小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。     

成都市某医院上消化道出血住院患者病例特征及治疗费用分析

目的 分析上消化道出血（UGIB）住院患者病例特征及治疗费用情况,为制定预防控制政策及措施、改善治疗手段、提高患者预后及指导医疗系统统筹疾病费用等提供依据。方法 从医院信息管理系统中搜索2019年成都市某三甲医院全年收治的所有初诊UGIB住院病例,对病历资料及治疗费用进行描述分析。结果 共纳入符合研究标准的UGIB住院病例308例。24~59岁144例（中青年组）,平均年龄（42.05 ± 7.54）岁,男性占70.14%。60~88岁164例（老年组）,平均年龄（73.54 ± 6.05）岁,男性占82.83%。2组病例的性别和BMI分布差异均无统计学意义（均P>0.05）。2组病例间非甾体抗炎药服用史、高血压病史、糖尿病史、冠心病史、脑卒中病史、慢性阻塞性肺疾病病史及伴随≥2种合并症者构成分布差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。UGIB患者临床表现主要以黑便（占57.14%）、上腹痛（占35.39%）、呕血（占27.60%）为主,出血病因主要为十二指肠溃疡（占34.74%）、胃溃疡（占20.78%）、胃十二指肠炎（占11.36%）。上腹痛比例中青年组高于老年组,外周循环障碍低于老年组 （均P<0.01）。出血病因中中青年组十二指肠溃疡、食管胃底静脉曲张比例高于老年组,胃溃疡、复合溃疡、胃癌比例低于老年组 （P<0.01或P<0.05）。中青年组住院时间中位数为12.40（6.16,25.51）d,老年组为16.21（6.35,25.54） d;中青年组治疗费用平均为（12 783.6 ± 1 743.1）元,老年组平均为（21 785.6 ± 2 762.3）;老年组的西药费、中成药费、输血费、检查费、手术费、总费用及住院时间均较高（P<0.05或<0.01）。结论 UGIB住院患者以男性为主,不同年龄段UGIB住院患者临床表现及出血病因有差异,老年UGIB患者治疗时间及费用显著高于中青年组。     

HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响

目的探讨HOTAIR对宫颈癌HeLa细胞增殖及自噬的影响。方法应用qRT-PCR法检测宫颈癌和正常宫颈组织中HOTAIR表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。构建宫颈癌He La细胞HOTAIR过表达细胞株(pcDNA3.1(+)-HOTAIR组)和HOTAIR干扰细胞株(si-HOTAIR组),CCK-8法检测HOTAIR对HeLa细胞增殖的影响。Western blot和免疫荧光分别检测各组细胞自噬关键基因LC3的蛋白和荧光表达。结果宫颈癌组织HOTAIR表达水平显著高于对照组(P 0.001),而与临床病理参数的关系无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,pcDNA3.1(+)-HOTAIR组HeLa细胞增殖水平显著升高(P 0.001),细胞质内LC3点状荧光明显增加。结论 HOTAIR在宫颈癌组织中表达增高,同时可上调宫颈癌HeLa细胞的自噬水平并促进HeLa细胞增殖,其有望成为判断宫颈癌恶性程度和患者预后的生物学标志物。     

急性胆源性胰腺炎ERCP手术治疗前后对患者肝功能及炎症因子的影响

【摘要】目的 观察急性胆源性胰腺炎（ABP）内镜逆行胰胆管造影（ERCP）手术治疗对患者肝功能、炎症因子的影响。方法 选取2016年2月~2018年3月我院85例ABP患者,依据治疗方式差异分为观察组（n=45）与对照组（n=40）,对照组予以常规非手术疗法,观察组于其基础上采取ERCP手术。比较两组治疗前后肝功能［谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBil）、γ谷氨酰转肽酶（γ GT）］、炎症因子［白细胞计数（WBC）、C反应蛋白（CRP）］,观察两组腹痛消失时间、淀粉酶恢复时间、住院时间及并发症发生率。结果 治疗后,两组ALT、TBil、γ GT、WBC、CRP水平较治疗前明显降低（P＜005）,且观察组ALT、TBil、γ GT、WBC、CRP水平明显低于对照组（P＜005）;观察组腹痛消失时间、淀粉酶恢复时间、住院时间均明显短于对照组（P＜005）;观察组并发症总发生率明显低于对照组（P＜005）。结论 ERCP治疗ABP患者后肝功能恢复较快,可有效减轻炎症状态,促进机体恢复。     

