实时定量RT—PCR检测临床肝组织标本中CXCL16及其受体的表达

[目的]建立实时定量RT—PCR方法并检测不同病理状态的肝脏组织中CXCL16趋化因子及其受体CXCR6的表达变化。[方法]建立外参照标准和灵敏的荧光实时定量RT—PCR方法，检测人正常肝组织、癌旁肝组织及癌组织标本中的趋化因子CXCL16及其受体的表达变化，进一步测定和比较其它相关的趋化因子表达谱的表达情况。[结果]获得了灵敏特异的实时定量RT—PCR方法，CXCL16及其受体在癌旁肝损伤组织中显著上调表达，显著高于趋化因子表达谱中其它趋化因子的表达变化，提示它在淋巴细胞尤其是T细胞介导的肝脏损伤过程中可能发挥重要作用。[结论]简便可靠的实时定量RT—PCR适用于检测病理组织中特异基因的表达变化，趋化因子表达谱改变尤其是CXCL16及其爱体CXCR6的显著变化可能与肝脏疾病的病理发生发展密切相关。     

基于基因免疫制备抗人绒毛膜促性腺激素β亚基单克隆抗体及其特性研究

用真核表达人绒毛膜促性腺激素β亚基((human chorionic gonadotrophinβ,hCGβ)的重组质TR421-hCGβ免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,ELISA法筛选阳性细胞株,经过多次的克隆化培养,最终获得10株持续、稳定分泌抗hCGβ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。随机抽取6H1杂交瘤细胞进行抗体的制备、纯化及免疫学特性的分析。间接ELISA法证明6H1单抗属于IgG2a亚类。Western blot证明6H1单克隆抗体可以特异性结合hCGβ,间接免疫荧光和流式细胞仪等结果表明,6H1单克隆抗体能够不同程度的结合不同来源的肿瘤细胞膜上表达的hCGβ分子,为进一步研究其生物学功能奠定了物质基础。     

超抗原SEA对CD4~+T细胞TCR V_β链的取用格局

用超抗原葡萄球菌肠毒素A (SEA )在体内或体外刺激C57BL/ 6小鼠 2种不同的TCRVβ链T细胞亚群 (Vβ3+ CD4+ 、Vβ1 1 + CD4+ T细胞 ) ,观察二者对超抗原的免疫应答。结果显示 :体内初次刺激后 ,2种T细胞亚群在刺激后第 2天都发生增殖 ,随后均逐渐下降至对照水平。但第 2次用同样剂量刺激后 ,Vβ3+ CD4+ T细胞群对SEA的再次刺激表现出增殖 ,而Vβ1 1 + CD4+ T细胞群对SEA再次刺激则表现出免疫无能。体外初次、再次刺激也分别获得与体内实验相同的结果。表明超抗原SEA可选择性地取用Vβ3+ CD4+ T细胞群并对其发生增殖 ,即超抗原SEA对CD4+ T细胞TCRVβ链的取用格局各有不同。     

TLR在小鼠胸腺中的表达及其在胸腺细胞发育中的可能作用

检测体外培养和体内发育过程中,胎鼠胸腺处于不同发育阶段时Toll样受体(TLR)的表达,阐明TLR表达量与胸腺细胞发育相关性,为TLR和胸腺细胞发育分化相关研究提供基础数据。无菌取15d胎龄胎鼠胸腺进行体外培养(FTOC),在培养不同时间点(2d,4d,6d),检测处于不同发育期胸腺TLR的表达;同时在孕期不同天数(15~19d),分别取胎鼠胸腺,检测在体内发育过程中胸腺TLR的表达;在FTOC中加入二脱氧鸟苷培养6d以制备胸腺基质细胞,检测基质细胞与胸腺细胞TLR表达情况。结果:小鼠胸腺中检测到多种TLR。FTOC培养中:培养第2天(F2)开始检测到各种TLR,到培养第6天(F6),TLR1,TLR3,TLR6,TLR7,TLR8明显上调,而TLR4,TLR5保持低水平,TLR4在培养第6天又下降;体内发育过程中:TLR6表达量随胎龄增加有较明显上调,TLR1,TLR3-8保持低水平表达;TLR2,TLR9体内体外都未检测到明显表达。在对胸腺细胞与基质细胞TLR表达比较中发现TLR1,TLR5,TLR6,TLR7高表达于胸腺细胞。胎鼠胸腺表达某些TLR,并且在发育不同阶段表达量有所改变,提示TLR可能参与胸腺细胞的发育过程。     

