年龄与线粒体DNA A1555G突变所致的听力损失关系的研究

目的：分析线粒体DNA A1555G突变致聋的患者其发病年龄及病程长短与听力损失是否有相关性,为临床上预测其病情发展提供依据。方法：将154例线粒体DNA A1555G突变致聋的患者,按其发病年龄分为三组（〈1岁,〉1岁且〈3岁,〉3岁）,分别对各组耳聋患者的听力损失程度进行统计学分析;将156例患者按其病程长短分为三组（〈10年,〉10年且〈20年,〉20年）,分别对各组耳聋患者的听力损失程度进行统计学分析。结果：发病年龄〈1岁和〉1岁且〈3岁的患者,其听力损失为极重度的所占比例较高（分别为85．7篇和72．2％）（P=0．000）;病程长短为〉10年且〈20年及〉20年的患者,其听力损失为极重度的所占比例较高（分别为74．1％和70．3％）（P=0．000）。结论：线柱体DNA A1555G突变致聋的患者,其听力损失与发病年龄、病程长短有关,发病越早,病程越长,其听力损失越重,发病越晚,病程越短,其听力损失越轻。     

遗传性耳聋相关基因在突发性耳聋发病中的作用

目的 :通过分析遗传性耳聋相关基因在温州地区突发性耳聋患者发病中的作用,探讨突发性耳聋的分子病因学。方法:突发性耳聋患者102例(男52例,女50例)为实验组,无听力损伤的健康者110例(男53例,女57例)为正常对照组。对实验组突发性耳聋患者进行病因学调查,并抽取两组受检者的外周静脉血,分别提取DNA,多聚酶链反应(PCR)扩增遗传性耳聋相关基因GJB2、GJB3、GJB6目的片段,并将PCR扩增产物进行DNA测序,运用Chromas软件进行分析。结果:102例突发性耳聋患者中发现GJB2109G>A纯合突变6例,杂合突变16例;GJB2 79G>A纯合突变10例,杂合突变54例;GJB2 341A>G纯合突变6例,杂合突变48例;GJB3 357C>T纯合突变3例,杂合突变12例;GJB3 474G>A杂合突变1例。110例正常人中发现GJB2 109G>A纯合突变4例,杂合突变18例;GJB2 79G>A纯合突变18例,杂合突变46例;GJB2 341A>G纯合突变36例,杂合突变12例;GJB3 357C>T纯合突变3例,杂合突变15例。GJB2、GJB3基因突变率经卡方检验差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组和对照组均未检测到GJB6有意义的突变。结论:突发性耳聋的发病与遗传性耳聋相关基因GJB2、GJB3、GJB6突变无相关性。     

温州2991例变应性鼻炎患者皮肤点刺试验结果分析

目的　了解温州地区变应性鼻炎患者变应原分布特征。方法　回顾性分析2013年1月～2014年12月具有变应性鼻炎症状、行皮肤点刺试验的患者的临床资料,分析皮肤点刺试验结果的分布特征。结果　①2991例患者总阳性率为82.0%,主要变应原是粉尘螨和屋尘螨;吸入性变应原阳性率高于食入性致敏原（χ2=2006.557,P＜0.01）;变应性鼻炎患者以双重过敏者为主;粉尘螨、屋尘螨反应强度均以（++++）为主,二者间反应强度差异无显著性（Z =-0.391,P =0.696）。②不同季节变应原阳性率有显著性差异（χ2=34.254,P＜0.01）。③不同病程组变应原阳性率差异无显著性（χ2=16.102,P =0.065）。④不同年龄组变应原阳性率差异有显著性（χ2=223.317,P＜0.01）,阳性率随年龄增大而升高,在10～12岁年龄段达高峰,之后减小。结论  尘螨为温州地区变应性鼻炎患者的主要变应原,季节和年龄是影响皮肤点刺试验阳性率及变应性鼻炎发病的重要因素,变应原阳性率与年龄存在一定的关系。     

