限制性显示技术在制备丙型肝炎病毒分型芯片探针的应用性研究

目的探讨限制性显示(restriction display,RD)技术在制备丙型肝炎病毒(HCV)分型芯片探针的可行性.方法用限制性内切酶Sau3A I消化HCV1a、1b、2a亚型全长cDNA,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连,通过10个选择性引物进行分组PCR,使得各片段得以扩增并分布于10个亚组中,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离.切胶回收后作3次PCR,得到较纯净的HCV cDNA限制性片段.对这些片段做分子克隆,并测序鉴定.结果由HCV 3个亚型1a、2a、1b的全长cDNA得到66个大小相对均一(200～900bp)的限制性片段,平均每个亚型约22个.测序结果表明,属于HCV基因,可以作为HCV分型芯片的探针.结论RD技术能快速收集大量长度适宜、大小均一的病毒基因片段,适合于分型诊断基因芯片探针的收集.     

人OAZ-ORF2基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

目的 克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白OAZ-ORF2基因,重组至真核表达载体,并在Hela细胞中表达.方法 以pET32a-OAZ质粒为模板,PCR法扩增OAZ-ORF2序列,测序鉴定后重组入真核表达载体pEGFP-N1,转染Hela细胞,表达重组蛋白.结果 PCR产物经琼脂糖电泳证实与目的基因长度一致,测序结果与GenBank公布的OAZ基因的ORF2序列一致.重组载体在Hela细胞中表达OAZ-ORF2蛋白,Western blotting分析在相对分子质量44.5×103左右出现新的蛋白条带.结论 成功构建人OAZ-ORF2基因真核表达载体,并获得表达.     

我国南方人鼠虫媒病毒血清流行病学调查

目的 调查我国南方地区虫媒病毒的感染分布情况。方法 应用间接免疫荧光技术,对我国南方11个地区3077份人血清标本和401份鼠血清标本进行了14种虫媒病毒血清流行病学调查。结果 人血清中甲病毒（SIN,CHIK,SF,MAY,RR,SAG和GET）抗体的阳性率分别是0．64％,1．13％,0．64％,0．04％,0．94％,0．11％和0．18％;黄病毒（JE和DEN1－4）抗体的阳性率分别是2．70％和8．60％;布尼安病毒抗体（XHF和SSH）,在海南人群中的阳性率分别是2．66％和5．33％。在海南三亚、琼中和琼海3个地区的鼠中,甲病毒（SIN,CHIK,RR和SF）抗体的阳性率分别是1．80％,6．31％,4．50％和6．31％;黄病毒（JE和DEN1－4）抗体的阳性率分别是3．69％和8．11％;布尼安病毒（XHF和SSH）抗体的阳性率分别是3．10％和3．79％;结论 在我国南方一些地区生活的人群和鼠类不同程度的感染了甲病毒、黄病毒和布尼安病毒。     

丙型肝炎病毒基因分型研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)基因型众多,其命名和分型标准已渐趋统一,一般采用Simmonds命名系统。不同基因型的分布地理差异明显,我国以1b、2a型最常见,南北差异可能不大。现有的HCV基因分型法有多种,PCR和血清学两类方法各有其局限性,相应也出现多种改进及新方法,主要是针对PCR法的改进。近几年新兴的DNA芯片技术也开始应用于HCV基因分型,很可能提供一种更敏感、快速、高效的HCV基因分型法。     

优质护理辅助整形美容清创缝合术对颌面部外伤患者应激反应及效果满意度的影响

目的：分析优质护理辅助整形美容清创缝合术对颌面部外伤患者应激反应及效果满意度的影响。方法：选取2019年2月-2021年10月笔者科室收治的98例颌面部外伤患者为研究对象，按护理干预方案不同分为对照组47例（常规护理）、观察组51例（优质护理）。比较两组焦虑自评量表（Self rating anxiety scale,SAS）、抑郁自评量表（Self rating depression scale,SDS）、自我感觉负担量表（Self perceived burden scale,SPBS）、平均动脉压（Mean arterial pressure,MAP）、心率值（Heart rate,HR）、双向瘢痕评分量表（Patient and observer scar assessment scale,POSAS）、温哥华瘢痕评分量表（Vancouver scar score,VSS）及美学效果满意度。结果：观察组患者SAS、SDS、SPBS评分均低于对照组（P<0.05）。两组干预后MAP、HR均有所下降，且观察组MAP、HR低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。干...     

局麻下口内入路双侧颧骨和下颌角截骨矫正方形脸畸形

目的：探讨双侧颧骨和下颌角截骨矫正方形脸畸形的手术效果。方法：针对颧骨和下颌角肥大引起的方形脸畸形，采用局部浸润麻醉、口内入路、双侧颧骨和下颌角截骨手术方法，一次或分二次手术矫正。结果：2003～2006年共施术25例，一次手术12例，二次手术13例。随访6～24个月，所有病例伤口愈合好，外观改善满意，无一例发生骨折、神经损伤、感染、大出血等并发症。结论：局麻下口内入路双侧颧骨和下颌角截骨矫正方形脸畸形手术方法设计合理、操作简便、并发症少，术后效果良好。     

SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆

目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论N蛋白基因的扩增、克隆成功,为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。     

DNA芯片技术筛选K562肿瘤细胞特异性基因

目的应用DNA芯片技术筛选人白血病K562细胞中的肿瘤特异性基因。方法提取正常人白细胞和K562细胞基因组DNA,并用限制性内切酶Sau3AI酶切。其中K562细胞基因组酶切产物经DNA聚合酶Ⅰ补平加A后克隆到T-载体,挑选阳性克隆,用PCR扩增,以纯化的PCR产物做探针,制备K562细胞基因组DNA芯片。正常人白细胞基因组酶切产物加上人工通用接头,用限制性标记技术标记上荧光标记物Cy3,与制备的K562细胞基因组DNA芯片杂交。结果芯片杂交结果经扫描分析,发现42个K562细胞肿瘤特异性基因,进一步用序列分析证实,其中有1个为BCR(breakpoint cluster gene)基因。结论我们自制的K562细胞基因组DNA芯片可以成功地用于筛选肿瘤特异性基因,为更好地从基因组水平研究肿瘤发生的分子机制提供了新的技术途径。     

一种用于微阵列分析的通用引物U2联合标记方法

目的报告一种新的用于微阵列研究的荧光标记技术：通用引物U2联合标记技术(UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法分别用4种标记方法标记流感病毒RNA样品,与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交后,用Spss10．0软件对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法是一种新颖而有效的标记方法,在微阵列技术研究方面具有广泛的应用价值。     

生物化学与分子生物学专业资源库的建设

生物化学与分子生物学是重要的基础医学学科,与遗传学、免疫学等学科有着广泛的联系与交叉,是当今医学、生命科学领域的前沿学科。为了深化生物化学与分子生物学教学的改革,我单位在近年进行多媒体教学改革的基础上[1-2],组建了生物化学与分子生物学网络资源库,本文就该资源库的设计及施实作一简要介绍。1资源库内容与服务对象本资源库内容主要分为生物化学理论教学、分子生物学理论教学和生物化学实验、分子生物学实验教学等几个部分。理论部分按本专业的知识体系进行编排,生物化学理论细分为静态生物化学和动态生物化学,再设置生物大分子…