抗核抗体启动原新观点的学术意义

新近 ,我们根据本室近十年的研究结果 ,提出了活化淋巴细胞核抗原量和性质的改变是诱导抗核抗体生成的启动原的新观点 ,其主要依据是 :①ＳＬＥ患者外周血Ｂ细胞、Ｔ细胞和单核细胞已被活化[1,2 ] ;②空肠弯曲菌 (ＣＪ Ｓ131)活化的Ｔ细胞接种 (ＴＣＶ)不仅不能预防和治疗由ＣＪ Ｓ131所引起的ＳＬＥ样反应 ,反而可引起抗核抗体 (ＡＮＡ)生成[3 ] ;③不同原因活化的Ｔ细胞、Ｂ细胞和ＬＡＫ细胞均能诱导ＡＮＡ生成[4] ;④活化淋巴细胞核、染色质以及ｄｓＤＮＡ和组蛋白均具有免疫原性[5 7] ;⑤活化淋巴细胞的核抗原如ＳｍＢ Ｂ’表达明显增高…     

γ1neo-hgp100基因的体外转染表达及体内免疫保护效应

肿瘤转移是一个复杂的、多步骤的、肿瘤细胞和宿主细胞相互作用的过程，是恶性肿瘤的重要生物学行为，往往是导致病人死亡的直接原因。随着分子生物学的发展，对肿瘤转移抑制的研究已进入分子水平，nm23基因即是近年来发现并被证实与多种肿瘤的转移有关的较新的肿瘤抑制基因，该基因可能通过影响细胞内微管的聚合／解聚和G蛋白介导的信号传导，而参与肿瘤的发生和发展。     

调节性B细胞与自身免疫性疾病

以往认为，B淋巴细胞在自身免疫病中作为致病性淋巴细胞发挥作用。近年却发现，在自身免疫病小鼠模型中，采用B细胞清除疗法会加重疾病进程，提示B细胞具有免疫调节功能。调节性B细胞（Breg）是新近发现的一群新的B细胞亚群，它存在于B细胞多个亚型中。Breg通过刺激其表面分子，诱导释放调节性细胞因子如IL-10发挥调节作用。在不同自身免疫性疾病中，各种免疫细胞都可以成为Breg作用的靶细胞，表明Breg在自身免疫病复杂网络中的强大调节作用。     

Legumain在荷瘤与正常小鼠脾细胞中的差异性表达

背景与目的:已知新发现的半胱氨酸蛋白酶legumain可能参与肿瘤的发生发展.本研究检测了legumain在荷瘤组织及荷瘤与正常小鼠免疫细胞如脾脏T、B和巨噬细胞中的差异表达,为研究legumain在抗肿瘤免疫中的作用提供基础数据.方法:取正常和4T1荷瘤的雌性BALB/c小鼠的肿瘤组织或脾细胞,分离巨噬细胞和T、B淋巴细胞,检测legumain的基因表达水平.结果:在荷瘤小鼠的肿瘤组织和淋巴器官均检测到高表达的legumain,而且随着肿瘤进展,其表达水平相应提高;legumain除高表达于巨噬细胞外,脾脏中的淋巴细胞,特别是T淋巴细胞,与正常小鼠相比其legumain的表达水平显著升高.结论:荷瘤小鼠的肿瘤组织及其脾脏巨噬细胞和T细胞中高表达legumain,并且与肿瘤的发生发展呈正相关.     

灭活肿瘤细胞诱导自身抗体的产生及其作用

目的 探索肿瘤细胞能否诱导机体产生抗dsDNA自身抗体及该自身抗体在肿瘤免疫中的作用。方法 以灭活SP2／0肿瘤细胞3次免疫Balb／c小鼠，末次免疫2周后采血，ELISA法检测上清中抗dsDNA自身抗体的表达水平。在此基础上，用自身或不同来源的肿瘤细胞攻击经灭活SP2／0免疫的Balb／c小鼠。结果 肿瘤细胞免疫小鼠可诱导产生较高滴度的抗dsDNA自身抗体，动态检测表明该抗体滴度在末次免疫后第3周达到高峰。体内攻击实验表明：抗dsDNA自身抗体滴度的降低与肿瘤细胞攻击后小鼠荷瘤大小相关联，提示机体可能通过消耗自身抗体抵抗肿瘤的生长，即自身抗体具有一定的抗肿瘤效应。结论 灭活肿瘤细胞免疫小鼠诱导的抗dsDNA自身抗体参与了机体的抗肿瘤应答。     

4T1荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的表型及吞噬功能的研究

目的:研究小鼠乳腺癌实验动物模型中,荷瘤晚期肿瘤相关巨噬细胞的表型和功能,并探讨其与M2型巨噬细胞的关系.方法:从4T1荷瘤4周的雌性BALB/c小鼠中获取肿瘤相关巨噬细胞,用RT-PCR方法检测其巨噬细胞相关分子CCL3、CCL22、iNOS和Arg Ⅰ的表达水平,用FACS检测巨噬细胞中CDl6/32+和CD206+细胞所占比例,并通过酵母菌吞噬试验评估其功能.结果:肿瘤相关巨噬细胞与荷瘤小鼠的脾脏巨噬细胞相比,表达较高水平的CCL22和CD206,并且对酵母菌的吞噬能力显著下降.结论:4T1荷瘤4周小鼠肿瘤相关巨噬细胞在表型和功能上倾向于替代性活化的巨噬细胞.