隐睾发生过程中DNA甲基化状态和甲基化转移酶表达的实验研究

目的研究环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯[Di—（2-ethylhexy）phthalate,DEHP]作用于孕鼠后,胎鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的变化及3种DNA甲基化转移酶的表达情况;探讨DEHP所致表观遗传修饰改变在睾丸下降过程中的作用。方法妊娠昆明小鼠（KMmice）随机分为3组,即正常对照组、玉米油对照组和DEHP实验组,每组15只。玉米油对照组和DEHP实验组自妊娠第12．5天到妊娠第18．5天分别持续经口予以玉米油和DEHP,用量按每日500mg／kg,正常对照组不予灌药。采用高效液相色谱仪检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测3种DNA甲基化转移酶的表达量。结果正常对照组和玉米油对照组DNA甲基化水平和3种甲基化转移酶的表达均无统计学意义（P〉0．05）：DEHP实验组DNA甲基化水平比对照组增高约10％。与对照组相比,差异有显著统计学意义（P〈0．05）;实验组3种甲基化转移酶的表达量均比对照组高,与对照组相比,差异有显著统计学意义（Dnmt1,P〈0．05;Dnmt3a,P〈0．01;Dnmt3b,P〈0．05）。结论环境内分泌干扰物DEHP通过影响3种甲基化转移酶的表达而导致基因组DNA甲基化水平升高,从而抑制睾丸下降过程中多种基因的表达,发生隐睾。DNA甲基化等表观遗传学修饰的改变可能是DEHP诱发隐睾的分子机制之一。     

一种改良大鼠肾移植模型的构建

目的探索一种简单易行的大鼠肾移植模型构建方法。方法分析重庆医科大学附属儿童医院180余例同种异体大鼠肾移植模型构建中供肾获取、修剪、血管吻合及输尿管重建过程, 记录手术操作要点、时间及成功率, 分享改良肾移植模型构建经验。计数资料以频数(%)表示, 计量资料以均数±标准差表示。结果完成180余例异体异位大鼠肾移植模型构建, 成功率约85%(154/181), 受体手术时间70～75 min, 血管吻合时间为(25.3±3.8) min。结论改良肾移植模型易于掌握、耗时较短、成功率高、切实有效。     

神经源性膀胱上尿路损害的危险因素分析

目的 探讨神经源性膀胱(neurogenic bladder,NB)患儿发生上尿路损害的危险因素.方法 以2021年1月至2021年5月重庆医科大学附属儿童医院151例诊断为NB的住院患儿为研究对象,根据是否发生上尿路损害分为上尿路损害组(n=88)和上尿路正常组(n=63),比较两组一般特征(性别、年龄、住院时间、病...     

邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯导致隐睾症发生跨代遗传的机制研究

目的 探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)于性腺发育的关键时期作用于孕鼠(0),研究F1-F3代隐睾跨代遗传的演变情况及各代睾丸基因组DNA甲基化转移酶水平的改变情况.方法 妊娠SD大鼠随机分为两组:正常对照组和DEHP实验组,实验组自妊娠第七天(GD7)到第十九天(GD19)持续经口予以DEHP 750 mg·kg-1 ·d-1灌胃,观察子代隐睾发生情况,雌鼠受孕率;记录大鼠体重和睾丸、附睾重量以及AGD值,观察精子数量和质量;观察连续三代大鼠睾丸组织形态的演变情况,检测DNA甲基化转移酶变化情况.结果 孕鼠在孕期(GD7-GD19)暴露于DEHP,第一代(F1)隐睾发生率为30％,第二代(F2)隐睾发生率为12.5％,第三代(F3)未见隐睾发生;交配实验F1代受孕率50％,F2代75％,F3代100％;HE染色发现F1代睾丸生精上皮明显萎缩,生精细胞少,F2代有所改善,F3代形态趋于正常.Real Time-PCR、免疫组化和Western Blot表明DNA甲基化转移酶的表达随着遗传代数的增加而上调,差异有统计学意义.结论 DEHP损伤大鼠雄性生殖功能,通过改变DNA甲基化转移酶的表达,继而导致基因组印记甲基化修饰模式改变并遗传给下一代,从而使子代雄性生殖系统发育的关键性印记基因作用失衡,并最终导致子代产生隐睾,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一.     

