解聚海参糖胺聚糖抗凝作用机制

海参糖胺聚糖是从海参体壁中提取的带有硫酸岩藻糖分支结构的硫酸软骨素E。解聚海参糖胺聚糖(depolymerized holothurian glycosaminolycan，DHG)是海参糖胺聚糖的部分解聚片段，是海参糖胺聚糖在45℃温度下，经5％H2O2处理24h而获取的。实验显示，海参糖胺聚糖具有抗凝血作用，却可以引起血小板聚集。而DHG则保留了海参糖胺聚糖的抗凝抗栓活性，去除了海参糖胺聚糖的诱导血小板聚集作用。DHG通过多种途径对凝血瀑布产生抑制作用，其抗凝活性强，小剂量即可有效，抗凝效应与剂量明显相关。同时DHG导致的出血合并症小，治疗窗宽，加之抗凝效应可以被硫酸鱼精蛋白(PS)所纠正，所以它具有一定的安全性，可作为新型抗凝剂用于血栓性疾病的治疗。     

扇贝裙边中糖胺聚糖的气相色谱定性定量分析及红外光谱分析

目的 对栉孔扇贝和海湾扇贝裙边中提取分离的糖胺聚糖进行化学组成及结构研究。方法 样品经盐酸—甲醇试剂醇解成单糖．采用标准对照法及内标法进行气相色谱定性定量测定。样品经KBr压片，红外光谱扫描(4000～500cm^-1)。结果 测定出栉孔扇贝糖胺聚糖中单糖含量分别为鼠李糖0．75％，木糖0．63％，岩藻糖0．67％，甘露糖0．97％，葡萄糖1．11％，半乳糖1．59％。红外光谱测定结果显示，栉孔扇贝和海湾扇贝糖胺聚糖具有典型酸性黏多糖的吸收特征。结论 从栉孔扇贝裙边中提取分离的糖胺聚糖，分子中含有中性糖基。与标准品的红外光谱进行比较．两种扇贝糖胺聚糖均与透明质酸的红外光谱相似。     

扇贝裙边糖胺聚糖对OX-LDL致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的　研究扇贝裙边提取物糖胺聚糖 (SS GAG)对血管内皮细胞的保护作用 ,进而探讨其抗动脉粥样硬化 (AS)作用机制。方法　本研究采用氧化低密度脂蛋白 (OX LDL)建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株 (HUVEC ,CRL 2 4 80 )损伤模型 ,用MTT法和化学方法分别从细胞和分子水平观察SS GAG对血管内皮细胞增殖活性及细胞内一氧化氮 (NO)水平和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)活性的影响。结果　OX LDL能明显抑制血管内皮细胞的增殖活性 (P <0 0 1) ,降低血管内皮细胞内NO水平及eNOS的活性 (P <0 0 1) ;用SS GAG(终浓度为 5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·L-1)预处理后 ,能逆转上述效应 (P <0 0 1)。结论　OX LDL抑制血管内皮细胞的增殖 ,降低内皮型eNOS的活性 ,减少细胞内NO的生成 ;SS GAG对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤有保护作用。     

扇贝糖胺聚糖对OX-LDL诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用机制研究

目的:研究扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的抑制作用机制。方法:试验分为阴性对照组、模型组与SS-GAG高、中、低浓度(质量浓度分别为200、100、50 mg/L)组,后3组以不同质量浓度SS-GAG培养细胞12 h后,以50μmol/L氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)培养细胞24 h。以MTT法检测细胞活力;测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)m RNA表达;Western blot测定NOX4蛋白表达。结果:与阴性对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH活性增强,ROS水平升高,LOX-1 m RNA表达增强,NOX4蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,SS-GAG高、中、低浓度组细胞活力增强,LDH活性减弱,ROS水平降低,LOX-1 m RNA表达减弱,NOX4蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SS-GAG有一定的保护血管内皮细胞作用,其机制可能与经LOX-1/NOX4途径抑制ROS产生、减轻氧化应激损伤有关。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖的浓度及初步药物动力学研究

目的 建立大鼠血浆中低聚仿刺参糖胺聚糖（DAHG-1W）的LC-MS/MS测定方法,研究大鼠单次静脉注射DAHG-1W后的血浆药物动力学。方法 大鼠血浆样品经灰色链霉菌蛋白酶预处理、温和酸水解脱除岩藻糖支链、硫酸软骨素ABC酶降解成主链二糖并用2-氨基吖啶酮衍生后,进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析。色谱分离采用Cortecs UPLC T3色谱柱（2.1mm×150 mm, 1.6 μm）,流动相为10 mM乙酸铵水溶液-甲醇,梯度洗脱。质谱检测采用加热电喷雾离子源（H-ESI）,以负离子方式检测,AMAC标记的CS-4S6S和CS-2S4S（内标）的多反应监测（MRM）离子对均为m/z 732.0→652.4,保留时间分别为9.0和7.4 min。应用上述LC-MS/MS方法测定大鼠尾静脉注射DAHG-1W（5 mg·kg-1）后的血浆药物浓度,采用WinNonLin 6.0版软件计算药代动力学参数。结果 大鼠血浆中DAHG-1W在3.91-125.00 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好;日内和日间精密度均小于15%,准确度为102.60%-111.17%;回收率为89.16%-103.35%;无明显基质效应且血浆样品稳定性好。大鼠静脉注射给药后DAHG-1W的血药峰浓度（Cmax）为（36.73±2.10）μg·mL-1,半衰期（t1/2）为（277.31±56.22）min,清除率（Cl）为（0.82±0.09）mL·min-1·kg-1,0-300 min药时曲线下面积（AUC0-t）为（3638.30±45.84）min·μg·mL-1。结论 本研究建立了大鼠血浆中DAHG-1W的LC-MS/MS分析方法,可应用于DAHG-1W在大鼠体内的药物动力学研究。     