多重等位基因PCR检测线粒体12S rRNA基因突变

目的 探讨多重等位基因PCR法同时检测氨基糖甙类药物性耳聋相关的线粒体12S rRNA基因A1555G和C1494T突变的临床应用价值.方法 以3种基因型(野生型、A1555G突变型和C1494T突变型)的质粒标准品为模板,分别设计针对线粒体1555和1494位点野生型和突变型的特异性引物.用多重等位基因PCR技术同时检测A1555G和C1494T突变,并初步用于138例非综合征型耳聋患者的临床基因突变检测分析,最后通过DNA测序法评估其准确性.结果 采用多重等位基因特异性PCR同时检测138例非综合征型耳聋患者中A1555G和C1494T突变的检出率为7.97%(11/138),其中,A1555G突变型10例,C1494T突变型1例;DNA测序分析检测突变型检出率为7.97%(11/138).2种方法具有极好的一致性(Kappa=1.000,P＜0.01).结论 多重等位基因PCR是一种简便、准确、有效的A1555G和C1494T突变检测方法,可用于鉴定氨基糖甙类药物性耳聋相关的线粒体12S rRNA基因突变,从而有效预防氨基糖甙类药物性耳聋的发生.

Abstract：

Objective To investigate the clinical application of multiplex allele-specific PCR assays for simultaneous detection of the mitochondrial 12S rRNA A1555G and C1494T mutations associated with aminoglycoside-induced hearing impairment.Methods Three standard plasmids of different genotypes (wild-type, A1555G mutant and C1494T mutant) were constructed for templates and allele-specific primers aiming directly at wild-type and mutant of mitochondrial DNA nt1555 and nt1494 were designed for developing a multiplex allele-specific PCR technique to detect the A1555G and C1494T mutations.Then the method was applied to clinical screening of 138 non-syndromic hearing loss subjects and confirmed by DNA sequencing.Results Multiplex allele-specific PCR was successfully applied to the detection of A1555G and C1494T mutations in a cohort of 138 Han Chinese genetically unrelated hearing-loss subjects.Finally, 11(7.97%) unrelated affected subjects harbored the A1555G and C1494T mutations in the 12S rRNA gene(10 cases for A1555G and 1 cases for C1494T), which was well consistent with results of DNA sequencing [7.97%(11/138), Kappa=1.000, P＜0.01].Conclusion This study indicates that the multiplex allele-specific PCR assay is useful, convenient and reliable in the detection of the A1555G and C1494T mutations, which could identify the subjects at risk and effectively prevent of aminoglycoside-induced hearing loss.     

耳内镜术后并发耳廓化脓性软骨膜炎1例报告

1临床资料患者女性,55岁,因“左耳反复流脓40余年,加重1年”诊断为左耳慢性化脓性中耳炎收住,患者既往有高血压病史两年,入院时血压154/77mmHg,未曾治疗,无糖尿病病史。查体:鼓膜紧张部大穿孔,鼓室少许分泌物。于2019年8月23日在全麻下取耳屏软骨、软骨膜复合物行左耳鼓室成型术,术后予以头孢替安静滴两日后出院,中耳分泌物及组织培养为无菌生长。     

口腔拭子在药物性耳聋基因检测中的应用

目的：探讨口腔黏膜上皮细胞基因组DNA在药物性耳聋基因A1555G及C1494T突变检测中的应用,寻求基因检测中更简单快捷并无损的样本来源。方法：采集97例来自温州特殊教育学校非综合征型耳聋学生的口腔拭子和外周血,分别提取基因组DNA,进行浓度与纯度的测定、基因扩增及产物测序,比较2种样本来源及2种方法提取的基因组DNA的浓度、纯度、扩增成功率,并将测序结果与人类线粒体DNA剑桥参考序列进行比对。结果：口腔拭子DNA的手工法提取浓度（42.5±41.7）ng/mL与试剂盒法DNA浓度（44.8±43.4）ng/mL差异无统计学意义（P〉0.05）;手工法DNA纯度（1.45±0.73）低于试剂盒法（1.87±0.87）,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）;二者扩增成功率与外周血差异均无统计学意义（P〉0.05）;口腔拭子DNA的药物性耳聋基因扩增产物长短一致,测序结果完全相符,均显示A1555G突变阳性2例,阴性95例;C1494T突变97例均阴性。结论：无损性样本口腔拭子扩增成功率高,诊断结果可靠,可替代外周血作为药物性耳聋基因检测的DNA来源,具有一定的临床应用价值。