非洲传统草药Hypoxis Hemerocallidea提取物对糖尿病骨骼肌AMPK信号通路作用机制研究＊

目的：探讨Hypoxis Hemerocallidea（AP）对糖尿病大鼠骨骼肌AMPK信号通路的影响。方法：①40只雄性SD大鼠,10只作为正常组,30只高脂喂养1月,加一次性腹腔注射STZ造模,造模成功后分为模型组、盐酸吡格列酮组、AP组,分组灌胃5周。取骨骼肌组织包埋切片进行免疫组化;利用Western Blot检测骨骼肌p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况;②使用100 mmol·L-1葡萄糖诱导建立C2C12骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型,设为模型组;另加AP含药血清设置处理组;对照组为正常细胞。检测各组葡萄糖消耗量,细胞增殖情况,检测SOD、MDA含量,采用Western Blot、RT-PCR检测各组p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况。结果：①与正常组比较,AP能上调DM大鼠骨骼肌组织p-AMPKα蛋白量（P<0.01）,增加骨骼肌AS160的磷酸化水平（P<0.01）,上调GLUT4表达（P<0.01）;②与正常组比较,高糖造成了C2C12骨骼肌细胞活性下降,葡萄糖消耗量减低（P<0.05）,SOD降低（P<0.01）,MDA增加（P<0.01）,p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达降低（P<0.01）。干预48 h后,AP含药血清组C2C12骨骼肌细胞SOD均显著增高（P<0.01）,MDA含量降低（P<0.05）,提高了AMPKα、AS160的磷酸化水平（P<0.01）,增加GLUT4蛋白表达（P<0.01）。结论：诱导AMPKα、AS160磷酸化促进GLUT4表达可能是AP改善糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。     

降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素信号通路IRS1位点磷酸化的影响

目的通过观察降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体底物1(insulin receptor substrates 1,IRS1)磷酸化的影响来探讨该方发挥降糖增效作用的机制。方法将40只6~8周龄雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.134 g/kg)、降糖增效方组(0.64 g/kg)、联合组(降糖增效方0.64 g/kg+二甲双胍0.134 g/kg),另选ZDF(fa/+)大鼠10只为正常组,连续干预6周;实验结束检测体空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素水平(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(homeostatic model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT);蛋白免疫印迹法(Western bloting)检测IRS1丝氨酸磷酸化位点ser307、ser612、ser1101表达。结果与模型组相比较,各治疗组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR、OGTT2 h血糖水平、AUC、SCr、BUN显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与二甲双胍、降糖增效方组比较,联合组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR显著降低(P<0.05,P<0.01);OGTT2 h血糖水平以及AUC显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 Ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论降糖增效方降低糖尿病大鼠肝脏IRS1 ser307/612/1101位点磷酸化水平,这可能是其增加降糖疗效的机制。     

青钱柳多糖对H4IIE肝细胞胰岛素信号传递的影响

目的：观察青钱柳多糖对肝细胞胰岛素信号传导通路关键靶点基因、蛋白表达的影响。方法：以H4IIE大鼠肝细胞为模型,培养72h后,采用Neutral Red法检测青钱柳多糖（50、100、200、400μg·mL^-1）对细胞活性的影响;根据细胞活性检测结果分为正常对照组（Control组）、胰岛素组（Insulin组）、青钱柳多糖低剂量组（LCP组）和高剂量组（HCP组）;药物干预2h后RT-PCR检测肝细胞相应基因表达,药物干预30min后,利用Western blot法检测肝细胞相应蛋白磷酸化水平。结果：与Control组比较,100、200、400μg·mL^-1青钱柳多糖干预后肝细胞活性显著升高（P<0.01）;干预2h 后,LCP组InsR、IRS-2基因表达显著升高（P<0.05）,Insulin组和HCP组InsR、IRS-2基因表达极显著升高（P<0.01）;干预30min后,Insulin组、HCP组InsR β、IRS-2、Akt蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。结论：青钱柳多糖具有增加肝细胞活性作用,其上调肝细胞胰岛素信号通路关键靶点InsR、IRS-2基因表达,以及InsR β、IRS-2、Akt蛋白磷酸化水平可能是其发挥降糖作用的机制。     

