免疫组化和组织化学双重染色技术在组织芯片上的应用

组织芯片是从组织块中挑选典型部位的组织以获得数百个圆柱状的样本，并按次序排列在一个新的石蜡块上，制作成HE切片，然后按研究的需要进行免疫组化及原位杂交等研究。组织芯片技术最重要的特点是：一次可以同时对多个组织块检测研究而对原来的组织材料破坏很小。此外，利用组织芯片仪还可以进行组织切片的精确定位和多种类型的分子生物学分析。     

凋亡的分子生物学途径和肿瘤细胞凋亡

研究肿瘤的发生、发展已成为当前医学的热门课题。肿瘤的发生常常是由于肿瘤细胞凋亡失控造成肿瘤组织的无限增长 ,在肿瘤细胞凋亡的过程中线粒体 (ｍｉｔｏ ｃｈｏｎｄｒｉａｍｔ)起着非常重要的作用 ,线粒体是哺乳动物细胞中唯一含有自身的遗传物质的效应器 ,同时它又是各种损伤因子作用的敏感部位。因此细胞中线粒体损伤导致其中的遗传物质即线粒体ＤＮＡ的释放事件可能时有发生。已经证实[1] ,癌细胞核基因组中存在线粒体ＤＮＡ的同源序列 ,在生理状态下 ,任何细胞的线粒体ＤＮＡ游离片段都可能具有潜在的转化活性 ,因而从理论上可以推…     

大承气汤联合自膨式金属支架在左半结直肠恶性梗阻治疗中的应用

目的:探讨大承气汤联合自膨式金属支架(SEMS)在左半结直肠恶性梗阻(MLBO)治疗中的作用及安全性。方法:选取2018年1月—2020年6月天津市人民医院收治的因MLBO行SEMS治疗的患者78例。随机化分为大承气汤组38例,聚乙二醇组40例。两组患者均进行限期手术治疗,在后续治疗时,大承气汤组口服大承气汤(1袋,125 mL/次,2次/d),聚乙二醇组口服聚乙二醇(舒泰清,A剂+B剂各2袋/次,饮用水冲调至125 mL/次,2次/d),比较2组术前准备时间、腹腔镜率、手术时间、并发症发生率、造口率、排气时间、术后住院时间、淋巴结清扫数目及术后病理水肿程度等差异。结果:大承气汤组的术前准备时间为6(5,7) d,低于聚二乙醇组的8(6,9) d,差异有统计学意义(P<0.001)。大承气汤组限期手术的腹腔镜率为65.8%,高于聚乙二醇组的40.0%,差异有统计学意义(P=0.023)。大承气汤组在造口率(21.1% vs 50.0%)及并发症发生率(15.8% vs 40.0%)方面亦优于聚乙二醇组(均P<0.05)。两组的淋巴清扫数目无明显差异(P=0.2),但大承气汤组的病理组织水肿程度比聚乙二醇组轻,差异有统计学意义(P=0.043)。结论:大承气汤可有效提高MLBO放置SEMS后限期手术的肠道准备效率及质量,提高腹腔镜成功率,并明显降低限期手术并发症发生率及造口率。     

377例双向分化恶性肿瘤血管生成拟态临床意义分析

目的:探讨双向分化恶性肿瘤组织中血管生成拟态的临床意义.方法:收集1955～2000年间我院病理科石蜡包埋双向分化恶性肿瘤样本887例,其中临床和病理资料完整的377例作为研究对象,分为有血管生成拟态组和无血管生成拟态组,分析具有血管生成拟态肿瘤的临床意义.结果:除滑膜肉瘤外(P=0.759),恶性黑色素瘤(P=0.038 2)、间皮肉瘤(P=0.035 6)、横纹肌肉瘤(P=0.028 2)中具有血管生成拟态的肿瘤患者生存时间明显低于无血管生成拟态肿瘤患者,两者比较差异有显著性.结论:具有血管生成拟态的双向分化恶性肿瘤恶性度高、血道转移早、临床预后差.     

