人胃癌CD90+干细胞可能影响胃癌的转移和患者的预后

目的： 分离并鉴定人胃癌细胞系SNU-5中的肿瘤干细胞,探讨人胃癌CD90+干细胞对胃癌转移和预后的影响。 方法： 无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5细胞系中是否存在肿瘤干细胞,流式细胞术分析SNU-5亲本及球体细胞中肿瘤干细胞标志物的表达,分选CD90+SNU-5细胞并进行体外生物学特征研究及SCID鼠致瘤实验。收集肿瘤医院腹部外科95例胃癌患者肿瘤病理标本,免疫组化方法检测胃癌组织中CD90的表达。 结果： SNU-5细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。无血清悬浮培养可将CD90+SNU-5细胞富集6.1倍,且CD90可在球体细胞中与标示干细胞的PKH26共染。CD90+SNU-5细胞较CD90- SNU-5细胞和亲本SNU-5细胞具有更高的自我更新能力\[成球率（7.7±1.1）% vs (1.3±0.4)%、(1.8±0.3)%,均P<0.01\]和侵袭能力\[侵袭细胞数(283.3±30.2) vs (48.0±7.5)、(156.7±72)个,均P<0.01\]。CD90+SNU-5细胞在重症联合免疫缺陷（severe combined immune deficency,SCID）小鼠皮下接种2×102个细胞6周即可致瘤（1/6）,而接种2×104个CD90- SNU-5细胞10周才能致瘤（1/6）。95例胃癌患者组织中CD90的表达与胃癌的远处转移显著相关（P<0.01）,且CD90阳性胃癌患者的生存期明显短于CD90阴性的患者（P<0.01）。 结论： 人胃癌细胞系SNU-5中存在具有更强自我更新及侵袭能力的CD90+干细胞,人胃癌组织中CD90+干细胞数量与肿瘤的转移与患者生存期明显相关。     

抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的筛选和鉴定

目的：从抗胰腺癌干细胞单抗库中筛选、鉴定识别胰腺癌干细胞的功能性单抗,为胰腺癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法：无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌HPAC细胞系中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术检测HPAC的干细胞标志物CD133在球体细胞中的阳性比例,检测20株杂交瘤单抗在HPAC亲本和球体细胞中的阳性表达。双色荧光标记流式细胞术检测CD133和单抗在HPAC亲本和球体细胞中的共表达比例;无血清悬浮培养法观察单抗15E9对HPAC成球细胞自我更新的影响。CCK一8法检测单抗15E9对HPAC细胞增殖和耐药的影响。结果：HPAC细胞能在无血清培养基中存活、增殖并形成细胞球,成球率为4．8％±0．6％。HPAC球体细胞中CD133’细胞的比例较亲本细胞提高至11．6倍。20株候选杂交瘤单抗中有3株单抗能识别HPAC球体细胞中CD133’细胞,其中单抗15E9共染比例为3．5％,并能显著抑制HPAC细胞的成球,抑制率达到30．4％。单抗15E9联合吉西他滨能显著抑制HPAC球体细胞的增殖,联合组和对照组Ic50分别为30．8nmol／L和58．1nmol／L。结论：本研究成功筛选出1株杂交瘤单抗可以识别胰腺癌干细胞,并且可识别CD133＋的胰腺癌干细胞;体外功能显示该抗体具有抑制HPAC干细胞的自我更新能力,抗体干预后显著降低HPAC耐药能力,可能是潜在的胰腺癌干细胞的靶向治疗抗体药物。     

肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析

[目的]探讨有效的肿瘤生物治疗新思路,用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能（自我更新、侵袭和耐药）的影响。[方法]采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA在Bel7402-V3亲本及sphere细胞中的表达;甲基纤维素成球实验和Transwell小室侵袭实验分别检测抗体对Bel7402-V3亲本细胞成球能力和侵袭能力的影响;CCK8法及IC50法检测联合抗体对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响。[结果]流式荧光结果显示：标志物ESA、单抗15D2、单抗9A9所识别的细胞比例在Bel7402-V3 sphere细胞中比在亲本细胞中分别富集了2.6倍、4.1倍、2.0倍;在Bel7402-V3亲本和sphere细胞中,联合单抗与标志物共染比例（9A9＋15D2与ESA）大于单抗分别与标志物共染比例之和[（9A9＋ESA）＋（15D2＋ESA）];单抗9A9与15D2联合时对Bel7402-V3亲本细胞的成球抑制率和侵袭抑制率均明显高于等浓度的单种单抗对Bel7402-V3亲本细胞的功能抑制;经联合单抗处理的Bel7402-V3亲本细胞耐药能力较经等浓度单种单抗处理的细胞耐药能力显著降低[9A9＋15D2：IC50为0.32μg/ml,9A9：IC50为0.58μg/ml,15D2：IC50为0.56μg/ml。[结论]肿瘤干细胞中存在不同亚群,其在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。联合多靶点的抗体治疗能显著提高疗效。     

西藏自治区妇女子宫颈人乳头状瘤病毒感染现状调查及相关因素分析

目的 了解我国西藏自治区妇女宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)感染率和亚刑分布及与HPV感染相关的因素.方法 于2007年8月,采用整群抽样的方法对西藏自治区拉萨、日喀则和那曲3个地区的3036例妇女进行流行病学问卷调查和HPV DNA分型检测,并对与HPV感染相关的因素进行单因素及多因素分析.结果 3036例妇女中,HPV感染患者为279例,总感染率为9.19%(279/3036),其中高危型HPV、低危刑HPV和HPV复合感染率分别为7.05%(214/3036)、2.14%(65/3036)和1.32%(40/3036);不同年龄、民族、地区妇女间HPV感染率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).HPV感染的亚型中,HPV16(1.52%)最常见,其次为HPV33(1.42%)、58(1.22%)、52(1.15%)和31(1.05%);不同年龄妇女巾,HPV感染的亚型分布也略有不同.单因素分析显示,婚姻状态、初次性生活年龄和妊娠次数为影响HPV感染的危险因素(P<0.05).多凶素分析表明,吸烟(P=0.027)、性伴侣数(P=0.198)和初次性生活年龄(P=0.237)为影响HPV感染的独立危险因素.结论 两藏自治区妇女官颈HPV感染率低于国内外平均水平,其最常见的亚型为HPV16.影响HPV感染的独立危险因素为吸烟、性伴俏数和初次性牛活年龄.