CXCL16在小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型，通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化，根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析，比较CXCL16的表达水平和肝脏损伤程度的关系。从模型中各个时间点的肝损伤组织中分离浸润单核细胞，计算浸润的细胞数量变化，并进一步分析其中主要的CD4和CD8T淋巴细胞亚群的数量变化，研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用和意义。结果成功复制了小鼠免疫性肝损伤模型，发现在肝脏炎症和损伤中CXCL16表达水平显著上调，CXCL16的表达水平与肝脏损伤程度密切相关，肝脏组织浸润的单核细胞数晕明显增加，淋巴细胞尤其是CD4 、CD8 T淋巴细胞数量也有明显的增加。结论小鼠肝脏损伤过程中CXCL16表达水平的增加与肝损伤程度密切相关，CXCL16趋化淋巴细胞浸润可能是导致肝脏损伤的重要机制之。     

4T1荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的表型及吞噬功能的研究

目的:研究小鼠乳腺癌实验动物模型中,荷瘤晚期肿瘤相关巨噬细胞的表型和功能,并探讨其与M2型巨噬细胞的关系.方法:从4T1荷瘤4周的雌性BALB/c小鼠中获取肿瘤相关巨噬细胞,用RT-PCR方法检测其巨噬细胞相关分子CCL3、CCL22、iNOS和Arg Ⅰ的表达水平,用FACS检测巨噬细胞中CDl6/32+和CD206+细胞所占比例,并通过酵母菌吞噬试验评估其功能.结果:肿瘤相关巨噬细胞与荷瘤小鼠的脾脏巨噬细胞相比,表达较高水平的CCL22和CD206,并且对酵母菌的吞噬能力显著下降.结论:4T1荷瘤4周小鼠肿瘤相关巨噬细胞在表型和功能上倾向于替代性活化的巨噬细胞.     

CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤

目的研究CXCL16抗体体内阻断对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法克隆、表达和纯化小鼠趋化因子CXCL16活性蛋白，免疫动物制备特异性抗体。抗体体内注射免疫性肝损伤模型小鼠，观察CXCL16抗体对肝脏损伤、ALT水平及小鼠生存率的影响。结果获得了高纯度的活性CXCL16重组蛋白及其特异性抗体，特异性抗体阻断明显改善肝脏的病理损伤，降低血清中ALT水平、延长模型组小鼠的存活时间。结论获得了具有趋化活性的CXCL16蛋白和特异性抗体，CXCL16抗体对卡介苗和脂多糖诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用。     

基于基因免疫制备抗人绒毛膜促性腺激素β亚基单克隆抗体及其特性研究

用真核表达人绒毛膜促性腺激素β亚基((human chorionic gonadotrophinβ,hCGβ)的重组质TR421-hCGβ免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,ELISA法筛选阳性细胞株,经过多次的克隆化培养,最终获得10株持续、稳定分泌抗hCGβ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。随机抽取6H1杂交瘤细胞进行抗体的制备、纯化及免疫学特性的分析。间接ELISA法证明6H1单抗属于IgG2a亚类。Western blot证明6H1单克隆抗体可以特异性结合hCGβ,间接免疫荧光和流式细胞仪等结果表明,6H1单克隆抗体能够不同程度的结合不同来源的肿瘤细胞膜上表达的hCGβ分子,为进一步研究其生物学功能奠定了物质基础。     

CVB3感染对固有免疫识别受体MDA-5表达的影响及其意义

目的研究柯萨奇B3病毒(coxsackievirus group B type3,CVB3)感染对固有免疫识别受体—黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation-associated gene-5,MDA-5)表达的影响及其意义。方法采用RT-PCR扩增CVB3正负链以确证感染成功,CVB3感染正常HeLa细胞后用RT-PCR的方法检测MDA-5和IFN-β的表达变化,RT-PCR检测CVB3感染IFN-α处理过细胞MDA-5的表达情况,将细胞分为对照组(转染空载体)和MDA-5组(转染MDA-5表达质粒pEF-BOS-MDA-5),将空载体或pEF-BOS-MDA-5质粒与IFN-β启动子荧光报告质粒和作为内参照的pc MV-lacZ质粒瞬时转染进两组细胞,CVB3感染8h后收集细胞检测IFN-β启动子活性变化。结果与未感染组相比,CVB3感染下调固有免疫识别受体MDA-5及IFN-β的表达;IFN-α可明显上调MDA-5的表达,而CVB3感染抑制IFN-α的这种上调作用;CVB3感染下调MDA-5介导的IFN-β启动子的活化。结论CVB3感染能下调固有免疫识别受体MDA-5的表达并抑制MDA-5对IFN-β启动子的活化,从而下调IFN-β的表达,这可能是病毒性心肌炎中病毒逃逸机体免疫应答的机制之一。     

