含人组织型纤溶酶原激活剂cDNA重组逆转录病毒的制备及鉴定

将人组织型纤溶酶原激活剂ｃＤＮＡ与逆转录病毒载体ＬＮＳＸ重组后转染病毒包装细胞ＰＡ３１７，形成完整的重组病毒颗粒，电镜下重组病毒呈散在分布，球形，直径９０～１８０ｎｍ，由囊膜、外壳和核心三部分组成。重组病毒颗粒感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，在含Ｇ４１８培养基中筛选培养２周后计数阳性细胞克隆数，结果达６×１０８ＣＦＵ／Ｌ；被感染的受体细胞ＮＩＨ３Ｔ３高效表达具有纤溶活性的重组人组织型纤溶酶原激活剂。     

敌枯双对雄性小鼠生殖细胞分裂比率及精原细胞染色体畸变的影响

本文研究丁敌枯双对BALB/C雄性小鼠生殖细胞分裂比率及精原细胞染色体畸变的影响。将实验小鼠随机分为三组,即实验组(敌枯双组),阳性对照组(环磷酰胺组)和阴性对照组(双蒸水组)。结果发现:敌枯双能明显诱发精原细胞多倍体率和裂隙率增加,抑制终变期/中期Ⅰ和中期Ⅱ细胞的减数分裂比率,促进精原细胞有丝分裂比率。实验结果还提示:在遗传毒理检测中亚急性实验是必要的,并对实验结果进行了初步讨论。     

敌枯双对小鼠活体精原细胞SCE频率的影响

敌枯双〔N,N＇-甲撑-双(2-氨基-1,3,4-噻二唑)〕作为抗肿瘤药物和化学农药,已证实对实验室肿瘤和水稻白叶枯病具有明显的抑制作用和良好的防治效果。由于该药对动物有强烈的致畸作用,本研究采用敌枯双为实验因素,利用改进的Kanda方法进行实验,为敌枯双的致畸作用提供精原细胞遗传物质方面的实验依据。 将实验动物随机分成三组,即实验组(敌枯双处理组),阳性对照组(环磷酰胺处理组),阴性对照组(双蒸水组)。每组6只小鼠。各组动物分     

转基因内皮细胞tpA纤溶活性的变化

利用基因重组技术，将tpAcDNA与逆转录病毒载体LNSX重组构成LNS－ipA，转染病毒包装细胞，形成的重组逆转录病毒颗粒再用来感染牛血管内皮细胞。经G418筛选后的单克隆细胞培液，分别经纤维蛋白板法和发包底物法测取活性。结果：经基因转染的PA317细胞和牛血管内皮细胞，在含人纤维蛋白原和凝血酶的纤维蛋白板上出现溶圈；随培养时间的延长，细胞数量增加，tpA分泌活性也增加。结论：含人tpAcDNA转录单位的牛血管内皮细胞，其纤溶活性明显增高。该研究为将来进行基因治疗奠定了基础。     

生命科学整合实验课程建设与实践

生命科学综合实验面向医学生开设,融合细胞生物学、生物化学、遗传学、分子生物学、分子遗传学、免疫学等学科知识与技能。同济大学医学院2010年起实施以课程整合为特点的新课程体系,现从实验教学理念、教学内容、教学方法、师资队伍等方面探讨实施“整合生命科学”实验教学课程的效果及意义。     

Kcnq1基因敲除对大鼠左心室和甲状腺功能的影响

目的探讨敲除钾电压门控通道亚家族Q成员1（potassium voltage-gated channel subfamily Q member 1, Kcnq1）对大鼠左心室结构和功能及甲状腺功能的影响。方法利用CRISPR/Cas9技术对大鼠的Kcnq1基因进行定点插入突变,构建Kcnq1纯合敲除大鼠模型。利用小动物超声成像系统检测大鼠的左心室结构和功能的变化。采用PowerLab测定大鼠心电图。通过ELISA检测Kcnq1敲除后大鼠血清中促甲状腺激素（thyrotropin, TSH）、游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine, FT3）和游离甲状腺素（free thyroxine, FT4）的含量变化。通过腹腔注射左旋甲状腺素（levothyroxine, L-T4）,观察L-T4替代治疗对Kcnq1-/-大鼠的治疗作用。结果超声成像检测结果表明,9月龄Kcnq1-/-大鼠收缩末期室间隔厚度和左心室后壁厚度均显著减小（P<0.05）;左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积显著增大（P<0.05）;左心室射血分数和缩短分数显著下降（P<0.01）。心电图结果显示,Kcnq1-/-大鼠QT间期延长,并伴有心率减慢。ELISA结果表明,Kcnq1-/-大鼠血清中FT4和FT3含量均明显降低（P<0.05）,TSH的水平未明显变化。Kcnq1-/-大鼠腹腔注射L-T4替代治疗2周后,与野生型相比,左心室后壁厚度显著增加（P<0.05）;左心室收缩末期内径显著降低（P<0.05）;左心室射血分数和缩短分数有所增加;同时,Kcnq1-/-大鼠的QT间期缩短,血清中FT3和FT4的水平增加。结论Kcnq1基因的敲除引起大鼠左心室功能的减弱和QT间期延长,并且其甲状腺功能减退;进行L-T4替代治疗后,能一定程度改善大鼠左心室的功能。     

丁酸盐激活CaMKK促进紧密连接重组装的研究

目的 探讨丁酸盐激活AMPK从而调节紧密连接的重组装的途径。方法 使用丁酸盐、CaMKK特异抑制剂(STO-609)处理上皮屏障模型Caco-2细胞,在转钙过程中检测电阻(TER)值、细胞内ATP水平以及CaMKK和AMPK的磷酸化状况,从而判断丁酸盐促进紧密连接重组装的上游信号通路。结果 丁酸盐处理Caco-2细胞后,其TER值显著增高(P＜0.05),CaMKK和AMPK均被磷酸化激活,而上述作用可被STO-609部分减弱。结论丁酸盐可通过钙离子途径磷酸化激活CaMKK,继而活化AMPK促进紧密连接的重组。     

急性缺血性脑梗塞溶栓治疗进展

近几年，缺血性脑梗塞溶栓治疗引起广泛关注。文章简要的概述几种常用溶栓药物对不同类型缺血性脑梗塞的临床治疗研究情况，并介绍了目前国际上正进行的大规模试验现状。     

t－PA基因转移持续升高小鼠血浆纤维蛋白溶解活性

ｔ－ＰＡ基因转移持续升高小鼠血浆纤维蛋白溶解活性彭鲁英，崔宁，林冰，蔡旭，朱运松，宋后燕（上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室２０００３２）血栓性疾病在心、脑血管疾病中占有重要比例，是这类疾病引起死亡的主要原因之一。而各种原因引起的纤溶系统功能降低...