LncRNA Linc00152靶向miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA Linc00152靶向调控miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR法检测正常胃黏膜细胞GES-1及4种胃癌细胞(MGC803、BGC803、SGC7901、AGS)中Linc00152的表达水平。MGC-803细胞分为pcDNA3.1-GFP-Linc00152组、pcDNA3.1-GFP组;AGS细胞分为si-Linc00152组、si-NC组,分别转染相应的Linc00152过表达和抑制载体。qRT-PCR法检测Linc00152、细胞周期素D1(cyclin D1,CCND1)和miR-193a-3p基因的表达水平,CCK-8检测细胞的活性,细胞克隆试验检测细胞的克隆能力,Annexin VFITC/PI染色后采用流式细胞术检测转染细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭,荧光素酶报告试验检测Linc00152和miR-193a-3p靶向关系,Western blotting检测Bcl-2、Bax、CCND1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。并将si-Linc00152组、si-NC组细胞接种裸鼠,观察裸鼠体质量和一般状态,处死后称重记录肿瘤体积、质量,qRT-PCR法测定肿瘤组织Linc00152、CCND1和miR-193a-3p的表达水平。结果 与GES-1细胞相比,胃癌细胞MGC803、BGC803、SGC7901、AGS中Linc00152的表达升高,其中Linc00152在胃癌MGC803细胞中表达较低,而在胃癌AGS细胞中的表达较高,选用胃癌MGC803、AGS细胞进行后续试验。与pcDNA3.1-GFP组相比,pcDNA3.1-GFP-Linc00152组细胞的活性显著升高,克隆能力增强,细胞凋亡减少,侵袭能力显著上升,CCND1、Bcl-2、波形蛋白的表达显著升高,miR-193a-3p和E-钙黏蛋白的表达显著降低。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,Linc00152可直接调控miR-193a-3p的转录活性,且Linc00152可显著上调MGC-803细胞CCND1蛋白表达。与si-NC组相比,si-Linc00152组的裸鼠体内的异种移植瘤体积和体质量显著下降,CCND1和Linc00152的表达显著下降,miR-193a-3p的表达显著上升。结论 Linc00152可靶向作用于miR-193a-3p促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与细胞周期、上皮细胞间充质转化以及细胞凋亡有关。     

Linc00052基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00052(long intergenic non-coding RNA 00052,Linc00052)的表达水平,以及Linc00052在肺癌中的临床意义、作用机制及与患者预后的相关性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间Linc00052表达水平的差异,肺癌组织与癌旁组织之间Linc00052表达水平的差异,并分析Linc00052与肺癌临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析Linc00052与肺癌预后之间的相关性。在A549细胞系中过表达Linc00052,采用MTT实验检测过表达Linc00052前后细胞增殖变化,并采用qRT-PCR检测miR-330-3p表达变化。结果:肺癌细胞系较正常肺细胞系中Linc00052明显低表达,同时肺癌组织比癌旁组织中Linc00052明显低表达(P＜0.01);Linc00052的表达与肿瘤的分化程度（P=0.02）、淋巴结转移（P=0.002）、远处转移（P=0.005）和临床分期（P=0.001）有关。肺癌的Linc00052表达水平减低与肺癌患者的预后不良有关（P＜0.05）。过表达Linc00052后可显著抑制细胞增殖（P＜0.05）,qRT-PCR结果证实,过表达Linc00052可显著下调miR-330-3p mRNA的表达水平（P＜0.05）。结论:Linc00052在肺癌组织中表达下调,并与肺癌的发生发展及预后密切相关,Linc00052有可能通过负调控miR-330-3p在肺癌中发挥抑癌作用。     

Linc00673基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:本研究阐明了非小细胞肺癌（NSCLC）组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00673(long intergenic non-coding RNA,LincRNA00673)的表达水平,以及Linc00673 在肺癌中的临床意义及与患者预后的相关性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)的实验方法,检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间及肺癌组织与癌旁组织之间Linc00673 的表达水平差异,并分析Linc00673 与肺癌临床病理特征及预后之间的相关性。结果:肺癌细胞系比正常肺细胞系中的Linc00673的表达明显升高,同时肺癌组织比癌旁组织中的Linc00673 明显高表达(P＜0.01);Linc00673的表达与肿瘤的分化程度（P=0.002）、淋巴结转移（P=0.001）、远处转移（P=0.005）和临床分期（P=0.001）相关。并且在吸烟的肺癌患者中Linc00673的表达水平高于非吸烟肺癌患者。肺癌的Linc00673表达水平增高与肺癌患者的预后不良相关（P＜0.01）。结论:Linc00673 的表达与肺癌的发生发展及预后密切相关,有可能成为一个具有特异性的预测性肿瘤分子标志物。     

Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p在骨肉瘤中发挥抑癌作用#br#

摘要：目的　探讨Linc00891在骨肉瘤（OS）中发挥的作用并初步分析其机制。方法　实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测Linc00891在不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353及人成骨细胞系hFOB 1.19中的表达,选择Saos-2和MG-63 OS细胞系转染过表达Linc00891载体。CCK-8法、平板克隆法和Transwell小室检测过表达Linc00891对人OS细胞系Saos-2和MG-63增殖、克隆形成能力和迁移能力的影响。Western blot法检测上皮间质转化相关蛋白钙黏着蛋白E（E-cad）、钙黏着蛋白N（N-cad）的表达。RNA pulldown实验检测Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中的结合关系。TCF/LEF报告试剂盒检测过表达Linc00891和上调miR-27a-3p对不同OS细胞系中 Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果　不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353中Linc00891的表达水平显著低于正常成骨细胞系hFOB 1.19（P＜0.05）。过表达Linc00891可抑制人OS细胞系Saos-2和MG-63的增殖、克隆形成能力、迁移能力及上皮间质转化（P＜0.05）。Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中存在结合关系。过表达Linc00891能够逆转miR-27a-3p对Wnt/β-catenin信号通路的激活（P＜0.05）。结论　Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p,在OS中发挥抑癌作用。     

长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定

目的:制备shRNA干扰人长链非编码RNA Linc00461的慢病毒载体（shRNA- Linc00461）,为深入研究长链非编码RNA功能奠定基础。方法：利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰RNA的设计原则,选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送由公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒pSIH1-H1,形成pSIH1-H1-shRNA- Linc00461质粒。用PCR及测序对其进行鉴定,之后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装,产生慢病毒shRNA- Linc00461,并收集上清液使其感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的Linc00461感染MDA-MB-231,MTT和流式细胞术检测细胞增殖和周期改变。结果： SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经PCR验证和测序后,证实其构建成功。shRNA- Linc00461在HEK293T细胞中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231,感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后Linc00461的表达下调65.32%; 感染shRNA-Linc00461第3天MTT 结果显示：实验组吸光度值（0.232±0.032）明显低于实验对照组（0.398±0.037）。流式结果提示实验组G2M 期细胞（47.55±5.063）％高于实验对照组（8.876±3.565）％。结论：成功构建了shRNA- Linc00461慢病毒载体,并能有效抑制Linc00461表达,为深入研究人Linc00461基因功能奠定了基础。     

lncRNA Linc01296 对卵巢癌细胞OVCAR-3 顺铂耐药的影响及其与临床病理特征的关系

[摘要] 目的：探究lncRNA Linc01296 对卵巢癌细胞顺铂（cisplatin,DDP）抵抗的影响及其作用机制。方法：收集2017 年10月至2018 年10 月四川省人民医院妇科卵巢癌组织样本53 例、交界性卵巢肿瘤样本22 例及良性卵巢肿块组织样本17 例,qPCR检测3 种样本Linc01296 mRNA表达的差异,并分析其与患者临床病理特征的关系。培养人卵巢癌细胞系OVCAR-3（OVCAR-3 Control）及其DDP耐药细胞系（OVCAR-3 DR）,慢病毒转染表达靶向Linc01296 siRNA 的载体及对照随机靶向序列载体于OVCAR-3 DR细胞中,作为siLinc01296 和siControl 组,CCK-8 实验检测各组细胞系DDP半抑制浓度（IC50）及耐药指数,qPCR 检测OVCAR-3 Control、DR、DR siControl 及siLinc01296 组细胞系中Linc01296 及肿瘤干细胞相关基因Oct-4 及Sox-2 的mRNA表达水平,WB检测各组细胞系Oct-4 及Sox-2 的蛋白表达水平。结果：OVCAR-3 DR组细胞DDP IC50及耐药指数显著高于OVCAR-3 Control 组（均P<0.01）,siLinc01296 组细胞DDP IC50及耐药指数显著低于DR siControl 组（P<0.01）,且显著高于OVCAR-3 Control组（P<0.01）;DR 组细胞Linc01296、Oct-4 及Sox-2 mRNA 及蛋白表达均高于OVCAR-3 Control 组（均P<0.01）,siLinc01296 组Linc01296、Oct-4 及Sox-2 mRNA及蛋白表达显著低于DR siControl 组（均P<0.01）,而Oct-4 及Sox-2 mRNA及蛋白均高于OVCAR-3 Control 组（均P<0.01）;Linc01296 在卵巢癌组织中的表达显著高于交界性卵巢肿瘤及良性卵巢组织（均P<0.01）,且与患者淋巴结转移及临床分期呈正相关（均P<0.05）。结论：Linc01296 可通过提高卵巢癌肿瘤干细胞标志物的表达促进细胞DDP抵抗的发生,且高表达于卵巢癌组织中,与患者病情进展密切相关。     

