山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的保护作用及其作用机制研究

目的探讨山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及其作用机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和25、50、100 mg/kg山姜素组。模型组和治疗组每天给予3%葡聚糖硫酸钠溶液,连续7 d。治疗组每日ip生理盐水0.5 m L+25、50、100 mg/kg山姜素,对照组和模型组每天ip生理盐水0.5 m L,连续7 d。观察小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分、组织学损伤评分等炎症反应;透射电镜观察肠上皮细胞间连接;免疫组织化学法、Western blotting法检测肠道紧密连接蛋白claudin-2、occludin、ZO-1、STAT3、p STAT3、IL-6的表达和STAT3/IL-6信号通路的表达情况。结果与模型组比较,山姜素能够显著缓解小鼠体质量减轻和肠管缩短,降低DAI和组织学评分。山姜素可增强小鼠肠黏膜occludin、ZO-1表达,减弱claudin-2表达,并能够抑制STAT3/IL-6信号通路。结论山姜素能够上调葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织occludin、ZO-1的表达,下调claudin-2的表达,通过调节紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮细胞屏障的完整性和通透性。通过抑制IL-6/STAT3通路,减轻结肠炎症反应。     

山姜素通过促进IL-6启动子CpG岛区域胞嘧啶甲基化并抑制表达

目的 通过检测山姜素对鼠巨噬细胞(RAW246.7)IL-6启动子部位CpG岛二核苷酸甲基化修饰状态及IL-6合成的影响,揭示诱导甲基化修饰是山姜素调控炎症分子表达的重要机制。方法 RAW246.7按照不同干预分为对照组、山姜素组(终质量浓度分别为100、200、500μg/ml以及1 mg/ml)、山姜素+GW9662组以及山姜素+DNMT3A(DNA甲基转移酶3A)SiRNA组,孵育96 h后经亚硫酸氢钠处理。亚硫酸氢盐测序PCR分析IL-6启动子序列碱基信息,甲基化PCR分析以上序列中CpG二核苷酸甲基化修饰状态,Western blot法检测RAW246.7核内PPAR以及DNMT3A含量,ELISA法检测IL-6表达水平。结果经Cpgplot数据库确认鼠巨噬细胞IL-6转录起始点上游300～1 300 bp部位存在典型CpG岛,山姜素可呈剂量依赖性促进该岛内CpG二核苷酸甲基化修饰。山姜素可促进核内DNMT3A合成,GW9662可阻断促进作用,而干扰DNMT3A不影响PPAR表达;另外,GW9662以及DNMT3A干扰均可完全逆转山姜素对甲基化修饰的促进;但GW9662更明显恢复了IL-6的合成。结论山姜素可通过PPAR/DNMT3A通路促进RAW246.7IL-6启动子CpG岛内CpG二核苷酸甲基化修饰,从而抑制IL-6表达。     

正交试验优选复方草豆蔻合剂提取工艺

目的采用正交试验设计对草豆蔻和生姜分别进行提取工艺的研究。方法乙醇提取草豆蔻,正交试验法考察乙醇浓度,乙醇用量,提取时间,提取次数对山姜素和小豆蔻明含量的影响;乙醇提取姜,正交试验法考察乙醇浓度,乙醇用量,提取时间,提取次数对总黄酮的含量的影响。结果以山姜素含量为指标,各因素对测定结果影响顺序是乙醇浓度>乙醇用量>提取时间>提取次数,其中乙醇浓度有显著性差异,最佳因素排列为A1B2C3D3;以小豆蔻明含量为指标,各因素的影响顺序是:乙醇浓度>乙醇用量>提取时间>提取次数,各因素均无显著性差异,最佳因素排列为A1B2C3D2;对山姜素含量,选择D3和D2的差别不大,本着经济有效原则,确定A1B2C3D2为最佳工艺。以总黄酮含量为指标,各因素对测定结果影响顺序是乙醇浓度>乙醇用量>提取时间>提取次数,其中乙醇浓度有显著性差异,确定A1B2C3D2为最佳工艺。结论草豆蔻提取最佳工艺为乙醇浓度为95%,用量为药材总量的8倍,回流提取时间为2h,提取次数为2次;姜提取最佳工艺为乙醇浓度为80%,用量为药材总量的10倍,提取时间为3h,提取次数为3。     

草豆蔻的质量标准研究

［摘要］目的建立中草药草豆蔻的质量控制标准。方法测定不同厂家10个批次草豆蔻的水分、总灰分、热浸法水溶出物、70%乙醇浸出物及有效成分山姜素和挥发油的含量,在此基础上建立各指标的质量控制标准。结果测得了草豆蔻各指标含量平均值,其中水分为12.43%,总灰分为4.10%,热浸法水溶出物为2.60%,70%乙醇浸出物为2.47%,山姜素为0.23%,挥发油为1.38%。结论建议草豆蔻的质量标准暂定为：水分含量10.00%～15.00%,总灰分含量不得＞4.90%,热浸法水溶出物含量不得＜2.10%,70%乙醇浸出物含量不得＜2.20%,山姜素含量不得＜0.19%,挥发油含量不得＜1.25%。     

HPLC法测定厚朴温中汤中山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明和厚朴酚

目的 建立同时测定厚朴温中汤中山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明及厚朴酚的反相高效液相色谱法。方法 Scienhome C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相：甲醇-0.5 %醋酸水溶液(75∶25);体积流量：1.0 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：294 nm;进样量：10 μL,按外标法计算。结果在上述条件下,山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明、厚朴酚分别在1.14～22.8、0.9～18、0.16～3.2、1.9～38 μg/mL呈良好的线性关系,加样回收率分别为97.7%～100.3%、97.3%～98.7%、90.0%～100.0%、98.6%～99.3 %。结论 该方法简便、快速、准确,可作为厚朴温中汤质量控制的有效方法。     