异槲皮苷对db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢及相关基因表达的影响

[目的]研究异槲皮苷对自发性糖尿病小鼠肝脏脂肪酸代谢相关基因表达的调控作用。[方法]8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、异槲皮苷组,雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组,药物干预4周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA),肝质量和肝质量/体质量;肝组织苏木精-伊红(HE)染色观察肝细胞脂质蓄积;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)基因表达。[结果]与模型组比较,异槲皮苷组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA、肝质量、肝质量/体质量显著降低(P0.05或P0.01);苏木精-伊红(HE)染色肝细胞脂肪变性减轻,肝脏SREBP1c、FAS m RNA表达降低(P0.05;P0.01),PGC1α、PPARαm RNA表达显著升高(P0.05)。[结论]异槲皮苷可以改善db/db小鼠肝脏脂肪酸代谢紊乱,可能是通过下调肝脏SREBP1c、FASm RNA表达,上调肝脏PGC1α、PPARα表达实现的。     

桑叶黄酮对糖尿病小鼠胰岛素抵抗及炎症反应的作用机制

目的 观察桑叶黄酮降糖、改善胰岛素抵抗、抗炎作用并探讨其作用机制。方法 6~7周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、桑叶黄酮高、低剂量组（1.00、0.50 g·kg^-1·d^-1）,另设同周龄C57BL小鼠为正常组。干预6周后,检测小鼠空腹血糖（FBG）、血清胰岛素水平（Fins）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、游离脂肪酸（FFA）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;检测肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase）;苏木素-伊红（HE）染色检测小鼠肝脏形态结构变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏环氧合酶-2（COX-2）、一氧化氮合酶（iNOS）、核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达。结果 与模型组比较,桑叶黄酮高、低剂量组FBG、Fins、HOMA-IR、IL-6、TNF-α、FFA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;肝脏SOD、GSH-Px、Catalase水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,桑叶黄酮高、低剂量组HE染色显示肝细胞排列整齐,炎细胞浸润及细胞脂肪样变明显改善;与模型组比较,桑叶黄酮高、低剂量组肝脏COX-2、iNOS、NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶黄酮具有降糖、改善胰岛素抵抗作用,其作用可能是通过调控糖尿病小鼠肝脏NF-κB分子影响COX-2、iNOS及炎症因子释放,改善炎症状态实现的。     

门脉高压症猪胃壁血管的内皮细胞损伤观察

目的 观察猪门脉高压症时胃壁血管内皮细胞的损伤,探讨肝硬化时胃粘膜病变的发生机制。方法 胆总管结扎猪为门静脉高压症西式,取胃壁作光镜和电镜栓形成。结果 胃壁粘膜下血管和粘膜微血管的内皮细胞细胞肿胀、破损、血小板粘附及微血栓形成。结论 门静脉高压症时胃壁血管内皮细胞损伤,是形成胃粘膜病变的机制之一。     

小肠纤维瘤并系膜裂孔疝及肠套叠1例

患者女,３１岁。脐周及上腹发作性隐痛,伴呕吐、腹泻０５月,加重３ｄ,伴停止排气排便,于１９９７陈洪流,男,３０岁,大学本科,主治医师,利川市人民医院外一科,４４５４００湖北省利川市许光远,通讯地址同第一作者年１０月２３日入院。体查：中度脱水貌,心肺...     

