干扰RIG-Ⅰ表达对新城疫病毒诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生TRAIL、IL-6的影响

目的:探讨干扰维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)表达对新城疫病毒(NDV)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法:将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为NDV组(加入NDV7793)、PBS组(仅加入PBS)和空白组(不予处理).用Lipotect...     

NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制

 目的
初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞（MΦ）对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-
α和TRAIL的关系。 方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ, 用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定
NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,
以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组：IFN-β阳性对照组
、紫外线灭活NDV（UV-NDV）对照组以及空白对照组。 结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-
α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,
小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细
胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。     

新城疫病毒对人NK细胞表达TRAIL的促进作用

目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制。方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞;乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测NDV刺激NK细胞4h后对TRAILmRNA表达水平的影响;FCM检测NDV刺激NK细胞16h时TRAIL蛋白的表达情况;ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响;最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况。结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)%;NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)%;RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAILmRNA及蛋白表达水平均明显升高;ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16h时达到峰值(796.47±37.87)pg/mL;采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,NK细胞中TRAIL蛋白表达水平明显下降。结论:NDV刺激NK细胞后可增强IFN-γ的分泌水平,进而通过IFN-γ上调TRAIL的表达,此途径为NDV刺激NK细胞表达TRAIL的机制之一。此外,NDV直接刺激NK细胞表达TRAIL是另一条重要的途径。     

LPSp对HBV宫内感染脐血单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ及TLR4表达的影响

目的:观察不同浓度LPSp对HBV宫内感染孕妇的脐血单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ及细胞表面TLR4表达的影响。方法:选择外周血HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性且脐血HBV-DNA阳性孕妇25例为试验组,根据加入LPSp的不同分为:无LPSp组、LPSp 1μg/L组、LPSp 10μg/L组、LPSp 100μg/L组;以外周血HBV标志物为阴性的正常分娩孕妇20例为对照组。分离CBMC并培养,采用ELISA法检测培养上清液中的IFN-γ、IL-4的浓度,用流式细胞仪检测CBMC表面TLR4表达。结果:①LPSp各组中IFN-γ、IL-4水平与无LPSp组比较差异均有统计学意义(P<0.01),IFN-γ水平与LPSp浓度呈正相关(r=0.778),IL-4水平与LPSp浓度呈负相关(r=-0.927)。②TLR4表达与IFN-γ水平呈正相关(P<0.05),TLR4与IL-4呈负相关(P<0.05);TLR4表达水平与LPSp浓度呈正相关(r=0.754)。结论:不同浓度的LPSp可能通过影响TLR4信号传导通路诱导CBMC分泌不同细胞因子,选择性调控Th1/Th2型应答。     

H6N1亚型禽流感病毒跨种属传播研究进展

禽流感病毒H6N1亚型广泛存在于水禽和陆禽,是最常分离到的甲型流感病毒亚型,遗传分析表明该病毒可能是高致病禽流感病毒H5N1的前体。随着病毒基因的持续进化,H6N1可跨种间屏障传播至哺乳动物,其对于哺乳动物小鼠、猪和雪貂已经具有较强感染能力。血清流行病学调查结果显示少数人H6禽流感病毒抗体阳性,2013年5月,我国台湾出现全球首例人类感染H6N1亚型流感病毒。因此,H6N1病毒宿主范围不断扩大,在这些宿主内可发生病毒基因突变、基因重配,进而演变为具有感染人类潜能的新变异株的可能。本文从病原学、流行病学、病毒感染哺乳动物和人类等方面对H6N1亚型禽流感病毒的研究进展进行综述,以期为H6N1禽流感病毒的防控提供参考。     

苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达

目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现.方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24 h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量.结果:5 μmol/L HQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响.50、 100 μmol/L HQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡.结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡.     

新城疫病毒7793对结肠癌肝转移模型小鼠肝内Th1、Th2、Th17类细胞因子表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨新城疫病毒（NDV）7793对结肠癌肝转移瘤小鼠肝组织Th1、Th2、Th17类细胞因子表达的影响,为NDV7793作用人结肠癌肝转移的免疫效果研究提供实验依据。［方法］ 取40只健康BALB/c小鼠,随机分为4 组（每组10只）：PBS组,5-Fu组,NDV7793组,正常对照组。建模及给药结束,采用 ELISA 法测定肝脏组织上清IL-2、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17的浓度,比较4组间各细胞因子表达差异,分析TNF-α与IL-17表达水平的相关性。［结果］ 经NDV7793治疗后,结肠癌肝转移瘤小鼠肝组织Th1 、Th2 、Th17表达均不同程度恢复到正常对照组水平,即Th1类细胞因子IL-2、TNF-α和Th17类细胞因子IL-17表达显著回升,Th2类细胞因子IL-4、IL-10表达显著下降;与5-Fu组相比,NDV7793组的小鼠肝脏各类细胞因子更趋近于正常对照组小鼠的水平;TNF-α表达水平与IL-17表达水平相关性检测,0.749≤r＜1,P<0.01,有统计学意义。［结论］ NDV7793能促进结肠癌肝转移小鼠的肝组织Th1类细胞因子分泌,抑制Th2类细胞因子分泌,使其趋近于正常水平,且小鼠TNF-α与IL-17表达呈正相关。     

LPSp辅佐HBsAg诱导机体产生特异性抗体的机制

目的:研究革兰阴性非致病性成团泛菌脂多糖(LPSp)作为佐剂促进乙型肝炎表面抗原蛋白(HBsAg)诱导小鼠产生抗-HBs抗体的作用机制。方法:在体外用LPSp HBsAg、HBsAg、LPSp、生理盐水分别致敏小鼠腹腔巨噬细胞,观察致敏细胞回输体内后诱导HBs抗体产生水平,检测巨噬细胞培养上清中TNF-α活性和NO浓度;观察4组巨噬细胞吞噬功能变化,并检测致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞分泌IL-4和IFN-γ的能力。结果:HBsAg LPSp致敏巨噬细胞促进小鼠HBs抗体产生,LPSp致敏的巨噬细胞的吞噬能力显著增强(P<0.05),释放TNF-α和NO水平增加(P<0.05)。LPSp HBsAg致敏巨噬细胞诱导局部淋巴结细胞释放IL-4水平升高(P<0.05),诱导IFN-γ水平与单纯HBsAg致敏组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LPSp的佐剂机制为参与活化巨噬细胞,增强巨噬细胞对抗原的吞噬、消化和处理能力;同时促进HBsAg致敏的巨噬细胞诱导淋巴结内淋巴细胞释放IL-4,增强HBsAg致敏的巨噬细胞诱导Th2淋巴细胞活化,促进B细胞产生抗体。