山姜素对急性重症胰腺炎大鼠肺损伤中水通道蛋白-1表达的影响

目的探讨山姜素对急性重症胰腺炎(SAP)肺损伤的保护作用是否与水通道蛋白(AQP)-1表达相关。方法选取60只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(Control组),假手术组(Sham组)、模型组(SAP组)、山姜素治疗组(Alpinetin组)每组15只。以逆行注入15 g/L熊去氧胆酸钠(1 ml/kg)30 s注射制作SAP模型。各组均于造模8 h后剖杀,提取肺组织。检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、湿/干重比及对肺脏进行病理学评分;取材测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;RT-PCR检测肺组织AQP-1 mRNA的表达,免疫组化法检测肺组织AQP-1的表达。结果 SAP组与Sham组相比,SAP组肺组织损害程度明显升高(P0.01),血清TNF-α,MPO活性明显增加(P0.05)。AQP-1 mRNA与AQP-1蛋白表达显著下调(P0.05)。Alpinetin组与SAP组相比,Alpinetin组肺干/湿比值、肺组织病理损害程度、血清TNF-α明显降低(P0.05),AQP-1 mRNA和AQP-1蛋白表达则明显升高(P0.05),AQP-1表达水平与TNF-α呈负相关。结论应用山姜素能够对SAP肺损伤起到明显的保护作用,其机制可能与抑制肺组织分泌TNF-α和上调AOP-1水平有关。     

UHPLC-ESI-MS/MS法测定大鼠血浆中的山姜素和小豆蔻明

目的建立测定大鼠血浆中山姜素和小豆蔻明含有量的UHPLC-ESI-MS/MS法,并计算两者的药动学参数。方法血浆分析采用PhenomenexLuna C18色谱柱(150 mm×2.0 mm,3μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(20∶80);体积流量为0.4 m L/min;山姜素和小豆蔻明均采用正离子模式检测。结果标准品在1~1 000 ng/m L范围内线性关系良好,相关系数大于0.995,山姜素和小豆蔻明的最低检出限均为0.05 ng/m L,最低定量限均为0.2ng/m L,样品回收率在88.2%~99.3%之间。大鼠灌胃草豆蔻提取物后,两者的主要药动学参数Cmax分别为(385.633±91.192)和(186.683±69.893)ng/m L,t1/2z分别为(1.578±0.239)和(1.137±0.385)h,AUC(0-t)分别为(911.723±59.208)和(456.043±23.99)ng/m L/h,Vz/F分别为(24.295±6.858)和(35.606±12.887)L/kg。结论山姜素和小豆蔻明在大鼠体内的吸收和消除均比较迅速。     

复方草豆蔻合剂中山姜素与小豆蔻明的含量测定

目的 建立复方草豆蔻合剂中主要有效成分山姜素与小豆蔻明的含量测定方法.方法 高效液相色谱法(HPLC)Kromasil C18(5μm×250 mm x4.60 mm)色谱柱;以甲醇-水为流动相(70:30),流速为1 ml/min,检测波长为300 nm.结果 山姜素与小豆蔻明的线性范围分别为0.0290～0.4640μg(r=1),0.0064～0.1024μg(r=0.9999);平均加样回收率(n=9)分别为96.84%,97.19%,RSD分别为1.1 1%、1.72%.结论 本测定方法简便可行、重复性好,可用于本制剂中主要有效成分的含量测定.     

草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的HPLC测定及提取工艺优化

目的:建立起高灵敏度的草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的HPLC测定方法和最佳提取工艺.方法:利用高效液相色谱测定山姜素和小豆蔻明含量,采用L16(45)正交试验设计法,考察乙醇浓度、提取次数、提取温度、提取时间和溶剂用量对二者提取的影响,并对其稳定性进行探讨.结果:色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm,5 μm),流动相梯度:0～16 min,甲醇-1%乙酸=52:48;16～36 min,甲醇-1%乙酸=62:38.检测波长梯度:0～16 min,286 nm;16～36min,346 nm.最佳提取工艺为20倍量的100%乙醇回流,每次2 h,提取3次.结论:测定方法灵敏、可靠,提取工艺稳定,为草豆蔻的药物综合利用提供了依据.     

山姜素在人肝微粒体的葡萄糖醛酸化反应研究

目的研究体外肝微粒体孵育体系中山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况,鉴定参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢的UGT亚型。方法用体外肝微粒体孵育体系,用HPLC-UV检测方法,检测山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况。将代谢产物进行纯化后,用质谱(MS)和核磁共振(NMR)法进一步鉴定其结构。用商业化重组表达的UGT单酶,鉴定代谢产物的结构和归属可能参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢反应的葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)亚型。结果山姜素葡萄糖醛酸代谢产生一个代谢产物,经结构鉴定为山姜素-氧-单葡萄糖醛酸化产物。人肝微粒体代谢山姜素的动力学行为,符合米方程且动力学参数:Vmax=(101.9±3.0)nmol·min-1·mg-1·pro,Km=(40.6±3.6)μmol·L-1。UGT1A1、UGT1A3、UGT1A9和UGT2B15均参与了山姜素的葡萄糖醛酸化反应。结论山姜素在人肝微粒体孵育体系中会被代谢成为一个单葡萄糖醛酸化产物,且归属了参与的UGT酶。