桂皮醛对糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制

目的:观察桂皮醛(cinnamaldehyde,CA)降血糖作用,并探讨其作用机制。方法:6~8周龄雄性db/db小鼠24只,按血糖随机分为模型组,二甲双胍组(0.2 g·kg~(-1)),桂皮醛低剂量组(0.025 g·kg~(-1))和桂皮醛高剂量组(0.05 g·kg~(-1)),每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组。治疗4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(total cholesterd,TC),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血清胰岛素(fasting insulin,Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(homa insulin-resistance,HOMA-IR);取肝脏组织检测肝糖原含量以及高碘酸-希夫(periodic acid-Schiff stain,PAS)染色;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏相关mRNA和蛋白表达。结果:治疗4周后,与模型组比较,CA组小鼠体质量,FBG,Fins,HOMA-IR,血脂明显降低(P0.05,P0.01),肝脏糖原含量显著升高;小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphate,G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)mRNA表达显著降低(P0.01),p-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),p-糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:CA具有降低血糖作用,相关机制可能是通过上调肝脏胰岛素信号通路Akt,GSK-3β磷酸化水平,抑制G-6-P,PEPCK mRNA表达实现。     

芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制研究

目的研究芹菜素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠脂代谢紊乱的作用及机制。方法 8周龄雄性db/db小鼠随机分组分为模型组、芹菜素组(50 mg·kg~(-1)·d~(-1)),以雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组。各干预8周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、成纤维细胞生长因子-19(FGF-19)、空腹胰岛素水平(Fins)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);肝组织HE染色观察肝细胞脂质蓄积; RT-PCR检测肝脏SREBP1c、FAS、Sirt1、PGC1α、CPT1基因表达; Western blot检测PPARα蛋白表达。结果与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量、FBG、CHO、TG、FFA显著降低(P0.05,P0.01),FGF-19显著升高(P0.01); HE染色肝细胞脂肪变性程度减轻,胞内脂滴数量减少,细胞排列整齐;肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达降低(P0.05,P0.01),Sirt1、PGC1α、CPT1αmRNA表达显著升高(P0.05); PPARα蛋白表达显著升高(P0.01)。结论芹菜素可以改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂肪代谢紊乱,可能是通过下调肝脏SREBP1c、FAS mRNA表达,上调肝脏Sirt1、PGC1α、CPT1α、PPARα表达实现的。     

茵陈蒿汤合四逆散治疗非酒精性脂肪肝伴高同型半胱氨酸血症临床观察

目的:探讨茵陈蒿汤合四逆散对非酒精性脂肪肝(NAFLD)伴高同型半胱氨酸血症(HHcy)患者的临床疗效。方法:病例来源于北京市西城区什刹海社区卫生服务中心门诊共126例NAFLD伴HHcy患者,随机数字表法分为脂肪肝对照组(安慰剂)、西药组(多烯磷脂酰胆碱胶囊和叶酸片)、中药组(茵陈蒿汤合四逆散方),42例/组,治疗期间无脱落;连续治疗3个月。观察治疗前后临床有效率,观察肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)],同型半胱氨酸(Hcy),血脂[总胆固醇(TC),总甘油三酯(TG),低密度脂蛋白(LDL),高密度脂蛋白(HDL)],氧化炎症指标[丙二醛(MDA),超氧化物酶歧化酶(SOD),超敏C反应蛋白(hs-CRP)],安全性评价指标肾功能(血肌酐(SCr),血尿素氮(BUN)]以及症状评分。结果:中药组总有效率92. 86%;西药组总有效率88. 10%;两组总有效率比较无统计学差异。各组患者治疗前各指标无差异。治疗后中药组、西药组ALT,AST,Hcy,TC,TG,MDA,hs-CRP,症状积分较本组治疗前明显降低(P 0. 05),且低于脂肪肝对照组(P 0. 05); HDL,SOD明显升高(P 0. 05),且高于脂肪肝对照组(P 0. 05);与西药组比较,中药组ALT,Hcy,TC,TG,MDA,hs-CRP,症状积分明显降低(P 0. 05),SOD明显升高(P 0. 05)。结论:茵陈蒿汤合四逆散改善NAFLD伴Hcy患者的高同型半胱氨酸血症、肝功能、血脂以及氧化、炎症状态。