补骨脂素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的探讨补骨脂素抗增生性瘢痕的作用机制。方法体外培养成纤维细胞,按随机数字表法分为正常组(培养正常成纤维细胞)、瘢痕组(培养增生性瘢痕成纤维细胞)、TGF-β1组(10 ng/ml TGF-β1处理增生性瘢痕成纤维细胞5 min^12 h)、Smurf2 RNA干扰组[Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor2,Smurf2)siRNA转染增生性瘢痕成纤维细胞72 h]、补骨脂素组(10μmol/L补骨脂素处理增生性瘢痕成纤维细胞继续培养72 h)、补骨脂素+TGF-β1组(增生性瘢痕成纤维细胞加入补骨脂素培养72 h后加入TGF-β1培养6 h)。采用Western blot法检测Smurf2、α-平滑肌肌动蛋白(α-actin SMA,α-SMA)蛋白表达;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达;ELISA法检测TGF-β1蛋白分泌。结果与正常组比较,瘢痕组Smurf2蛋白[(0.83±0.08)比(0.38±0.07)]表达增加(P<0.05);与瘢痕组比较,Smurf2 RNA干扰组TGF-β1[(2.2±0.18)比(4.2±0.47)]表达降低(P<0.05);TGF-β1组Smurf2[(0.71±0.06)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(1.42±0.12)比(0.91±0.09)]蛋白表达增加(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA[(0.72±0.09)比(0.41±0.07)]表达增加(P<0.05);补骨脂素组Smurf2[(0.05±0.01)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(0.71±0.07)比(0.91±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达[(0.12±0.04)比(0.41±0.07)]降低(P<0.05)。结论补骨脂素可能通过TGF-β1/Smurf2信号通路抑制α-SMA蛋白表达,从而降低Ⅰ型胶原蛋白表达,起到抑制瘢痕形成的作用。     

Genetic effects of photoactivated psoralens during meiosis in DNA repair mutantpso3-1 ofSaccharomyces cerevisiae

The influence of the DNA repair genePSO3 on photoactivated psoralen-induced meiotic recombination, gene conversion, reverse mutation, and on survival, was assayed in diploid strains ofSaccharomyces cerevisiae homozygous for the wild-type or thepso3-1 mutant allele. Sporulation was normal in thepso3-1 diploid. Wild-type and mutant strains had the same sensitivity to photoactivated monofunctional psoralen (3-CPs+UVA) in meiosis-uncommitted and meiosis-committed stages. The mutant showed higher sensitivity to photoactivated bifunctional psoralen (8-MOP+UVA) during all stages of the meiotic cycle. Mutation induction by 3-CPs+UVA or 8-MOP+UVA in meiosis-committed cells revealed no significant differences between wild-type and thepso3-1 mutant. The status of thePSO3 gene has no influence on the kinetics of induction of gene conversion and crossing-over after 3-CPs+UVA treatment in meiosis-committed cells: gene conversion was blocked while recombination was induced. After treatment with 8-MOP+UVA gene conversion was also blocked in both strains while crossing-over could only be observed in meiosis-committed wild-type cells.     

胶束毛细管电泳法分离中药补骨脂中的有效成分

目的:旨在建立毛细管电泳分析中药补骨脂中有效成分的分析方法。方法:采用胶束毛细管电泳法,最佳分离时的缓冲溶液为12mM磷酸盐 18mM硼酸盐十25mM十二烷基硫酸钠(pH=9.2)。结果;在最佳分离条件下,补骨脂中的有效成分补骨脂素和异补骨脂素可达基线分离,在此基础上,对其生药的甲醇提取液中的补骨脂素和异补骨脂素进行了定量分析。结论:该方法准确、快速。     

SFE-CGC法测定七宝美髯胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量

目的 建立中成药七宝美髯胶囊中有效成分补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法 采用超临界流体萃取(SFE)技术和毛细管气相色谱(CGC)非在线联用技术测定补骨脂素和异补骨脂素的含量,HP-5毛细管柱,FID检测器,蒽为内标。结果 SFE-CGC法测定七宝美髯胶囊中补骨脂素和异补骨脂素简便快速,结果准确可靠,加样回收率分别为97,76％(RSD2.31％),101.21％(RSD2.12％)。结论 SFE-CGC法可以作为七宝美髯颗粒质量控制的方法之一。     

