血清双向凝胶电泳体系的建立

目的:建立血清双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)技术体系.方法:用Proteoprep blue albumin depletion kit将血清中高峰度蛋白去除.预冷丙酮沉淀蛋白质后,加入样品溶解液充分溶解,进行等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elecrophoresis,SDS-PAGE),行硝酸银染色后,运用ImageMaster软件行初步分析.结果:通过调整,优化2-DE技术条件,建立了稳定的2-DE技术.结论:建立了相对稳定的人血清蛋白质2-DE技术,其稳定性、重复性好,为开展疾病蛋白质组学的研究奠定了基础.     

悬吊对大白鼠骨骼肌蛋白质和核酸含量的影响

本实验以大白鼠躯体悬吊作为模拟微重力的动物模型,通过观察大白鼠骨髂肌蛋白质和核酸的含量变化研究低负荷/运动减退对骨骼肌的影响实验结果表明大白鼠悬吊14天后,后肢比目鱼肌和趾长伸肌都明显萎缩,尤以前者萎缩严重;萎缩的骨骼肌蛋白质相对含量和绝对含量降低,DNA和RNA 含量降低。本文对这些变化的机制进行了讨论。     

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

目的探讨转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在紫杉醇诱导宫颈腺癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定紫杉醇的最佳浓度和处理时间;PCR技术构建pCI neo/CREB(PN)重组质粒及pCI neo/CREB-M(PM)定点突变质粒;流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表达。结果紫杉醇抑制HeLa细胞增殖的有效条件为0.1μmol/L处理24 h。0.1μmol/L紫杉醇诱导G2/M细胞数量增加,并呈时间依赖性;cyclin A表达量下调,cyclin B1、D1和pCREB表达量上调。此外,紫杉醇的处理对cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表达量并无显著性改变。然而,PM联合紫杉醇处理后显著性地反转了紫杉醇单独处理引起的cyclin A下调、cyclin B1和cyclin D1的上调,并且细胞周期G2/M期阻滞显著性减少。结论转录因子CREB介导的靶向细胞周期蛋白表达在紫杉醇诱导的细胞周期阻滞过程中扮演重要角色。     

微RNA在胰腺癌患者血浆中的表达及临床意义

目的 探讨微RNA(microRNA,miR)在胰腺癌诊断中的意义,为胰腺癌的早期诊断提供一种新的方法.方法 收集37例胰腺癌患者血浆标本及临床资料,10例正常人血浆标本作为对照.采用RT-PCR方法,以U6为内参,检测4种miR(miR-190、miR-196a、miR-221、miR-222)在胰腺癌患者及正常人中的相对表达量,并分析其与胰腺癌临床病理特征及CA199的关系.结果 胰腺痛患者血浆中4种miR的表达量均显著高于正常人.其相对表达量分别为miR 190(3.50±4.07)、miR-196a(4.21±4.13)、miR-221(4.00±4.11)、miR-222(2.57±2.55).其中miR-196a的高表达和胰腺癌临床分期呈正相关(P＜0.05),与其他病理特征无关.其余3种miR与临床病理特征均无关.4种miR的相对表达量与CA199浓度无相关性.结论 miR-190、miR-196a、miR-221、miR-222在胰腺癌患者血浆中显著高表达.血浆中miR-190、miR-196a、miR-221、miR-222的检测可能为胰腺癌的早期诊断提供一个新方法.     

重组ACE2抑制人脐动脉平滑肌细胞Profilin-1表达及增殖

 摘要 目的：探讨重组血管紧张素转换酶2（ACE2）基因对血管平滑肌细胞前纤维蛋白-1（Profilin-1）表达及细胞增殖的影响。方法：培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC），用重组ACE2基因（rACE2）干预，进行血管紧张素II（Ang II）刺激实验，分别用MTT法、实时定量PCR及Western blot检测HUASMC增殖与Profilin-1表达。 结果：与对照组相比，经Ang II（100 nmol /L）刺激6 h后，HUASMC中Profilin-1 表达明显增高（3.50±0.30 vs. 1.00±0.10, P<0.05）。而重组ACE2基因干预显著抑制上述增加（1.73±0.12 vs. 3.50±0.30, P<0.05）。结论：ACE2基因过表达可明显逆转HUASMC中Ang II诱导的Profilin-1表达上调。     

重组ACE2抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白-1表达及增殖

目的探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因对血管平滑肌细胞前纤维蛋白-1(Profilin-1)表达及细胞增殖的影响。方法培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),用重组ACE2基因(rACE2)干预,进行血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激实验,分别用MTT法、实时定量PCR及Western blot检测HUASMC增殖与Profilin-1表达。结果与对照组相比,AngⅡ(100 nmol/L)刺激6 h后,HUASMC中Profilin-1表达明显增高(3.50±0.30 vs 1.00±0.10,P<0.05)。重组ACE2基因干预显著抑制上述增加(1.73±0.12 vs 3.50±0.30,P<0.05)。结论 ACE2基因过表达可明显逆转HUASMC中AngⅡ诱导的Profilin-1表达上调。     

帕金森病患者脑脊液蛋白质组学的研究

目的：通过脑脊液蛋白质组学实验技术体系,筛选并鉴定帕金森病患者脑脊液特异蛋白,初步探讨帕金森病的发病机制。方法：选自广州医学院第一附属医院神经内科与脑深部电刺激术（deepbrainstimulation,DBS）治疗中心帕金森病患者和对照组脑脊液为研究对象,进行双向凝胶电泳,经银染、图像分析寻找差异蛋白质,并进行质谱分析鉴定。结果：鉴定得到4种差异蛋白质,分别是CENP—E、Tetranectin非钙离子C型凝集素样结构域、假想蛋白FLJ38159和KIAA1640。帕金森病组中KIAA1640蛋白含量占总蛋白含量的比例（0．09±0．05）％高于对照组（0．03±0．00）％,CENP—E（0．04±0．02）％、Tetranectin非钙离子C型凝集素样结构域（0．04±0．02）％、假想蛋白FLJ38159（0．11±0．06）％蛋白含量均低于对照组[（0．08±0．01）％,（0．07±0．02）％,（0．17±0．04）％],P〈0．05。结论：本研究鉴定出4种差异蛋白,这些蛋白可能参与帕金森病的发病,但具体机制及其在帕金森病发病中的作用有待进一步研究。