激光共聚焦显微镜比较观察甾体皂苷Trilliuo、Lc253、Lc239对培养心肌细胞内[Ca2+]i的作用

目的：薯蓣皂苷元的皂苷为许多抗心血管中药中的主要活性成分，具有重要研究价值。本研究以经人工合成获得的薯蓣皂苷元皂苷同系物甾体皂苷Trilliuo(署蓣皂苷元葡萄糖苷、Lc253[薯蓣皂苷鼠李糖(1→2)葡萄糖苷]、Lc239(薯蓣皂苷元[鼠李糖(1→2)，葡萄糖(1→3)]葡萄糖苷)为研究对象，通过考察它们对培养心肌细胞钙离子释放的影响，分析其构效关系。方法：利用激光共聚焦显微镜测定加入fluo3—AM培养的心肌细胞中的钙离子变化情况。结果：Lc253能明显增强心肌细胞节律性和呈浓度依赖性增加心肌细胞静息钙离子水平，加入CaCl2 10mmol/L or KCl 60 mmol/L后钙离子荧光峰强度仍维持在较高水平；而Trilliuo and Lc239在10^—5mmol/L浓度时，对心肌细胞静息钙离子水平作用不明显，在高浓度胞外Ca^2 或K^ 情况下，抑制心肌细胞内钙离子升高；其作用特点与verapamil相似，具有钙离子通道阻断作用。结论：研究结果显示三种甾体皂苷对细胞内钙离子浓度有所差异，结构中连接糖的数目与调孔钙内流的活性有重要的相关性。这些皂苷类化合物对钙离子通道的活性有潜在的开发价值。     

槲皮素降低大鼠心率和心肌钙振荡频率和抑制小鼠心肌肥厚(英文)

目的:研究槲皮素对心肌兴奋收缩耦联及构型重建的影响。方法:经动脉插管记录大鼠血流动力学;缩窄小鼠腹主动脉致心肌肥厚;检测Fura 2-AM负载的培养大鼠心肌细胞内游离钙([Ca~(2 )]_i)及钙振荡,结果:槲皮素剂量相关地降低大鼠窦性心率,而动脉血压、左室压及其微分改变轻微;10-250 μmol·L~(-1)时浓度依赖性降低培养心肌自发钙振荡频率,100μmol·L~(-1)时预防异丙肾上腺素及哇巴因加速钙振荡频率,但不抑制静息[Ca~(2 )]_i.和自发钙振荡及二药增高的振荡幅度,槲皮素还抑制血管紧张素Ⅱ而非高钾的升[Ca~(2 )]_i作用,槲皮素120 mg·kg~(-1)·d~(-1)5 d灌胃不改变假手术鼠的心室与体重之比,但显著抑制腹主动脉结扎小鼠的心室肥大,结论:槲皮素降低心肌钙振荡频率和心肌肥厚但不直接影响心脏兴奋收缩耦联。     

津血源增加口干症模型鼠唾液分泌机制的实验研究

为分析津血源的具体作用机制,该实验对津血源增加口干症模型SD大鼠唾液分泌与激动受体之间的关系进行了研究。研究通过使用M受体阻滞剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶（4-DAMP）和阿托品,或肾上腺受体阻滞剂酚妥拉明,制作3组口干症模型大鼠;造模成功后,予中药津血源灌胃,根据临床常用剂量及SD大鼠体表面积换算,阿托品组将实验动物分为津血源低、中、高剂量组,4-DAMP及酚妥拉明组灌胃中剂量津血源。所有动物给药后,连续测定150 min的唾液分泌量,观察津血源增加唾液分泌的作用特点及与受体之间的关系;并分离大鼠的颌下腺组织,通过Western blot分析津血源对颌下腺细胞水分子通道蛋白5（AQP5）表达的影响。结果发现,比较各组唾液分泌量,与生理盐水组、酚妥拉明组、4-DAMP组及阿托品组相比,津血源组的唾液分泌明显增加,并存在明显差异,P<0.05。在阿托品组中,津血源低剂量组与生理盐水组疗效相当,而津血源中剂量组与生理盐水组相比,存在统计学差异（P<0.05）。唾液分泌量增加的时间曲线图中,发现津血源组与生理盐水组之间存在统计学差异（P<0.05）。与各阻断剂组相比,津血源治疗组颌下腺细胞AQP5蛋白量的表达较前增加,P<0.05 ;除阿托品组外,津血源对其余2组阻断剂的疗效与生理盐水组无明显差异。对津血源给药后的3种阻断剂AQP5的表达量进行比较,发现津血源对阿托品组的疗效比4-DAMP、酚妥拉明组更明显（P<0.05）,后两者之间并不存在统计学差异。因此,研究认为津血源增加唾液分泌（养阴生津作用）的机制可能是通过毒蕈碱M受体（尤其是M₃受体）、肾上腺素受体介导的作用途径,增加唾液腺细胞膜AQP5的表达,促进唾液分泌。     

