杜仲补天素片对雄性动物促生育作用的研究

目的对杜仲补天素片药效进行二次开发,新增其治疗男性不育症的功效,为其临床用于治疗男性不育症提供实验基础。方法将雄性小鼠随机分为杜仲补天素片高、中、低剂量(0.72、0.36、0.18 g/kg)组,对照组,阳性药生精胶囊组,观察各组雄性小鼠免疫器官及性腺器官脏器指数、抗疲劳作用、生育力作用。将雄性SD大鼠随机分为杜仲补天素片高、中、低剂量(0.504、0.252、0.126 g/kg)组、对照组,模型组,阳性药生精胶囊组,观察各组雄性大鼠脏器指数、睾丸病理结构的变化,测定各组雄性大鼠血清性激素水平及血清氧化反应指标以及生育力;进行HE染色,观察各组雄性大鼠的睾丸形态学结构。结果杜仲补天素片通过提高幼龄雄性小鼠免疫功能和性腺器官脏器指数,延长游泳存活时间,具有抗疲劳作用,从而促使雌性小鼠受孕率上升。通过增加模型大鼠的体质量,提高性器官及肾脏指数,增加血清性激素促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)的量,降低血清丙二醛(MDA)量,提高血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,产生抗氧化损伤作用并改善睾丸病理形态损伤,从而促使雌性大鼠受孕率及平均产仔数上升,发挥抗腺嘌呤致大鼠生精功能障碍作用。结论杜仲补天素片对雄性动物具有促生育、改善生育及逆转受损生殖能力的作用,为杜仲补天素片的临床应用提供实验基础。     

人感染禽流感病毒的传播

禽流感病毒属于A型流感病毒,其感染导致的传染病一般只在禽类间传播,然而1997年以来,存在于家禽中的一些禽流感病毒已经突破了动物种间屏障,能够直接从禽类传播给人类,导致亚洲及全球范围内很多感染病例的死亡,存在潜在大流行的威胁。此文对1997年以来禽流感病毒感染人类的状况进行分析,为今后新型禽流感暴发的预防和控制提供参考。     

甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

流感病毒介导的抗肿瘤研究进展

随着反向遗传技术的不断完善,流感病毒的改造和利用成为可能.流感病毒具有强传染性,将其改造成携带外源基因的流感病毒载体,有利于转染到目的细胞,特别是肿瘤细胞,为肿瘤基因治疗提供新的手段.同时,由于流感病毒对肿瘤细胞具有凋亡作用,有望将其开发成为肿瘤疫苗及具有基因递送作用的病毒载体用于肿瘤基因治疗.本文就流感病毒的溶瘤作用,流感病毒载体的抗肿瘤及其肿瘤靶向性这几方面的研究做一综述.     

纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附研究

目的 研究纳米化蒙脱石衍生物对甲型流感病毒的吸附作用,了解其能否阻止病毒侵入细胞.方法 将梯度稀释的纳米化蒙脱石衍生物PTK-RY00101001分别与PR8、Memphis 、Aichi 3种病毒结合后感染MDCK细胞,利用细胞感染免疫染色方法测定PTK-RY00101001对病毒感染细胞的作用,并通过测定MTT观察PTK-RY00101001对正常细胞的损伤影响.此外,将不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与流感病毒作用,对纱布和剩余病毒液分别进行免疫实验和细胞感染免疫实验,判定PTK-RY00101001对病毒的吸附作用.结果 PTK-RY00101001在25 μg/mL以下,对正常细胞几乎无损伤.细胞感染免疫染色试验显示,PTK-RY00101001对流感病毒感染细胞的能力有较强减弱作用.不同浓度PTK-RY00101001固定的纱布与病毒作用后,纱布染色结果显示无明显差异,通过剩余病毒液感染细胞免疫实验,1 000和200μg/mL浓度的FTK-RY00101001与纱布固定后,PTK-RY00101001对病毒有一定的吸附作用.结论 纳米化蒙脱石衍生物在不损伤正常细胞的浓度下,具有通过吸附甲型流感病毒,从而阻断病毒感染细胞的能力,因此推断其能通过吸附作用而阻止流感病毒入侵细胞.     

燕窝对再生障碍性贫血小鼠血常规及继发流感病毒感染的影响

目的 探讨食用燕窝对再生障碍性贫血(再障)继发流感病毒感染的保护作用.方法 食用燕窝的药理测定.体外实验采用血液凝集抑制试验和细胞感染中和试验,体内实验采用再障小鼠动物模型和病毒感染模型,观察燕窝酶解物对再障小鼠血常规的影响,判断食用燕窝的生物药效.结果 经胰蛋白酶水解后的燕窝酶解物N 1-Pan和N2-Pan的血凝抑制活性分别为4μg/mL和125 μg/mL,具有较强的抑制血凝的活性.N1-Pan对流感病毒有很强的抑制作用(IC50为40μg/mL).小鼠喂养实验发现,无病毒燕窝喂养组第20天血常规比第10天有明显改善(提升10％～20％),组内比较差异有统计学意义(确切概率法,P＜0.05);燕窝喂养的接种流感病毒再障小鼠较未喂养燕窝的再障小鼠外周血常规和体重有明显改善(确切概率法,P＜0.05),存活率也显著高于后者(4/8∶7/8,确切概率法,P＜0.05).结论 N1-Pan能明显改善再障小鼠的外周血常规和体重,提高流感病毒感染再障小鼠的存活率.     