前交叉韧带黏液样变性的研究进展

前交叉韧带黏液样变性是由葡萄糖胺聚糖聚集在前交叉韧带胶原纤维间质引起膝关节疼痛、活动受限的一种疾病。Kumar等于1999年首次描述了这种疾病的症状及影像学表现,并初步采用韧带切除缓解症状。之后存在多例类似情况的报道,但由于其病理生理学机制尚不明确,早期对疾病分类不清,缺乏足够多可靠的病理学证据,此病经常与前交叉韧带黏液样囊肿混淆。近年来,随着对前交叉韧带黏液样变性认识和研究的深入,对本病的整体认识、诊断及治疗等方面又有了更加完善的标准,本文对前交叉韧带黏液样变性的发病机制及病因、临床表现、诊断、治疗等方面综述如下。     

平颏海蛇皮中新型硫酸皮肤素的分离纯化和结构表征

目的 从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征。方法 对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化。运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其2糖组成。结果 获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征。HSAP-2中含有4种2糖,主要为单硫酸化2糖(4S和6S)和少量2硫酸化2糖(46S)、非硫酸化2糖(0S);单糖组成中含有葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS)。结论 从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础。     

野生与养殖全蝎酶解后主要成分含量及抗肿瘤作用的对比研究

目的观察比较野生与养殖全蝎酶解后主要成分变化及抗肿瘤作用效果。方法分别采用改良Lowrry法测定蛋白质含量;阿利新蓝法测定糖胺聚糖含量;半微量凯氏定氮测定水解度;MTT法测定对A549和Hep-2细胞的抑制率。结果对所得含量用t-检验:双样本等方差假设分析所得实验数据,比较两者间差异,其中蛋白质含量、糖胺聚糖含量差异均无统计学意义;野生全蝎的水解度为16.87%,养殖全蝎为16.46%;两者对A549细胞和Hep-2细胞的抑制作用均成剂量关系,随药物浓度的升高抑制率呈现上升趋势,且养殖全蝎酶解后其抑制效果总体优于野生全蝎酶解后的效果。结论经过两者间几个主要成分含量的比较以及对肿瘤抑制作用的比较,野生与养殖全蝎酶解后主要化学成分含量变化不大,但养殖全蝎酶解后肿瘤细胞的抑制作用优于野生全蝎。     

扇贝裙边糖胺聚糖的体外抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠抗氧化作用的研究

目的:研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)的体外抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠的抗氧化功能的影响。方法:用MTT法观察不同浓度的SS-GAG对体外培养的宫颈癌HeLa、人大肠癌LOVO、肺癌A549、神经胶质瘤U251等肿瘤细胞株增殖活性的影响;观察SS-GAG对小鼠接种S180后30d内的存活时间;通过黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法等多种生化方法观察SS-GAG对荷瘤小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响,并与对照比较。结果:与对照比较,SS-GAG可明显抑制HeLa、U251细胞生长,对LOVO、A549细胞生长也有一定的抑制作用;SS-GAG能显著延长S180腹水瘤小鼠的生存时间,提高荷瘤小鼠的T-AOC、SOD水平,降低MDA含量(P<0.01或P<0.05)。结论:SS-GAG可抑制肿瘤生长,并有一定的抗氧化作用。     

扇贝裙边糖胺聚糖抗肿瘤作用和对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究扇贝裙边糖胺聚糖（SS-GAG）的抗癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：建立小鼠移植性S180实体瘤模型，观察SS-GAG的抑瘤率以及对荷瘤小鼠的体质量、肝质量、白细胞计数、脾指数、胸腺指数的影响，同时观察SS-GAG对荷瘤小鼠细胞免疫活性的影响。结果：SS-GAG可明显抑制S180实体瘤的生长，SS-GAG与环磷酰胺联用可使化疗药物的抗癌作用增强并能有效提升减少的白细胞；能显著增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和杀伤活性，增强荷瘤小鼠脾淋巴细胞的转化增殖和NK细胞活性。结论：SS-GAG可显著抑制肿瘤生长，与环磷酰胺联用时有减毒增效作用；并能增强荷瘤小鼠的免疫功能。