双向分化肿瘤血管生成拟态分子机制初步观察(英文)

目的研究肿瘤细胞分泌Ⅳ型胶原和 PAS 阳性物质在血管生成拟态(VM)中的作用以及 VM 对肿瘤细胞表达 VEGF 的影响。方法收集双向分化恶性肿瘤石蜡包埋样本158例,制作成组织芯片,进行 CD31和 VEGF 重复染色及Ⅳ型胶原染色。通过网格计数法,比较 CD31与 PAS 阳性图案围成的管道面积差别及分布特点,以及有 VM 的点阵和无 VM 的点阵 VEGF 表达的差别。结果 VM 的基底膜样结构表现为 PAS 及Ⅳ型胶原阳性;无 VM 的双向分化肿瘤 VEGF 表达高于有 VM 者,其中在恶性黑色素瘤及腺泡型横纹肌肉瘤中,二者 VEGF 的表达差异有显著性(P<0.05)。结论 PAS 阳性物质和Ⅳ型胶原参与构建了 VM 的管壁,VEGF 表达的差别表明 VM 的存在可以提供肿瘤细胞氧气和营养物质。     

白藜芦醇对IEC-6细胞辐射损伤的防护作用及机制研究

目的 探讨白藜芦醇对大鼠小肠隐窝细胞（IEC-6）辐射损伤的防护作用及机制。方法 采用不同剂量（2、4、6、8、10 Gy）的6 MeV高能X射线对大鼠IEC-6细胞进行照射,应用克隆形成实验检测细胞增殖,建立IEC-6细胞辐射损伤模型。应用CCK-8检测不同浓度白藜芦醇（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol/L）对IEC-6细胞活力的影响,以及不同浓度白藜芦醇（0.1、1、2、4、6、8 μmol/L）对照射后细胞活力的影响。将细胞分为对照组、模型组（10 Gy）和白藜芦醇组（10 Gy,1 μmol/L）,对照组接受伪照射并予等量载体孵育;模型组接受6 MeV高能X射线照射,予等量载体孵育;白藜芦醇组在照射前2 h予相应浓度的白藜芦醇预处理,接受与模型组等剂量的高能X射线照射。采用 Annexin V-PI染色检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针检测活性氧;β-Gal染色检测细胞衰老;Real-time qPCR、Western Blot检测p16、p21、CAT和SOD2的mRNA水平及相应蛋白质表达情况。多组间数据比较采用单因素方差分析,应用Tukey’s HSD法进行事后两两比较。结果 4~10 Gy电离辐射明显抑制IEC-6细胞增殖,呈剂量依赖性（均P<0.05）;浓度为0.1、0.5、1、5 μmol/L的白藜芦醇对细胞活力无明显影响（均P>0.05）;浓度为0.1 μmol/L、1 μmol/L的白藜芦醇可增加电离辐射后细胞活力（均P<0.05）。白藜芦醇组细胞凋亡率、DCFH-DA荧光强度、β-Gal 阳性率均低于模型组（均P<0.05）;白藜芦醇组细胞中CAT、SOD2的mRNA水平及相应蛋白质表达较模型组升高（均P<0.05）,但p16、 p21的mRNA水平及相应蛋白质表达较模型组降低（均P<0.05）。结论 白藜芦醇可以降低活性氧水平,抑制细胞衰老和凋亡,从而减轻IEC-6细胞辐射损伤。     