儿童隐睾症二次手术的临床疗效评价

目的 探讨儿童隐睾症二次手术的必要性及其临床疗效.方法 回顾性分析2012年1月至2020年4月本科接诊的53例首次隐睾术后睾丸未降至正常位置或术后复发的患儿病例资料,根据有无进行二次手术分为再手术组39例及观察组(未行二次手术,仅门诊随访)14例,随访时间(42.38±27.57)个月,最长随访8年.总结两组患儿随访过程中睾丸位置、有无并发症、恶变等指标.根据患儿年龄分为幼儿及青少年两个亚组,对比随访期睾丸的发育情况.结果 再手术组患儿术后睾丸均降至阴囊内,术中发现30例鞘状突未闭,2例睾丸发生囊皮样改变.随访过程中1例出现睾丸血供减少,2例睾丸未再发育.观察组患儿中有2例睾丸位置发生变化,3例睾丸未再发育,1例出现血供减少.再手术组患儿睾丸发育情况优于观察组(P＜0.05),所有患儿随访期间均无睾丸恶变.结论 隐睾二次手术成功率高且术后睾丸发育情况优于仅观察随访的患儿,临床应积极实施.     

低氧环境下异丙酚对新生大鼠学习记忆功能的影响

目的 探讨低氧环境下异丙酚对新生大鼠学习记忆功能的影响.方法 健康SD大鼠84只,日龄7 d,按照随机数字表法分为6组(n=14):异丙酚低氧组(PH组)、异丙酚空气组(PA组)和异丙酚纯氧组(PO组)分别腹腔注射异丙酚50 mg/kg,1次/d,连续7 d;生理盐水低氧组(CH组)、生理盐水空气组(CA组)和生理盐水纯氧组(CO组)腹腔注射生理盐水5.0 ml/kg,1次/d,连续7 d.每次注射完毕后分别放于低氧(18%O2)、空气和纯氧环境中.记录给药后SaO2和RR,待翻正反射恢复后放回鼠笼.于第7天注射完毕后24 h,各组随机取6只大鼠,取脑组织,观察海马神经元凋亡情况.其余大鼠于给药后2周进行Morris水迷宫实验,测试学习记忆功能.结果 与CO组比较,PO组RR降低,T1.2时逃逸潜伏期延长(P＜0.05);与CA组比较,PA组RR和SaO2降低,凋亡指数升高,逃逸潜伏期延长,穿越原平台区次数减少(P＜0.05);与CH组比较,PH组RR和Sa02降低,凋亡指数升高,逃逸潜伏期延长,穿越原平台区次数减少(P＜0.05);与PO组比较,PA组和PH组SaO2降低,凋亡指数升高,逃逸潜伏期延长,穿越原平台区次数减少(P＜0.05).CO组、CA组和CH组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在低氧环境下,异丙酚可诱发新生大鼠海马神经元明显凋亡,降低学习记忆功能.     

改良Koyanagi术式一期治疗重型尿道下裂的疗效评价

目的评价改良Koyanagi术式一期治疗重型尿道下裂的疗效。方法回顾性总结重庆医科大学附属儿童医院2009年2月至2018年10月151例采用Koyanagi术式(为Koyanagi组)和188例采用Duckett术式(为Duckett组)治疗的重型尿道下裂患儿临床资料,对两种术式的治愈率、并发症发生情况进行比较分析,评价我院改良Koyanagi术式的疗效。结果Koyanagi组发生尿瘘17例,尿道狭窄15例,尿道憩室2例,尿道感染3例,伤口裂开2例;Duckett组发生尿瘘37例,尿道狭窄27例,尿道憩室6例,尿道感染11例,伤口裂开6例;Koyanagi组治愈率显著高于Duckett组,尿瘘发生率显著低于Duckett组(P<0.05)。两组家长对外观的满意度均显著低于非手术泌尿外科医师(P<0.05)。结论我院的改良Koyanagi术式操作更简便,术后并发症少,术后阴茎外观较好,治疗重型尿道下裂疗效确切,可作为治疗重型尿道下裂的新选择。     

