利用 RNAi阻抑 hTERT 和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的：利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶（hTERT）和Bax inhibitor‐1（Bi‐1）基因设计并构建的质粒载体转染至CNE‐2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT 和Bi‐1基因表达的效果。方法收集CNE‐2Z细胞,设未处理组、pEGFP‐N1组、pEGFP‐N1／Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE‐2Z细胞的转染能力,RT‐PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi‐1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE‐2Z细胞的质粒和Lip最佳组合：质粒为2．5μg ,Lip为6．25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi‐1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi‐1基因的表达。     

乙醇所致精神障碍患者血细胞参数的研究

目的：探讨乙醇所致精神障碍患者血细胞参数的变化,从而为乙醇所致精神障碍患者提供一个实验室参考指标。方法选取广州医科大学附属脑科医院2011年2月至2013年8月收治的113例乙醇所致精神障碍患者（患者组）和120例健康体检者（健康对照组）,分别检测两组血细胞参数指标,并对两组数据进行分析和比较。结果乙醇所致精神障碍患者血液红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（HCT）、血小板（PLT）、平均血小板容积（MPV）、淋巴细胞计数（LYMPH＃）明显降低,平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、红细胞分布宽度、中性粒细胞计数和单核细胞计数明显升高,平均血红蛋白浓度和白细胞无明显变化。结论红细胞的MCV、MCH 的检测可以作为乙醇所致精神障碍的一个监测指标。     

7139例精神病患者乙型肝炎病毒感染血清学标志物检出模式分析

目的分析精神病患者乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）血清学标志物检测组合模式,估计其感染程度,为精神病患者乙肝预防、诊断和治疗提供实验室依据。方法用ELISA方法检测我院2009年7月至2011年6月的门诊及住院精神病患者乙肝病毒表面抗原（Hepatitis B surface Antigen,HBsAg）、抗乙肝病毒表面抗原抗体（Anti-hepatitis B surface Antibody,Anti-HBs）、乙肝病毒e抗原（Hepatitis B e Antigen,HBeAg）、抗乙肝病毒e抗原抗体（Anti-hepatitis B e Antibody,Anti-HBe）和抗乙肝病毒核心抗原抗体（Anti-hepatitis B core Antibody,Anti-HBc）五项指标,并对所有数据进行统计与分析。结果 7139例血清标本中检出HBV血清学标志物5226例,总感染率73.20%。血清学标志物表达模式可分为感染期模式组和恢复期模式组,共18种模式。结论精神病患者较同类人群血清总感染率偏高,且血清学标志物模式较为复杂,建议对住院精神病患者注射乙肝疫苗,以降低乙肝的传染率。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对D-半乳糖诱导的AD模型小鼠Aβ生成作用的研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠β淀粉样肽(Amyloid-βpeptide,Aβ)生成作用的影响。方法:将60只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、VE阳性组、EGCG低剂量组、EGCG中剂量组、EGCG高剂量组,每组10只。注射D-半乳糖建立AD小鼠模型后,对照组和模型组灌胃等量双蒸水;VE阳性组每天灌胃5.6%VE 1次;EGCG低、中、高剂量组分别按每天2 mg/kg灌胃0.04%EGCG、4 mg/kg灌胃0.08%EGCG和6 mg/kg灌胃0.12%EGCG 1次;持续给药28天后通过避暗试验和Morris水迷宫试验观察小鼠动物行为学变化;ELISA法检测小鼠脑匀浆中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Aβ水平;苏木精-伊红(HE)染色观察海马内神经元的变化。结果:EGCG能明显延长AD模型小鼠跳台潜伏期、减少跳台错误次数、缩短通过迷宫的时间和减少进入盲端的错误次数;且能显著减轻D-半乳糖诱导的AD模型小鼠海马神经元的损伤及降低其脑内IL-6、TNF-α和Aβ表达水平,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:EGCG可能通过降低D-半乳糖诱导的AD模型小鼠脑内Aβ的含量,来抑制神经细胞凋亡,从而改善学习记忆障碍。     

1043例汉族双相情感障碍患者CYP2C19基因多态性及代谢表型分析

目的探讨汉族双相情感障碍患者CYP2C19基因多态性及代谢表型的分布,为临床合理用药提供理论参考和指导。方法以DNA微阵列技术检测1 043例双相情感障碍患者的CYP2C19基因多态性及代谢表型(快代谢型,中等代谢型,慢代谢型),用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,同时分析基因多态性发生频率与性别的相关性。结果所有检测对象中,CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3基因型的频率分别为40.6%、40.5%、5.2%、9.9%、3.4%、0.5%;CYP2C19基因快代谢型、中等代谢型、慢代谢型3种代谢表型所占比例分别为40.5%、45.8%、13.7%;不同性别之间CYP2C19基因型及代谢表型差异无统计学意义(P0.05)。结论汉族双相情感障碍人群CYP2C19基因多态性以*1/*1及*1/*2为主,681位点的变异率高于636位点,检测CYP2C19基因多态性及代谢表型有助于临床合理用药。     