265 例神经内分泌肿瘤的临床病理特征及预后分析

目的 探讨神经内分泌肿瘤（NETs）的发病特点、临床表现、诊断和治疗方法及预后。方法 回顾性分析 2006 年 1 月—2015 年 8 月天津市人民医院 265 例 NETs 患者的临床资料,包括性别、年龄、入院临床症状、原发部 位、病理诊断、治疗情况和预后随访情况。结果 265 例 NETs 患者中男 160 例,女 105 例,平均发病年龄（55.8±2.7） 岁,发病高峰 55~65 岁。发病部位主要位于结直肠 127 例（47.9%）,肺部 59 例（22.3%）,胃 21 例（7.8%）,阑尾 15 例 （5.7%）,小肠（特别是十二指肠及胰腺）10 例（3.8%）,乳腺 11 例（4.2%）,颈部 10 例（3.8%）,其他部位 12 例（4.5%）。 各个不同部位患者的就诊症状各不相同。结直肠患者主要是排便习惯改变,如腹泻、便秘、便血等。肺原发患者多 表现为咳嗽或痰中带血。胃、阑尾或小肠原发患者多表现为腹痛、腹胀等不适。病理诊断 G1 期 186 例（70.2%）,G2 期 54 例（20.4%）,G3 期 25 例（9.4%）。免疫组化显示突触素（Syn）阳性 228 例（86.4%）,嗜铬粒蛋白 A（CgA）阳性 102 例（38.5%）,CD56 阳性 74 例（27.9%）。232 例患者进行了手术治疗（87.5%）,28 例患者接受了放疗或化疗治疗 （10.6%）,5 例患者未行治疗。198 例患者完成至少 1 次随访,随访率 74.7%,中位随访时间为 38 个月,G1 期随访患 者中无肿瘤相关性死亡;G2 期有 6 例肿瘤相关性死亡;G3 期中有 19 例肿瘤相关性死亡。所有肿瘤相关性死亡患者 中 23 例发生了转移。神经内分泌瘤（G1+G2）的生存率明显高于神经内分泌癌（G3）（Log rank χ2=13.774,P＜0.01）。 结论 NETs 患者男性多于女性,不同部位的患者发病临床表现各不相同,消化道特别是结直肠是高发部位;病理分 期越晚的患者预后越差。     

免疫球蛋白κ链的结构功能及其在疾病发生发展过程中的作用

免疫球蛋白κ（Igκ）链是免疫球蛋白的一条轻链。免疫球蛋白基因主要由3个不同的基因位点组成,κ链、 λ链、重链。正常情况下免疫球蛋白轻链与免疫球蛋白重链结合形成功能性的免疫球蛋白复合物。κ或λ游离轻链 （FLCs）是由B淋巴细胞在免疫球蛋白合成过程中产生的,过去认为FLCs没有任何功能,但是目前证实FLCs参与了 免疫应答的几个关键过程,在不同的疾病中FLCs浓度高低与病程预后有极大的相关性。FLCs会导致肥大细胞脱颗 粒,如炎症性肠病中肥大细胞会释放炎性介质,并刺激局部炎症反应。而且在一些自身免疫性疾病中FLCs浓度的水 平也显著升高。FLCs不仅对非肿瘤性疾病中有一定的影响,肿瘤组织浸润的B淋巴细胞分泌Igκ,且Igκ的表达水平 与肿瘤的发生、发展密切相关。本文主要就Igκ的结构功能及其在疾病发生过程中的作用进行综述。     

人乳腺癌预后COX风险比例模型分析及Clusterin表达相关意义

目的：分析人乳腺癌惠者预后相关危险因素，明确不同因素在影响乳腺癌患者预后中的作用，阐述Clusterin在人乳腺癌组织中表达的临床意义。方法：收集1993～1994年临床预后资料完整的手术切除乳腺癌石蜡包埋组织158例，癌旁组织31例，制作成组织芯片进行Clusterin免疫组化染色，计算染色指数，对影响乳腺癌惠者生存预后相关因素进行COX风险比例模型分析和生存分析，C｜usterin表达与患者预后、淋巴结转移、肿瘤大小、病理类型和复发之间的相关关系。结果：COX风险比例模型分析结果显示，淋巴结转移和肿瘤大小是影响患者预后最危险的两种因素，B值分剐为-0.494和0.142，P值分别为0.001和0.009；生存分析结果显示，Clusterin阳性表达、淋巴结转移和术后化疗6次以下（不包括6次）均明显差于Clusterin阴性表达（X^2=14.085，P=0.000）、无淋巴结转移（X^2=21.458，P=0.000）和术后化疗〉6次（X2=4.442，P=0.035）；相关分析结果显示。Clusterin染色指数大小和肿瘤大小具有正相关关系，r=0.249，P=0.002，肿瘤细胞Clusterin表达明显高于癌旁正常乳腺上皮细胞（t=3.131，P=0.003），有淋巴结转移的肿瘤细胞Clusterin表达染色指数明显高于无淋巴结转移肿瘤，t=7.152，P=0.000。结论：淋巴结转移和肿瘤大小影响患者生存预后。作为一种凋亡抑制蛋白，Clusterin与乳腺癌的发生和转移有关。