地龙煎液对人出血、凝血时间的影响

目的 观察地龙煎液对人出血时间、凝血时间的影响。方法 口服地龙煎液2次(20mL／次)，检测其出血时间、凝血时间。结果 地龙组出血时间、凝血时间均比对照组明显延长(P＜0．01)。结论 地龙能延缓人类生理性止血和凝血过程。     

广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

目的?通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法?提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果?COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750?bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574?bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论?设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。      

2种地龙饮片不同提取法体外抗凝活性对比研究

目的 研究酒制对地龙体外抗凝活性的影响，为地龙临床应用提供科学依据。方法 分别采用传统水提法和仿生酶解提取法对生品地龙、酒制地龙进行提取，以活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、凝血酶时间（thrombin time，TT）和抗凝血酶活力为指标进行抗凝活性测定，并采用BCA蛋白测定法测定可溶性蛋白、多肽含量。结果 采用水提取法时，PT和抗凝血酶滴定法均显示酒地龙与生地龙抗凝血活性相当，TT测定结果显示酒地龙抗凝血活性强于生地龙，APTT测定结果则显示地龙具有促凝血活性，且在一定范围内，浓度越高，促凝效果越强，蛋白、多肽含量为酒地龙大于生地龙；采用仿生酶解提取法时，APTT和PT测定结果显示酒地龙的抗凝血活性强于生地龙，并且蛋白、多肽含量测定结果显示酒地龙要多于生地龙，但TT和抗凝血酶滴定法并未比较出生品与酒制品之间的差异。结论 与传统水提法相比，仿生酶解提取法能更多地提取出蛋白多肽类成分，仿生酶解提取液具有更强的抗凝血活性，2种提取法均显示地龙酒制有利于可溶性蛋白、多肽的溶出，能增强体外抗凝血活性。     

地龙及其注射液指纹特征谱研究

采用薄层扫描法建立了地龙药材及其注射液的指纹特征谱,为控制其质量提供了依据。     

通俗环毛蚓的化学成分研究

目的：对中药通俗环毛蚓的化学成分进行分离鉴定。方法：乙醇、乙醚等溶剂提取物，用红外光谱仪和气相色谱-质谱联用方法以及氨基酸分析仪等技术鉴定化合物。结果：在通俗环毛蚓中测定有琥珀酸、18种脂肪酸和20种游离氨基酸。结论：通俗环毛蚓中的脂肪酸可能是其活性成分之一；另外其总游离氨基酸含量较高（含量为8.629%）。     

地龙类药材药理作用比较

地龙类药材热浸剂均具有明显的解热、降压、平喘和利尿作用,其中广地龙和沪地龙的解热作用强于土地龙,地龙类药材其它作用的大小无显著性差异。     

中药地龙中参环毛蚓环介导等温扩增快速检测方法

[目的]建立中药材地龙中参环毛蚓的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对参环毛蚓的快速检测。[方法]采集不同产地地龙,提取总DNA后将所提取的总DNA进行线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COI)基因片段扩增、测序、比对,判断各产地地龙物种。用设计的LAMP引物组进行地龙LAMP实验,反应结束后向扩增产物中加入核酸染料SYBR GreenⅠ,分别在自然光、紫外光下直接通过肉眼来观察颜色变化及利用琼脂糖凝胶电泳来检测其引物的特异性。[结果]利用新设计的LAMP引物对参环毛蚓实现了特异性扩增,且检出限达40 fg/μL,具有极高的灵敏度。[结论]利用LAMP技术可实现参环毛蚓的现场快速检测。     

金属硫蛋白在参环毛蚓不同组织中的表达研究

目的:研究金属硫蛋白(MT)在参环毛蚓不同组织中的表达。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,进行HE组织切片染色和免疫组化反应,并在显微镜下观察MT在参环毛蚓体内的分布。结果:在参环毛蚓表皮层和肌肉层均未发现明显的MT表达,而在其肠道的黏膜下腺细胞质之间均有明显的棕黄色斑点,且随着镉浓度的增加,MT的表达越来越强。结论:MT主要在参环毛蚓的肠道中表达,参环毛蚓对重金属的富集是通过肠上皮细胞来完成。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定地龙中4个黄曲霉毒素

目的:建立同时测定地龙中4个黄曲霉毒素含量的高效液相色谱串联质谱法。方法:样品经甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱净化后,采用高效液相色谱串联质谱法测定其中4个黄曲霉毒素的含量,以多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m/z 313→241(黄曲霉毒素B1,CE 50 eV),m/z 315→259(黄曲霉毒素B2,CE 43 eV),m/z 329→243(黄曲霉毒素G1,CE 38 eV)和m/z 331→245(黄曲霉毒素G2,CE 40 eV)。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测限分别为0.03,0.02,0.03,0.02μg.kg-1,回收率在88.0%～100.3%范围内,RSD均低于6.1%。结论:该方法快速、灵敏,结果准确,适用于地龙中4个黄曲霉毒素的同时检测。     

参环毛蚓不同部位细胞原代培养及鉴定

目的：筛选出参环毛蚓体内细胞培养的最佳部位,为建立参环毛蚓细胞原代培养方法提供实验基础。方法：分别提取参环毛蚓的皮、肠道、嗉囊、前列腺细胞进行培养,观察其细胞生长。结果：参环毛蚓的表皮和肠道细胞经培养后,细胞均有生长,并发现肠道细胞生长良好,5~6天后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。另发现参环毛蚓的嗉囊、前列腺等部位的细胞没有增长迹象。结合形态学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肠上皮细胞。结论：参环毛蚓的肠道是建立细胞系的首选材料,采用此方法分离培养的肠上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性强。