过热30分钟后大鼠脾细胞增殖反应及IL—1活性测定

本实验复制大鼠过热动物模型，高温环境中体温升高达１．１８±０．１９℃时，断髓外死动物，无菌取脾。结果表明：过热性体温高大鼠脾细胞在ＣｏｎＡ诱导下增殖反应明显高于对照组。过热大鼠脾细胞产生ＩＬ－１的能力明显高于对照组。     

病毒与人类基因组同源性实探

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引的，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明，有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增，ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４－２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在     

以DNA测序及限制性酶切反应鉴定PCR产物特异性

目的：对ＰＣＲ产物进行特异性鉴定。方法：采用ＤＮＡ测序及限制性酶切反应方法。结果：ＤＮＡ测序可排除ＰＣＲ产物的假阳性，另一种简单易行的方法是，设计包含某一已知偏位性酶切位点的特异引物进行ＰＣＲ，通过酶切反应及电泳分析鉴定其特异性结论：此方法对ＰＣＲ产物特异性鉴定十分必要。     

RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化。方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定;MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期。结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组(1.96±0.76%和2.04±0.70%,P<0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02%和39.23±3.63%,P<0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01%和60.77±3.63%,P<0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01或0.05)。结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

三取代型钛钨硅酸盐体内抑瘤效应的免疫机制探讨

目的:探讨三取代型钛钨硅酸盐(WT)体内抑瘤效应的免疫机制。方法:建立荷H22肝癌小鼠模型,WT连续灌胃10d,取出肿瘤称重测定抑瘤率。用MTT比色法测定荷H22肝癌小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性。通过形态学观察和流式细胞仪检测WT诱导BEL-7402细胞的凋亡。结果:WT可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长(P<0.05),提高荷瘤小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性(P<0.05),并诱导肿瘤细胞发生凋亡。结论:WT的抑瘤作用与机体免疫功能的增强有关。     

药用昆虫凹纹胡蜂化学成分及抗炎活性研究

目的 研究药用昆虫凹纹胡蜂Vespa velutina auraria的化学成分及其抗炎活性。方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶和半制备高效液相等色谱技术进行分离纯化,通过核磁共振技术对化合物的结构进行表征和解析。以脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）联合γ干扰素（interferon-γ,IFN-γ）诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7作为炎症模型,探讨提取物及单体对炎症因子mRNA表达的影响。结果 从凹纹胡蜂醋酸乙酯部位分离鉴定了16个化合物,分别为邻苯二酚（1 ）、对羟基苯甲醛（2 ）、对羟基苯丙酸甲酯（3 ）、4-羟基苯醋酸乙酯（4 ）、3,4-二羟基苯乙醇（5 ）、3,4-二羟基苯酰乙醇（6 ）、3,4-二羟基苯甲酸（7 ）、N-乙酰基-2-乙氧基-2-（3,4-二羟基苯基）乙胺（8 ）、2-（2-羟基丙酰氧基）丙酸甲酯（9 ）、对甲氧基苯甲醇（10 ）、3,4-二羟基苯甲酸甲酯（11 ）、α-乙基葡萄糖苷（12 ）、2-羟基-3-苯基丙酸甲酯（13 ）、N-乙酰基-2-（3,4-二羟基苯基）乙胺（14 ）、对甲基苯乙醇（15 ）和胸腺嘧啶（16 ）。凹纹胡蜂醇提物及提取物醋酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位在300 μg/mL时均能有效减少由LPS联合IFN-γ诱导RAW264.7细胞炎症因子一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）基因相对表达量;化合物2 、3 、5 、6 、9～11 对LPS联合IFN-γ诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）mRNA表达有抑制作用（P<0.01）。结论 凹纹胡蜂醇提物及不同极性部位能降低炎症细胞中iNOS的表达,具有一定的抗炎作用。化合物1～16 均为首次从凹纹胡蜂分离鉴定,其中2 、3 、5 、6 、9～11 可能为潜在的活性单体。     

