-1)。造模后第13周开始灌胃给药，连续12周。测定大鼠左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)和心肌钙含量的变化(原子吸收光谱法)，并检测(RT-PCR，Western blot)大鼠左室组织肌浆网钙泵的表达。结果：黄芪呈剂量依赖性抑制模型大鼠左室质量指数的增加(P<0.01，P<0.001)，其中高剂量黄芪作用与卡托普利相似；黄芪能抑制肥厚心肌组织钙超载(P<0.01)；与假手术组相比，心肌肥厚大鼠左心室SERCA2a 基因表达下调(P<0.05)，高剂量黄芪使之表达上调(P<0.05)，而卡托普利对其表达无明显影响。结论：黄芪对大鼠压力过载性心肌肥厚的抑制作用可能与其减轻心肌钙超载及上调心肌SERCA2a基因表达有关。     

清道夫受体SR-AⅡ基因定点突变的研究

目的:利用聚合酶链反应技术对清道夫受体SR-AⅡ基因进行定点突变的研究。方法:利用聚合酶链反应定点突变技术,首先设计4条(其中2条包含预定突变位点)引物,通过3轮PCR反应扩增出含有所需突变位点的片段,通过酶切连接方法将其重组到pEGFP-C1中形成pEGFP-SR-AⅡ-335质粒。结果:在真核表达载体pEGFP-SR-AⅡ-335基础上获得了SR-AⅡcDNAA1201G和A1202C的突变体,测序结果表明在序列中发生了预期的突变,使SR-AⅡ受体蛋白第335位的赖氨酸变为丙氨酸。结论:SR-AⅡ定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

CD4+CD25highTr细胞在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:比较非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中CD4+CD25highTr细胞比例的变化与肺癌分期的关系,探讨患者局部肿瘤微环境和全身免疫状态与CD4+CD25+Tr细胞的关系.方法:分离NSCLC患者和健康人外周血单个核细胞(PBMC),取NSCLC患者新鲜肺癌组织抽提TIL.用流式细胞仪检测CD4+T细胞和CD4+CD25highTr细胞.结果:NSCLC患者PBMC中CD4+CD25highTr/CD4+T细胞比例较健康人显著升高(P<0.01).Ⅱ～ⅢA期NSCLC患者PBMc和TIL中CD4+CD25highTr/CD4+T细胞比例较Ⅰ期患者显著升高.结论:CD4+CD25highTr细胞可能参与肿瘤产生的宿主免疫抑制反应及其发展.