津血源颗粒上调干燥综合征模型鼠唾液腺水通道蛋白5表达的实验研究

目的:探讨津血源颗粒对干燥综合征(SS)模型大鼠唾液腺中水通道蛋白5(AQP5)表达的影响。方法:用免疫组化法分析SS大鼠唾液腺AQP5表达特点。结果:正常组细胞膜上存在较多AQP5蛋白;佐剂组细胞膜上有表达,但数量较正常组明显减少;模型组腺泡萎缩,残存腺泡顶膜表达明显减少甚至消失,与正常组比较,有显著性差异;津血源颗粒组大部分细胞膜有AQP5蛋白表达,较模型组表达数量明显增多,且分布均匀。结论:津血源颗粒可明显增强SS模型鼠唾液腺中AQP5的表达。     

纳洛酮改变慢性吗啡处理大鼠血管反应性和培养的血管细胞内信号转导

目的:探讨吗啡戒断反应对血管反应性及其细胞内信号转导的影响。方法:大鼠注射递增剂量的吗啡两周后iv纳洛酮催瘾,记录乙酰胆碱(Ach)的降压效应。用含不同药物的Kreb’s液灌流大鼠离体肠系膜血管床。AR-CM-MIC阳离子测定系统检测培养牛胸主动脉内皮细胞(aec)和血管平滑肌细胞(smc)胞浆内游离钙([Ca~(2 )]_i)。计算smc呈磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(Phospho-CREB)免疫阳性反应的比例。结果:纳洛酮iv 2mg/kg催瘾后钝化的Ach降压效应同催瘾前一致。以纳洛酮25μmol/L取代灌流液所含吗啡20μmol/L使成瘾大鼠肠系膜血管的去甲肾上腺素(NE)升压效应的EC_(50)(μmol/L)从2.06±0.38降至1.14±0.21(n=8,P<0.01),而吗啡40μmol/L完全预防NE的作用。即时加入吗啡后对照组血管平滑肌细胞内[Ca~(2 )]_i反应不一。纳洛酮使2/3的吗啡预处理组的血管平滑肌细胞内[Ca~(2 )]_i显著升高,呈Phospho-CREB免疫阳性反应的比例也因之增加。部分内皮细胞的[Ca~(2 )]_i明显下降。结论:纳洛酮增加慢性吗啡处理大鼠血管的反应性可能与血管平滑肌细胞内钙增加有关,并伴有cAMP反应元件结合蛋白的磷酸化增强。     

槲皮素降低大鼠心率和心肌钙振荡频率和抑制小鼠心肌肥厚

目的 研究槲皮素对心肌兴奋收缩耦联及构型重建的影响。方法 经动脉插管记录大鼠血流动力学,缩窄小鼠腹主动脉致心肌肥厚;检测Ｆｕｒａ２－ＡＭ负载的培养大鼠心肌细胞内游离钙（Ｃａ＾２＋）ｉ及钙振荡。结果：槲皮素剂量相关地降低大量窦性心率,而动脉血压,左室压及其微分改变轻微;１０－２５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１时浓度依赖性降低培养心肌血发钙振荡频率,１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１时预防异丙肾上腺素及哇巴因加速钙振荡频     

银杏叶提取物对实验小鼠脑缺血的防护作用

银杏叶提取物（ＥＧｂ７６１）可明显延长双侧颈总动脉结扎导致的急性脑缺血小鼠的存活时间，显著降低小鼠脑缺血再灌期脑组织谷胱甘肽过氧化物酶和钠钾ＡＴＰ酶活性的抑制。预先给予ＥＧｂ７６１可减轻海马缺血再灌后的亚细胞结构损伤。     

津血源颗粒对干燥综合征模型大鼠治疗作用的初步探讨

目的:观察津血源颗粒对干燥综合征模型大鼠的治疗作用。方法:采用差数离心法提取Lewis大鼠颌下腺的P5抗原,用其免疫Lewis大鼠。设津血源颗粒大剂量、小剂量组、模型组、空白对照组及佐剂组。动态观察各组大鼠唾液分泌量、饮水量、颌下腺指数、免疫器官指数及组织病理学。结果:模型组大鼠表现出唾液分泌量减少,饮水量增加,颌下腺指数、免疫器官指数、组织病理学淋巴细胞浸润程度较正常组明显增大。津血源颗粒对上述指标均有改善作用。结论:津血源颗粒对干燥综合征有治疗作用。     

膜片钳研究中的钙耐受大鼠心肌细胞分离方法

目的：探讨膜片钳实验中大鼠心肌细胞分离过程中影响细胞活性和钙耐受性的各种影响因素。方法：采用Langendorff灌流，先用台氏液灌流30s，再用无钙台氏液灌流5-7min，其后换含胶原酶Ⅰ0.1-0.2g/L的低钙本科液消化约8-30min，最后用无钙台氏液冲洗心脏2min，剪下心肌组织，KB液中37℃剪碎吹打温育5min后，用200μm筛网过滤，室温静置换液后进行膜片钳实验。结果：注意控制水，酶，温度等各种因素后，可得到杆状、横纹清晰、膜良好的耐钙心肌细胞。结论：大鼠心肌细胞分离过程中各种因素控制好后可以保证一定的细胞成活率及其质量，有利于膜片钳实验的顺利进行。