人铜锌超氧化物歧化酶基因在大肠杆菌中的高水平表达

人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn Superoxide dismutase,SOD)是人体内超氧自由基(O·)的天然清除剂,实验证明,它对防止脂质过氧化、治疗冠心病、再灌流损伤(器育移植等)、关节炎及自家免疫等疾病有明显的疗效,是一个很有前途的活性多肽药物,因此,受到国内外研究者的高度重视。开展SOD的基因工程研究进而生产大量廉价的SOD产品具有重要的实用价值。本工作用化学法全合成了人铜锌SOD的基因,并在大肠杆菌中获得表达。     

重组质粒pRBoαⅠ在探测人α—珠蛋白基因中的应用

用基因组重组质粒pRBαⅠ制备α-珠蛋白基因探针。从pRBαⅠ质粒的限制性内切酶图谱分析证明1.5kb的PstⅠ片段含有完整的α-珠蛋白基因序列,该片段经分离纯化并进行缺口翻译的~32P标记后可作为α-珠蛋白基因探针。用此探针探测了正常人α-珠蛋白基因的限制性内切酶图谱并初步探测1例α-地中海贫血病人的基因组织情况,所得结果与使用α-cDNA探针得到的结果一致。     

人胚肝白蛋白mRNA的体外表达

从3～6个月引产胎儿肝脏中提取mRNA,在变性条件下经琼脂糖电泳,它分布在10～32S之间。在无细胞体外翻译体系中能得到5～10倍于内源的同位素参入活力。经抗人白蛋白抗体免疫沉淀体外翻译产物,其参入活力约占总参入活力的3％。将体外翻译产物的免疫沉淀物经SDS-聚丙烯酰胺电泳,得到相当于人血清白蛋白的同位素标记的电泳区带。证明人胚肝mRNA可以在体外蛋白合成体系表达出人白蛋白。     

肿瘤转化生长因子——II.抗表皮生长因子受体抗体对人肺腺癌细胞生长的抑制作用

首次报道从人胎盘绒毛组织提取表皮生长因子受体,并制备受体抗体。此抗体可与肿瘤转化生长因子竞争人肺腺癌细胞表面受体结合点,从而抑制肿瘤细胞的增殖,生长。提示该抗体可能作为肿瘤免疫治疗的一种手段。     

我国广东地区HbH病人的α-珠蛋白基因组织

以限制性内切酶及印迹杂交技术,用α-珠蛋白基因探针分析广东地区21例HbH病病人的α-珠蛋白基因在染色体上的排列,结果10例为非缺失型与α-地贫1的双重杂合子,1例为非缺失型纯合子,6例为右侧缺失型α-地贫2与α-地贫1双重杂合子,4例为左侧缺失型α-地贫2与α-地贫1双重杂合子。     

人铜锌超氧化物歧化酶的基因工程研究——Ⅰ.人铜锌超氧化物歧化酶基因的合成与克隆

本文报道人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide Dismutase, SOD)基因的合成与克隆。采用大肠杆菌偏爱密码子,按入Cu/Zu SOD一级结构顺序编码。基因全长495个碱基对,合成时,分成26个基因片段分别合成。采用分级退火的方法,在T4 DNA连接酶作用下,将基因片段组装成完整的基因,经序列分析证明,合成的基因顺序与设计一致。     

人铜锌超氧化物歧化酶的基因工程研究 Ⅱ.人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达

利用pUC 8为载体质粒,将合成的人Cu/Zn SOD基因置于Lac Z启动子的调控下,构建了含有该基因的表达质粒pCZS Ⅰ。首次成功地在大肠杆菌中表达了合成人Cu/Zn SOD的基因。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描分析证明,SOD基因的表达产物占细胞可溶性蛋白质的13％左右,用光扩增法捡测表达产物的酶活性,每毫克蛋白质为48.6 McCord Fridovich单位。     

哺乳动物核糖核酸酶天然抑制物对核糖核酸的保护作用

在大鼠肝聚核蛋白体(Rp)的制备过程中,于超离心前加入粗提的胎盘核糖核酸酶抑制物(RI),所得到的Rp具有较高的促进麦胚无细胞蛋白合成体系的掺入活力,     

肿瘤转化生长因子 Ⅰ.小细胞肺癌病人尿中肿瘤转化生长因子的分离纯化及其生物活性

从小细胞肺癌病人尿中,经酸性乙醇溶液提取和凝胶过滤层析纯化,得到具有生物活性的 TTGF;用 Bio-Gel P-30凝胶过滤测定其分子量为13,000;它们能使正常细胞发生表型转化,在软琼脂上生长并形成集落。