D-半乳糖亚急性中毒拟衰老模型鼠免疫功能及生化指标变化的研究

目的研究D-半乳糖慢性中毒所致衰老模型鼠免疫功能与生化指标变化。方法制备D-半乳糖亚急性中毒导致的衰老鼠模型；给药第8周时以P815细胞腹腔注射免疫小鼠，诱导特异性CTL细胞并用MTT法检测CTL细胞杀伤活性；间隔1周后以10％淀粉腹腔注射，诱导腹腔巨噬细胞，吞噬中性红法检测腹腔巨噬细胞（Mφ）功能；给药第10周杀鼠，取胸腺计算胸腺指数；采用流式细胞术检测胸腺细胞凋亡情况；MTT法检测T淋巴细胞转化增殖功能与NK细胞杀伤活性；取脾细胞48h培养上清，检测IL-2、INF-γ、TNF三种TH1型细胞因子的活性；硫代巴比妥酸（TBA）法检测血清中丙二醛（MDA）含量，黄嘌呤氧化酶法检测血清中总超氧化物歧化酶（SOD）活性；ISP半自动生化分析仪检测血清中血糖（Glu）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）的含量。结果衰老鼠胸腺指数低于对照组（P〈0．05）；胸腺细胞凋亡高于对照组（P〈0．05）；T淋巴细胞增殖率显著低于对照组（P〈0．05）；IL-2、INF-γ、TNF三种TH1型细胞因子的活性较对照组均显著降低（P〈0．05）；与对照组比较VE衰老鼠腹腔Mφ细胞吞噬功能明显降低（P〈0．05）、NK细胞杀伤活性也有所降低（P〈0．05），但CTL细胞的杀伤活性变化不明显（P〉0．05）。衰老模型鼠血清中MDA含量显著高于正常对照组（P〈0．05），衰老模型鼠血清总SOD含量显著低于正常对照组（P〈0．05）。模型鼠血清中的血糖、总胆固醇、甘油三酯含量显著高于正常对照组（P〈0．05）。结论D-半乳糖慢性中毒所致衰老模型鼠免疫功能明显减退，氧自由基MDA、SOD的改变及生化学指标血糖、血脂改变趋势与自然衰老的动物模型相一致。     

真核表达hCAP-18/LL-37成熟肽对树突状细胞表面分子表达的影响

目的：研究真核表达的人源阳离子抗菌肽-18(hCAP-18)成熟肽LL-37对树突状细胞(DCs)表面分子表达的影响。方法：通过基因克隆方法构建hCAP-18成熟肽LL-37真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,转染人胚肾HEK293细胞株,转染48 h后收获培养上清,与体外以rh-GM-CSF、rh-IL-4联合培养定向诱导分化的不成熟DCs共培养48 h,收获DCs;流式细胞仪检测DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达。结果：成功构建成熟肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-LL-37,并实现在其真核细胞HEK293中的表达;流式细胞仪结果显示,pDNA4/Myc-His-LL-37基因转染HEK293细胞培养上清刺激组DCs中CD40及HLA-DR的表达阳性率与对照组比较均明显升高(P<0.05)。结论：构建了真核表达的hCAP-18成熟肽LL-37,其可上调DCs表面分子CD40及HLA-DR的表达,促进DCs功能的成熟。     

中药肠炎康对溃疡性结肠炎大鼠免疫功能的影响

目的 :探讨溃疡性结肠炎 ( UC)发病过程中的免疫异常机制及中药肠炎康 ( CYK)口服液对本病的治疗机理。方法 :通过免疫方法成功复制 UC大鼠模型 ,应用 CYK口服液及对照药物柳氮磺胺吡啶 ( SASP)分别灌胃治疗 5 0 d,观察并分析治疗前后脾细胞 Con A刺激指数、LPS刺激指数、IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性变化。结果 :模型组大鼠脾细胞 Con A刺激指数、NKc杀伤活性明显下降 ( P<0 .0 1 ) ,IL- 2、IFN- r水平也有下降 ( P<0 .0 5 ) ;而脾细胞 LPS刺激指数明显升高( P<0 .0 5 )。治疗后 ,CYK组大鼠脾细胞 Con A刺激指数、IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性同模型组比较均有明显提高 ;但脾细胞 LPS刺激指数同模型组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。SASP组大鼠脾细胞 LPS刺激指数同模型组比较明显下降 ( P<0 .0 5 ) ;其 IL- 2、IFN- r水平及 NKc杀伤活性同模型组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :溃疡性结肠炎大鼠细胞免疫功能减退 ,体液免疫增强。CYK能促进 UC大鼠肠粘膜溃疡修复及炎症消退 ,在恢复其细胞免疫功能方面 ,优于 SASP,但对 UC大鼠体液免疫的抑制作用不及 SASP。     

在免疫学实验教学中以提出问题为基础的学习方式教学的几点体会

免疫学实验教学是免疫学教学的重要组成部分,传统教学模式表现为教与学之间为“主从”关系,学生只获得了～点“金子”,而没有获得“点石成金的指头”。因此,需要探索新的模式。尝试以“提出问题为基础的学习（Problem－basedlearningPBL）”的教学方式,取得了较理想的效果