食用白醋保留灌肠治疗肝性脑病有效浓度的随机对照研究

目的探讨食用白醋保留灌肠治疗肝性脑病的有效浓度,为统一临床治疗标准提供循证依据。方法对2017年1月至2018年8月在我院消化内科住院的112例肝性脑病患者采用随机数字表法将其分为试验组49例和对照组63例。在其他治疗方法一致的情况下,试验组和对照组分别采用等渗性灌肠液(食醋35mL+生理盐水100mL)和经验性灌肠液(食醋30mL+生理盐水100mL)进行保留灌肠。分别于灌肠前、灌肠后1天和灌肠后2天观察两组患者神志恢复情况、静脉血氨和血pH的变化。结果两组不同时间测得血氨值组间比较差异无统计学意义(F=0.243,P=0.625),两组不同时间静脉血pH组间比较差异也无统计学意义(F=0.007,P=0.932)。组内比较发现不同时间患者的血氨水平差异均有统计学意义(F=7.861,P=0.000),试验组患者的血氨浓度呈逐渐下降趋势,而对照组患者的血氨浓度灌肠后一天下降而灌肠后第二天又小幅度回升;不同时间患者的静脉血pH值之间差异有统计学意义(F=4.319,P=0.021),两组患者静脉血pH值均呈逐渐下降趋势。结论采用等渗性的食用白醋灌肠液治疗肝性脑病有效,安全性较高,值得临床推广应用。     

白血病细胞中翻译控制肿瘤蛋白的检测及其方法学比较

目的 :比较蛋白印迹法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)在检测细胞内翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)中的优势,并分析两者在临床检测中的应用价值。方法 :用1μmol/L全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)处理NB4和NB4-R1细胞0~96 h,分别采用蛋白印迹法和FCM检测细胞内TCTP蛋白的变化情况,用Bland-Altman分析法分析检测结果的一致性。用FCM检测部分急性白血病患者骨髓原代标本中TCTP蛋白水平。结果 :蛋白印迹法检测结果显示,经ATRA处理后NB4细胞内TCTP下降,各时间点(0、24、48、72、96 h)TCTP与β-actin灰度比的相对值分别为1.00、0.97±0.05、0.91±0.03、0.85±0.05和0.72±0.02,而NB4-R1细胞中则保持不变。FCM检测结果显示,经ATRA处理后NB4细胞内各时间点TCTP的阳性率分别为(98.93±0.49)%、(98.83±0.65)%、(96.77±1.45)%、(90.93±1.35)%和(72.17±5.57)%,NB4-R1细胞中保持不变。根据Bland-Altman法,计算可得2种方法测量值95%的一致性区间界限为(-0.081,0.111),本研究所测得的30组数据中有29组落在区间内。对11例急性白血病患者和9例非白血病患者骨髓细胞内TCTP水平的检测结果显示,非白血病患者骨髓细胞内TCTP的表达较低,而白血病患者则相对较高,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:蛋白印迹法与FCM检测细胞内TCTP蛋白水平的结果间有良好的一致性,而FCM更加适用于患者的原代标本检测。细胞内TCTP水平的高低可能与白血病的发生、发展有关,今后有可能作为临床白血病检测的分子标志物。     

中药提取物诱导血液肿瘤细胞凋亡的初步研究

目的:观察中药提取物(CHP)对急性髓系白血病细胞Kasumi-1和滤泡状淋巴瘤细胞Su-DHL-4的诱导凋亡效应。方法:将浓度为50μg/mL的CHP分别作用于Kasumi-1和Su-DHL-4细胞,观察细胞的生长状况与形态变化;应用流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸的外翻、线粒体跨膜电位及凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达变化情况。结果:Kasumi-1和Su-DHL-4细胞经50μg/mL CHP处理后,生长均受到抑制,48 h时的生长抑制率分别为(69.45±7.21)%和(82.44±5.86)%,并可观察到典型的凋亡细胞。与对照组相比,CHP处理24 h后,2种细胞的AnnexinⅤ阳性率分别从(10.58±1.22)%和(4.30±0.52)%上升到(53.53.±6.07)%和(59.87±5.56)%,差异均有统计学意义(P<0.01);线粒体跨膜电位下降的细胞百分率从(6.67±0.64)%和(7.20±2.33)%上升到(31.13±1.80)%和(55.97±7.33)%,差异亦有统计学意义(P<0.01);此外,Su-DHL-4细胞中Bcl-2蛋白水平也有明显下降。结论:CHP能诱导急性髓系白血病细胞Kasumi-1和滤泡性淋巴瘤细胞Su-DHL-4发生凋亡。