HoxA13基因在尿道下裂胎鼠阴茎中的表达及意义

目的研究尿道下裂胎鼠阴茎中HoxA13核酸及其蛋白的表达,探讨其与尿道下裂发生的相关性。方法选用清洁级C57BL／6小鼠,用邻苯二甲酸二（2-乙基）己脂（DEHP）诱导并建立先天性尿道下裂模型;交配怀孕后,孕鼠随机分为玉米油对照组、实验组（DEHP500mg·kg^-1·d^-1）;各组持续灌胃;于怀孕第19天取出仔鼠,测量各组雄鼠体重、AGD;统计各组胎鼠尿道下裂的发生率,并观测阴茎的组织病理学变化;应用常规RT-PCR及免疫组织化学方法检测诱导出的尿道下裂胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中HoxA13的mRNA及蛋白表达水平。结果对照组、实验组的AGD值分别为（0．208±0．01）cm、（0．181±0．12）cm,P〈0．01;尿道下裂发生率分别为0％、75．7％,P〈0．01。实验组胎鼠尿道板及包皮于阴茎腹侧隆起融合落后,该组尿道与腹侧皮肤间的皮下组织明显减少。DEHP500mg·kg^-1·d^-1诱导的尿道下裂胎鼠阴茎组织中HoxA13mRNA及蛋白表达较对照组明显降低。结论DEHP能影响胎鼠的生长发育及体重,并导致雄鼠外生殖器发育异常;HoxA13mRNA及蛋白的表达在DEHP诱导的尿道下裂胎鼠阴茎中均较正常对照组降低,提示HoxAl3基因异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

DEHP诱导的隐睾鼠胰岛素样因子3基因CpG岛甲基化状态研究

目的 研究胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)基因在邻苯二甲酸二已酯(DEHP)致小鼠隐睾中DNA甲基化的状态.方法 运用"MethPrimer"软件对INSL3基因进行分析.预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)检测INSL3基因CpG岛的甲基化状况,并应用RT-PCR检测INSL3基因在正常组与实验组睾丸组织中的表达情况.结果实验组INSL3基凶第一外显子区存在CpG岛甲基化;实验组INSL3基因mRNA表达显著下降.结论 INSL3基因第一外显子区CpG岛的异常甲基化导致INSL3在隐睾鼠睾丸中表达降低,可能与隐睾的发生密切相关.     

儿童肾盂输尿管成形术后不同引流方式的比较研究

目的探讨腹腔镜下肾盂输尿管成形术后的最佳引流方式。方法以2016年1月至2019年12月重庆医科大学附属儿童医院收治的165例接受经腹入路腹腔镜下Anderson-Hynes肾盂成形术治疗的肾积水患者为研究对象,根据不同引流方式分为双J管组和支架管组,双J管组采用常规术中输尿管,置入双J管引流肾盂内尿液至膀胱(n=108);支架管组采用F4输尿管支架管经肾盂至尿道外口,引流肾盂内尿液至体外(n=57)。通过术后并发症、有无非计划再手术、拔管后自觉症状、术后住院时间以及住院费用等指标,评价两种不同引流方式在儿童肾盂输尿管成形术中的疗效。结果所有患者从术后随访至2019年12月,随访时间为2个月至4年。支架管组中4例发生术后感染,3例术后出现尿外渗,4例出现术后血尿;双J管组中7例发生术后感染,2例术后出现尿外渗,2例出现术后血尿,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。但在总体并发症发生率上,双J管组低于支架管组。支架管组中4例因拔管后出现输尿管引流不畅,再次行输尿管支架管置入术;2例因肾积水复发,再次行肾盂输尿管成形术。双J管组中有4例术后感染,1例双J管堵塞,均行双J管拔除+输尿管支架管置入术,1例因肾积水复发再次行肾盂输尿管成形术。支架管组总体非计划再手术率为10%,双J管组为5%,差异无统计学意义(P>0.05)。双J管组中,1例管腔堵塞,2例支架管上移,1例双J管脱出体外,支架管组无一例管腔堵塞、移位及脱落情况发生,差异无统计学意义(P>0.05)。支架管组中拔管后,1例出现腹胀合并高血压,8例出现腹胀伴纳差,2例出现腹痛,双J管组拔管后有2例出现腹痛,1例出现腹胀。支架管组拔管后总体不良反应发生率为19.2%,双J管组为2.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。双J管组平均住院时间为(5.8±1.9)d,支架管组为(8.8±2.3)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双J管和支架管两种引流方式在术后并发症发生率及非计划再手术率上并无差异,两者均为有效的引流方式。但在缩短住院时间、减轻患者家属经济成本及降低拔管后不良反应发生率方面,双J管引流均优于支架管引流。支架管引流在带管期间无堵塞、移位、脱落的情况发生,并且可避免二次入院,对于交通不便的患者可考虑选择。