红细胞分布宽度与自身免疫性肝炎严重程度的相关性分析

目的探讨红细胞分布宽度(RDW)与自身免疫性肝炎(AIH)严重程度的关系。方法选择浙江省台州医院2011年1月至2015年11月61例AIH患者,检测其RDW,随访AIH患者复发情况并进行生存分析。结果 AIH患者RDW水平(14.10±1.51)%高于健康人对照组(12.90±0.72)%,差异有统计学意义(P<0.01),也高于相关疾病对照组(13.56±1.23)%,差异有统计学意义(P=0.027)。AIH患者进行Child-pugh分级,B、C级组共25例,RDW水平为(15.07±1.69)%,高于A级组36例(13.44±0.98)%,差异有统计学意义(P<0.01)。随访25例,缓解组13例,RDW水平(13.57±0.97)%,复发组12例,RDW水平(15.48±1.43)%,P=0.01。用Kaplan-meier法,RDW>15%有10例,缓解时间是(510±120)d,RDW≤15%为15例,缓解时间是(1 483±243)d,P=0.019。COX回归分析表明RDW是AIH患者复发的危险因素,HR=3.938,95%CI为1.166～13.296。结论RDW可用于评估AIH患者疾病严重程度。     

流感病毒M1单克隆抗体的制备及其生物学特征

目的 制备针对流感病毒基质蛋白M1的单克隆抗体(mAb),为研究流感病毒检测试剂盒提供实验材料.方法 以纯化的M1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗M1 mAb的杂交瘤细胞,注射小鼠腹腔获得M1 mAb,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记M1 mAb.通过Western印迹法、ELISA、细胞感染免疫染色实验检测所获M1 mAb的作用和特性.结果 获得能稳定分泌抗流感病毒基质蛋白M1的杂交瘤细胞系,纯化腹水得到M1 mAb和HRP-M1 mAb.Western印迹法结果显示,M1 mAb和HRP-M1 mAb能与M1抗原及H1N1、H3N2亚型流感病毒的M1蛋白反应,是针对M1蛋白的mAb;利用ELISA方法研究M1 mAb和HRP-M1 mAb对M1抗原及流感病毒的检测作用,结果显示它们能检测H1N1和H3N2亚型的甲型流感病毒,而HRP-M1 mAb的检测能力比M1 mAb强;细胞免疫染色实验显示,M1 mAb能结合H1N1和H3N2亚型病毒感染的细胞.结论 针对M1蛋白的M1 mAb和HRP-M1 mAb已制备成功.它们能检测H1N1和H3N2亚型甲型流感病毒,有望应用于流感病毒诊断以及鉴别诊断试剂盒的研发.     

安徽不同产地野生与栽培多花黄精中黄精多糖含量比较

目的测定安徽不同产地野生与栽培多花黄精中黄精多糖的含量。方法分别采集安徽不同产地栽培和野生多花黄精,以无水葡萄糖为对照品,0.2%蒽酮-硫酸溶液为显色剂,测定波长582 nm,采用紫外-可见分光光度法测定吸光度,计算样品中黄精多糖的含量。结果安徽不同产地野生多花黄精中的黄精多糖含量明显高于栽培多花黄精,其中青阳、岳西、宿松、祁门4个产地野生与栽培多花黄精中的黄精多糖含量比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。祁门野生多花黄精中的黄精多糖含量最高,为(11.47±0.44)%,宿松栽培多花黄精最低,为(6.88±0.09)%。结论通过比较安徽不同产地野生与栽培多花黄精的质量差异,可更加合理地开发和利用安徽地区的多花黄精。     

类风湿性关节炎患者外周血NKG2D、NKG2A及颗粒酶B表达的研究

目的 本研究旨在探讨类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中NK细胞表达NKG2D、NKG2A及胞内颗粒酶B的水平,并且分析它们与疾病活动度（DAS28）的相关性。方法 流式细胞术检测41例RA患者和35例健康对照者外周血中NK细胞、NKG2D⁺NK细胞、NKG2A⁺NK细胞以及颗粒酶B⁺NK的表达水平;采用Spearman秩相关分析法分析它们与DAS28的相关性。结果 RA患者外周血中,NK细胞表达水平显著低于健康对照组（P=0.016）;NKG2D的表达水平显著低于健康对照组（P=0.002）,且NKG2D的表达水平与DAS28评分呈负相关（P<0.05）;NKG2A的表达水平与健康对照组之间比较差异无统计学意义（P=0.547）,且与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）;颗粒酶B的表达水平有所降低（P=0.034）,但与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）。结论 活化性受体NKG2D以及胞内颗粒酶B表达的异常降低可能导致NK细胞杀伤活性的损伤,不能有效杀伤免疫效应细胞,从而促进了RA的发生、发展。