阿尔茨海默病患者脑脊液miRNA检测及初步分析

目的:分析AD患者特异性微小RNA(mniRNA)表达谱,为深入研究miRNA与AD发生和发展的关系以及寻找新的AD分子标志物奠定基础.方法:利用miRNA芯片就10例AD患者和认知正常老年人脑脊液的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-Time PCR验证miRNA芯片检测结果.结果:miRNA芯片检测发现,在AD患者和认知正常老年人脑脊液中共有128个差异表达miRNA,其中63个上调,下调65个.另外,应用Real-Time PCR对miR-125b和miR-132这2个上调miRNA进行了验证,结果与芯片检测结果一致.结论:AD患者脑脊液具有特异性的miRNA表达谱,提示可能在嘣RNA表达环节找到新的AD分子标志物.     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P0.05)。结论雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。     

颅脑损伤患者血清3项水平的变化及意义

目的探讨颅脑损伤患者早期血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）水平的变化及其临床意义。方法 39例轻、中型颅脑损伤患者（轻、中型组）、34例重型颅脑损伤患者（重型组）分别于入院时、入院后1、3和7d采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-1β、TNF-α及ICAM-1水平,并以52例健康体检者作为对照组。结果轻、中、重度颅脑损伤患者血清IL-1β、TNF-α及ICAM-1水平与对照组相比均升高,其水平与颅脑损伤的严重程度明显相关（P〈0.05）。各组患者ICAM-1水平入院当天有所升高,并在入院后1d达高峰,3d开始下降;IL-1β、TNF-α水平在入院当天有所升高,3d达到高峰,以后逐渐下降。结论血清IL-1β、TNF-α及ICAM-1水平是评价颅脑损伤早期炎症损伤程度的重要指标,其水平变化与伤情严重程度密切相关。     

流行性乙型脑炎／登革病毒1型嵌合基因的构建和鉴定

目的：构建和鉴定流行性乙型脑炎（乙脑）／登革病毒1型（ DV1）／JEV prME嵌合基因。方法利用分子生物学技术构建登革病毒和乙脑病毒嵌合的prME嵌合基因,重叠PCR法鉴定;在质粒载体pcDNA3．1（＋）的基础上,构建表达pcDV1／JEV prME的重组质粒载体,利用LipofectamineTM2000将登革／乙脑prME嵌合质粒转染至BHK－21细胞,间接免疫荧光法检测prME蛋白在细胞中的表达。结果 DNA测序结果证实pcDV1／JEV prME重组质粒完全正确,成功构建的登革／乙脑嵌合质粒在BHK－21细胞中能够表达prME蛋白。结论通过一系列的鉴定手段,可以认定本实验中构建的登革／乙脑嵌合质粒能够在真核细胞中顺利表达。     

猫爪草多糖的理化性质及其对ANA-1细胞的免疫调节作用

目的探讨猫爪草多糖(PRT)对半贴壁巨噬细胞株ANA-1细胞免疫功能的影响。方法采用水提醇沉法提取和分离PRT;红外光谱法测定PRT分子结构;MTT法检测ANA-1细胞增殖能力;不同浓度的猫爪草多糖作用于脂多糖(LPS)诱导的ANA-1细胞,采用Griess法检测一氧化氮(NO)生成量;一氧化氮合酶(i NOS)测定试剂盒检测活性;RT-PCR法检测i NOS、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)m RNA水平的表达。结果得到灰白色粉末状猫爪草多糖,多糖含量98.17%;红外光谱显示PRT的糖苷键为α-构型,具有吡喃型糖环;PRT增强ANA-1细胞增殖能力,上调IL-6和TNF-αm RNA的表达,且浓度为200μg/m L时作用最强;PRT呈浓度依赖性抑制LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO和i NOS活性,当多糖浓度为100μg/m L时,能够完全抑制i NOS m RNA的表达。结论 PRT能够增强ANA-1细胞增殖能力,上调IL-6和TNF-αm RNA水平的表达,抑制LPS诱导的ANA-1细胞分泌NO和i NOS的表达。