高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的:建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法。方法:采用高效液相法,选用Zorbax SB-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.01%磷酸(40∶60);检测波长246 nm;柱温40℃。结果:补骨脂素在0.046 9~0.233 1μg范围内线性良好,r=0.999 9;异补骨脂素均在0.046 6~0.232 8μg范围内有较好的线性关系,r=0.999 9;补骨脂素加样回收率平均为98.44%,RSD为1.19%(n=5);异补骨脂素平均回收率为99.70%,RSD为1.99%。结论:该法简便,快速,可用于补肾酒的质量控制。     

HPLC法同时测定补骨脂药材中6种成分的含量

目的:建立同时测定补骨脂药材中6种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法同时分析补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂异黄酮、补骨脂定和补骨脂查耳酮6种成分。用AlltechC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,1%冰醋酸溶液和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长245nm。结果:6种成分线性关系良好,r>0.9991,平均加样回收率均大于95.0%,RSD均小于3.0%。结论:该方法适用于补骨脂药材中6种成分的同时测定,可作为药材质量的综合评价方法。     

脑血通颗粒剂定性定量分析

目的对脑血通颗粒剂进行定性定量分析。方法采用茚三酮、蒽醌定性反应和大黄素、补骨脂素、异补骨脂素薄层色谱鉴别进行定性控制;对补骨脂素、异补骨脂素应用高效液相色谱法定量测定;运用等离子发射光谱仪、氨基酸自动分析仪进行无机元素和氨基酸的测定。结果定性鉴别简便易行;含量测定方法中同分异构体补骨脂素、异补骨脂素分离较好,分离度大于2,补骨脂素、异补骨脂素柱效比较理想,理论塔板数均大于4000。结论此法分离效果好、重现性好、精密度高;元素分析和氨基酸分析结果可信度高,可用于脑血通颗粒剂的质量控制。     

Phytophotodermatitis

Phytophotodermatitis is a phototoxic cutaneous eruption due to skin exposure to furocourmarins combined with ultraviolet light. Bizzare linear patterns, ranging from erythema to bullae with residual hyperpigmentaion, is the clinical clue to this diagnosis. Avoidance of furocoumarins in direct sunlight can prevent recurrences.     

深加工对补骨脂浸出物及其补骨脂素、异补骨脂素含量的影响

目的:改进补骨脂加工炮制方法.方法:将补骨脂用自制轧药机轧扁至裂开,与未轧的药材分别加水或乙醇提取,以水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂素含量为考察指标,用高效液相色谱法测定,条件为:Supelco ODS C18柱,柱温30℃,流动相为甲醇-水(43:57),检测波长为246 nm.结果:在相同条件下,补骨脂轧扁样品的水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂索含量均比未轧的整粒高,其中,水溶性浸出物增加了0.61倍,醇溶性浸出物增加了1.53倍,水溶性及醇溶性浸出物中补骨脂素、异补骨脂素含量均增加了1.22倍,两者得率悬殊,差异显著.结论:补骨脂经轧扁法加工后能显著提高浸出物量及其有效成分的提取率,增进临床疗效,方法合理,值得推广.     

HPLC法同时测定益肾灵颗粒中淫羊藿苷、补骨脂素及异补骨脂素的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定益肾灵颗粒中有效成分含量的方法。方法:色谱柱为Phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸溶液(梯度洗脱),检测波长为310nm,流速为1.0mL·min-1,柱温为20℃。结果:淫羊藿苷、补骨脂素及异补骨脂素3种成分均能达到良好分离,在测定范围内线性良好;平均加样回收率均在99%~101%之间,RSD均小于1.20%。结论:本方法简便、可行、重现性好,可用于益肾灵颗粒的质量控制。