HBx基因抑制肝前体细胞凋亡与分化的小鼠体内研究

目的 构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响.方法 从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细胞标本,通过RT-PCR和Western blot 验证HBx基因在肝前体细胞中的表达;通过荧光显微镜、免疫组织化学染色法、RT-PCR检测细胞株是否到达小鼠肝脏并表达目的基因;使用TUNEL-FITC/DAPI法、RT-PCR和Western blot检测肝前体细胞的凋亡和分化情况.结果 携带了HBx基因的肝前体细胞株成功到达小鼠肝脏内并表达HBx蛋白,TUNEL-FITC/DAPI法显示HBx显著抑制小鼠肝前体细胞发生凋亡,RT-PCR和Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl2、Mcl-1的表达上调,促凋亡蛋白Bax的表达下调,细胞分化早期指标CK19表达增加,而细胞晚期分化指标CK18表达降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 HBx蛋白在小鼠体内可以抑制肝前体细胞凋亡和分化成熟,诱发肝癌发生的早期事件.     

防风色原酮类成分的近红外光谱定量分析

目的:本文建立了能快速测定防风中升麻素、4种色原酮含量之和的近红外光谱定量模型。方法:用高效液相色谱法测定55批防风饮片的4种色原酮的含量作为参考值,结合偏最小二乘回归法(PLS)建立回归模型。筛选了不同的光谱预处理方法、波段及最佳因子数,最终模型通过相关系数(R2)、预测均方根误差(RMSEP)和校正均方差(RMSEC)来评估其稳健性。结果:升麻素的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 025 0、0. 024 0、0. 949 9,4种色原酮含量总和的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 2460、0. 1720、0. 9110。结论:本研究建立的近红外光谱定量模型较准确,可用于对防风质量的快速检测。     

不同净制工艺对三七质量的影响

目的:分析不同净制工艺对三七主根、剪口、筋条质量的影响,为建立该药材合理的净制工艺提供参考。方法:选取超声清洗5 min,超声清洗10 min,流水冲洗,锉刀打磨和清水浸泡5种清洗方式对三七进行净制处理,并参照药典的方法对其外观性状、水分、总灰分、醇溶性浸出物及有效成分含量进行测定,将各参数结合方差分析等多元统计分析进行比较。结果:超声清洗5 min更适合根和筋条有效成分的保留,超声清洗5 min和锉刀打磨2种净制方式均适用于剪口;醇溶性浸出物和人参皂苷Rg1,Rb1和三七皂苷R1含量均为剪口主根筋条。结论:超声清洗作为一种新型的净制方法,适用于三七所有药用部位的清洗。     

全国中药资源普查采集女贞子样品农药残留研究

目的:为了解全国范围内女贞子农药残留现状及为女贞子农残含量标准制定提供数据基础。方法:建立气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法农残测定方法,测定全国第四次中药资源普查所收集的48批女贞子样品中的229种农药残留。结果:48批女贞子样品中有7批检测出农药残留,检出农药为禾草敌(环草丹/草达灭)、异丙甲草胺、毒死蜱、三唑磷和三氟氯氰菊酯。结论:女贞子药材栽培过程中农药使用种类多样,亟需对女贞子药材栽培中的农药使用种类和样品中的残留量进行规定。     

基于市售重楼饮片质量研究对重楼饮片标准的思考

目的:对重楼市售饮片进行基于性状鉴别、浸出物、含量测定等多方面分析，以期为重楼的质量评价和重楼饮片市场的良性发展提供数据支持。方法:建立了重楼饮片浸出物测定方法，采用热浸法测定其醇溶性浸出物，对重楼饮片炮制方法进行了研究，测定了重楼饮片外观性状及重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量。结果:重楼饮片浸出物含量之间的差异性较大，云南产地浸出物的平均含量略小于四川产地浸出物含量；市售重楼饮片大部分为厚片，少数为段，均不符合《中华人民共和国药典》（2015年版）“重楼”炮制项“切薄片”的规定；重楼饮片皂苷含量差异较大，四川产地重楼饮片皂苷含量略大于云南产地，多数重楼饮片所含皂苷以重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅶ为主，少数样品重楼皂苷Ⅵ含量较高，可能存在掺伪现象。结论:为保证临床使用需求及药效，建议《中华人民共和国药典》修订饮片炮制项、含量测定项，并补充性状项。     

新疆产黄甘草叶绿体基因组特征及甘草属药用植物叶绿体基因组比较与系统发育分析

黄甘草为甘草属药用植物资源,常混于道地甘草药材中。本研究利用Illumina高通量测序技术对黄甘草叶绿体全基因组进行测序,完成其物理图谱绘制和基因组特征解析,并与甘草、胀果甘草、光果甘草进行比较基因组学分析,构建甘草属的系统进化树。黄甘草叶绿体基因组基因组全长127 864 bp, GC含量34.25%,由一个大单拷贝区(large single copy, LSC)、一个小单拷贝区(small single copy, SSC)构成,基因组缺失反向重复IR区,属于IRLC群体;共注释得到110个基因,包括76个蛋白编码基因、30个tRNA基因和4个rRNA基因。MISA共检测出301个SSRs,富含A-T重复。黄甘草叶绿体基因组密码子偏好性较弱,密码子偏向使用A和T这两种碱基。通过同源性比对,筛选出黄甘草的3个特异性基因片段。基于Pi分析获得药用甘草植物6个新的高突变区(psbZ～psbC、trnC-GCA～rpoB、trnR-UCU～trnG-UCC、ycf2、trnN-GUU～ycf1、ndhA)。系统发育分析结果支持新疆产黄甘草为与三种药用甘草关系密切的种间杂交类群,同域分布的...     

三七生长年限对5个皂苷及其抗血栓作用的影响

目的 通过比较分析不同生长年限对三七质量、皂苷含量及抗血栓作用的影响,为确定三七药材适宜的采收年限提供数据支持。方法 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定三七中人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、三七皂苷R₁ 5个主要皂苷,比较1—6年不同生长年限的三七有效成分的积累情况。同时,利用斑马鱼血栓模型比较1、2、3年生三七的抗血栓作用。结果 1—3年生三七质量、5个皂苷含量均随生长年限的增加逐渐累积,其中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量均较高,随年限变化最显著;而4—6年生三七中质量、皂苷含量受批次个体等影响较大,皂苷含量波动较大,与3年生三七相比差异无统计学意义。1—3年生三七抗血栓作用比较中发现,在相同剂量下,生长年限越长,疗效越好;在相同生长年限下,剂量越大,疗效越好。结论 综合品质、产量、种植成本及活性等因素,结合目前产地种植三七的实际情况,3年生三七整体品质较高且趋于稳定,可为三七标准化采收提供依据。     

胚胎干细胞对急性髓系白血病细胞KG-1a的影响

目的:研究人胚胎干细胞H9在体外对人急性髓系白血病细胞KG-1a增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外将人胚胎干细胞H9和白血病细胞KG-1a进行接触式共培养,用CCK8检测KG-1a的增殖情况;用流式细胞术检测共培养后细胞的凋亡以及周期改变;荧光定量PCR检测BAX、BCL-2、caspase-3的m RNA表达;Western blot分析BAX、BCL-2、caspase-3的蛋白表达。结果:H9能明显抑制KG-1a细胞的增殖,将细胞阻滞于G2/M期,共培养后的KG-1a细胞的凋亡率高于对照组。BAX、Caspse-3的m RNA和蛋白表达均上调,BCL-2的m RNA和蛋白表达下调。结论:胚胎干细胞能抑制KG-1a细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与BCL-2表达下调和BAX、Caspse-3表达上调有关。