长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病中的表达及耐药中的作用研究

目的 研究长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病（AML）中的表达及功能。方法 采集2016年5月至2018年6月确诊的5例儿童AML病例的骨髓标本，以进行骨髓检查提示为正常的3例儿童骨髓标本作为对照。通过实时荧光定量PCR检测并比较linc00467在两组样本中的表达量。通过慢病毒系统在AML细胞（HL-60）中过表达linc00467（linc00467过表达组），以表达绿色荧光蛋白（GFP）的空载体转入AML细胞作为对照（GFP对照组）；通过慢病毒系统将干扰序列插入AML细胞中（sh-linc00467干扰组），以插入随机序列作为对照（sh-NC对照组）。检测各组细胞增殖情况及对阿霉素耐药性的影响。结果 与对照组儿童相比，linc00467在儿童AML中表达上调。过表达与干扰linc00467表达对细胞增殖无明显影响（P > 0.05）。相比于GFP对照组，过表达linc00467在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可增强HL-60细胞活性（P < 0.05）。相比于sh-NC对照组，干扰linc00467的表达在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可降低HL-60细胞活性（P < 0.05）。与未处理组相比，阿霉素处理HL-60细胞后linc00467表达量升高（P < 0.05）。结论 linc00467有促进AML细胞对阿霉素耐药的生物学功能，为AML新的治疗药物开发提供了依据。     

长链非编码RNA linc00152促进人口腔鳞状细胞癌的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA-linc00152对口腔鳞状细胞癌增殖和侵袭能力的影响.方法采用RT-qPCR方法检测linc00152在口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织以及口腔鳞癌细胞系中的表达.CAL27和SCC9细胞转染linc00152-siRNA后,采用CCK8、划痕以及Transwell实验检测CAL27和SCC9细胞增殖、侵袭转移情况.结果Linc00152在口腔鳞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,在人口腔鳞状细胞癌细胞系TSCCA、SCCl5、CAL27和SCC9中的表达显著高于人正常黏膜HOK细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);经相关性分析,Linc00152的高表达与淋巴结转移有关(P<0.05);CAL27和SCC9细胞系敲低Linc00152后,CAL27和SCC9细胞增殖、侵袭和转移明显受到抑制(P<0.05).结论linc00152在口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中呈高表达,下调linc00152表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和转移,linc00152可成为口腔鳞癌潜在治疗靶点.     

Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响

目的 探讨Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响及机制。方法 人成骨细胞hFOB 1.19分为Con组、H2O2组、H2O2+pcDNA组、H2O2+pcDNA-Linc01135组及H2O2+pcDNA-Linc01135+SB203580组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测Runt相关基因2（Runx2）、骨钙素（OCN）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase3）、caspase3前体（Pro-caspase3）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）蛋白表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测Linc01135表达水平。结果 过氧化氢作用的成骨细胞中细胞OD值降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,Runx2、OCN蛋白表达水平降低,细胞凋亡率升高,Cleaved-caspase3表达水平升高,Pro-caspase3表达水平降低,T-AOC及SOD活性降低,MDA含量升高,Linc01135表达水平降低,p-p38MAPK蛋白表达水平降低（均P＜0.05）。过表达Linc01135后,成骨细胞中细胞OD值升高,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,Runx2、OCN蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低,Cleaved-caspase3表达水平降低,Pro-caspase3表达水平升高,T-AOC及SOD活性升高,MDA含量降低,p-p38MAPK蛋白表达水平升高（均P＜0.05）。p38MAPK信号通路阻断剂可减弱Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响。结论 过表达Linc01135可能通过激活p38MAPK信号通路促进成骨细胞增殖、分化,抑制过氧化氢作用的成骨细胞凋亡及氧化应激损伤。