C家族趋化因子XCL1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用

为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生。结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答。5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%。3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶。提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生。     

CXCL16趋化因子在小鼠免疫性肝损伤中的作用

目的：研究CXCL16在免疫性肝脏损伤中的表达及其功能。方法：运用实时定量PCR检测CXCL16在小鼠肝损伤模型中的表达变化；通过特异中和抗体的体内阻断CXCL16功能实验，观察ALT水平、肝脏病理变化、TNF-a和FasL凋亡基因表达、肝脏内浸润淋巴细胞及其主要T细胞亚群的数量变化以及小鼠存活率等指标，研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用，并初步探讨它的可能机理。结论：肝脏组织中CXCL16的上调表达介导了特异性淋巴细胞向肝脏局部组织的趋化和募集，并协同调节其它相关分子的表达，参与肝组织损伤。     

CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤（摘要）

目的研究CXCL16抗体体内阻断对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法克隆、表达和纯化小鼠趋化因子CXCL16活性蛋白，免疫动物制备特异性抗体。抗体体内注射免疫性肝损伤模型小鼠，观察CXCL16抗体对肝脏损伤、ALT水平及小鼠生存率的影响。结果获得了高纯度的活性CXCL16重组蛋白及其特异性抗体，特异性抗体阻断明显改善肝脏的病理损伤，降低血清中ALT水平、延长模型组小鼠的存活时间。结论获得了具有趋化活性的CXCL16蛋白和特异性抗体，CXCL16抗体对卡介苗和脂多糖诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用。     

CVB3感染对星形胶质细胞表达agrin的影响及意义

目的检测柯萨奇B3病毒（coxsackievirus group B type3，CVB3）感染体外培养的星形胶质细胞后集聚蛋白（agrin）的表达变化及其意义。方法采用免疫细胞化学的方法鉴定培养的星形胶质细胞，在显微镜下观察CVB3感染后的细胞形态，并用RT-PCR方法扩增CVB3RNA的正负链以确证感染成功，用RT-PCR检测CVB3感染细胞后agrin的动态表达变化。用脂质体将agrin反义质粒pcDNA3-As-AG转染到星形胶质细胞，并用RT-PCR检测转染的细胞中agrin的表达。3H-TdR掺人法测定CVB3不同感染时间点的星形胶质细胞裂解液和经agrin反义质粒pcDNA-As-AG转染细胞后的细胞裂解液对T细胞增殖的影响。结果（1）CVB3感染星形胶质细胞后agrin的表达水平下调。（2）病毒感染后随着agrin表达量的降低，星形胶质细胞裂解液对T细胞的活化增殖作用也降低。未转染和空质粒转染的细胞裂解液对T细胞的活化增殖有促进作用，而用反义核酸技术下调星形胶质细胞agrin表达后，星形胶质细胞裂解液对T细胞增殖的促进作用也随之下降，进一步证实agrin表达水平的下调可影响T细胞的活化和增殖。结论CVB3感染星形胶质细胞后agrin表达水平下凋，降低对T细胞活化增殖的能力，这可能是CVB3病毒性脑炎中，病毒逃逸机体免疫清除的一种机制。     

小鼠乳腺癌模型中CD4~+CD25~(bright)CCR6~+Treg的检测及其意义

为检测CD4+CD25brightCCR6+Treg在小鼠乳腺癌实验动物模型中的分布,并探讨其意义。采用FACS检测正常小鼠和4T1荷瘤小鼠中CD4+CD25brightTreg的记忆分子CCR6的表达水平,同时检测CD4+CD25brightTreg的CCR6+和CCR6-两个亚群的Foxp3表达情况;用增殖抑制实验观察了两个亚群分别对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用;用FACS检测CD4+CD25brightCCR6+Treg在正常小鼠和4T1荷瘤小鼠中PBMC、LN和TIL中的分布情况。结果:4T1荷瘤小鼠中CD4+CD25brightTreg的记忆分子CCR6的表达水平较正常小鼠增加;CD4+CD25brightTreg的CCR6+和CCR6-两个亚群均高表达Foxp3,均能在体外有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖;与正常对照相比,CD4+CD25brightCCR6+Treg在4T1荷瘤模型的引流淋巴结中比例明显增加,并在肿瘤局部存在显著的富集。上述结果提示在肿瘤免疫中存在CD4+CD25brightCCR6+Treg,其具有效应/记忆样表型,并在肿瘤局部有明显的富集,这可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要机制。