基于太赫兹时域光谱技术的名贵动物药材龟甲的真伪品鉴别

目的： 建立一种利用太赫兹时域光谱和多种化学计量学方法鉴别龟甲真伪的新方法。方法： 选用正品乌龟和伪品红耳彩龟的腹甲进行实验,先用经典的性状鉴别、显微鉴别方法比较两种样品的典型性状特征,后利用太赫兹时域光谱仪测得样品的光谱信息,对样品谱图进行平滑处理和基线校准,并运用化学计量方法进行数据分析以区分正品和伪品龟甲。结果： 性状鉴别结果显示完整正、伪品龟甲样品仅有细微差异,且其碎片或粉末基本无差异;显微鉴别未在两种样品中发现明显的特征差异性结构;两种样品的太赫兹时域光谱曲线图经快速傅里叶变换滤波器平滑滤波处理、正交偏最小二乘法判别分析处理后呈现显著差异。结论： 利用太赫兹时域光谱技术结合正交偏最小二乘法判别分析可以实现龟甲真伪品的精准鉴别。     

菊花硫磺熏蒸前后挥发油类成分的差异性分析

［摘要］目的: 探讨菊花硫磺熏蒸前后挥发油类成分的差异性。方法: 采用水蒸气蒸馏法分别提取硫熏前后菊花中的挥发油,通过GC MS/MS联用技术对比菊花硫熏前后挥发油成分差异。结果： 从硫熏前菊花挥发油中检测出201个色谱峰,硫熏后菊花挥发油中检测出227个,菊花硫磺熏蒸前后挥发油共有成分有27个,硫熏后新出现72个成分,消失了50个成分。结论： 硫熏前后菊花挥发油成分、数量和含量发生较大变化,为探索硫熏菊花和其他硫熏中药的区分鉴别以及质量控制提供了重要的数据。     

荧光定量PCR法鉴别蛤蚧定喘丸中醋鳖甲

目的 建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法。方法 根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定。结果 含有鳖、佛罗里达鳖的DNA样品仅与相应引物扩增后可检测到荧光信号,有特定温度单一峰,T_m分别为77.45、79.72℃。该方法的检测限为10 copies/μL,重复性较高(CV<1%)。10批蛤蚧定喘丸中有9批仅检出鳖DNA,被鉴定为正品;1批同时检出鳖DNA和佛罗里达鳖DNA,被鉴定为掺伪品。结论 本研究所建立的方法可快速、可靠地鉴定蛤蚧定喘丸中醋鳖甲炮制品成分,有助于监管含醋鳖甲成方制剂的质量,并为成方制剂中动物药成分的专属性鉴定研究提供新途径。     

配伍比例及炮制方法对川楝子-小茴香药对中9种成分含量的影响

目的 考察不同配伍比例及炮制方法对川楝子-小茴香药对中芦丁、异槲皮素、阿魏酸、槲皮素、异川楝素、山柰酚、川楝素、α-蒎烯、反式茴香脑含量的影响,探讨其配伍使用的最优比例。方法 分析采用HPLC-DAD法,ZORBAX SB C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min; DAD检测器。采用SPSS 24.0软件分析数据之间的差异性。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.19%～103.13%,RSD 1.86%～2.67%。川楝子-小茴香1∶1、1∶2、2∶1组中9种成分总含量高于川楝子+小茴香(1∶0+0∶1)组(P<0.05),川楝素-小茴香(1∶1)组总含量最高;炮制后,川楝素、异川楝素、α-蒎烯、反式茴香脑含量降低(P<0.05,P<0.01),异槲皮素含量升高(P<0.01),其余成分含量变化不明显。结论 该方法准确度高,重复性好,川楝子与小茴香配伍后有利于9种成分总量的溶出,比例为1∶1时含量最高。     

四君子汤血清药效成分的HPLC-MS分析

目的: 分析四君子汤水煎液和含药血清的化学成分,探讨其发挥药效的物质基础。方法: 按照四君子汤处方中药材比例制备水煎液,灌胃6只大鼠后2 h采血,采用高效液相色谱质谱联用法鉴定水煎液和含药血清中的有效成分。结果： 四君子汤水煎液中检测出10种化学物质,其中皂苷类7种,分别为人参皂苷Rb1、Re、Rg1、Rb2、Rd、Rg3、甘草酸;黄酮类3种,分别为甘草苷、甘草素、甘草香豆素。含药血清中检测出人参皂苷Rb1、Re、甘草酸共3种化学原型成分,甘草次酸、甘草素葡萄糖醛酸共2种代谢产物。 结论： 四君子汤水煎液和含药血清中的有效成分主要来自人参及甘草,其中人参以原型化合物,而甘草则以水解产物的形式存在于在血液中。     

3种胶类中药在加工过程中的动态变化

目的探讨3种胶类驴皮、龟甲、鹿角在加工成中药的过程中蛋白质的动态变化规律。方法利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分别对3种胶类原有蛋白质组成进行分析,按照《中国药典》规定的方法加工成阿胶、龟甲胶和鹿角胶,并分析在不同煎煮时间收集的煎出液以及最终产品中的蛋白质组成,最后通过比较电泳图谱分析蛋白质在加工过程中的动态变化规律。结果驴皮、龟甲、鹿角中含有丰富的蛋白质类化学成分,在10~250 k Da区间均有分布;随着煎煮时间的延长以及辅料的加入,蛋白质在泳道中逐渐呈现弥散现象。此外,阿胶和鹿角胶中蛋白质的相对分子质量介于15~250 k Da,甚至更高,而龟甲胶则基本上小于50 k Da,分布区域有明显不同。结论该技术可用于考察胶类中药加工过程的规范程度,对胶类中药的质量控制有一定的参考价值。     

特异性扩增技术鉴定龟甲与鳖甲

目的基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术。方法根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪。结果龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng。自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带。在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品。结论本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量。