过氧化氢对大鼠离体肺组织精细切片活性的影响

目的研究过氧化氢(H2O2)对离体肺组织精细切片活性的影响,建立肺组织氧化损伤的简易模型.方法制备离体肺组织精细切片,以0.5 mL Krebs-Henseleit缓冲液作为孵育液,在37℃培养箱内进行孵育.在孵育液中加人H2O2,使其浓度为2 mmol/L,分别孵育0(对照组)、5、10、15和20 min;然后在不含H2O2的孵育液中进行恢复孵育1 h.测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)染色、孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)和肺片组织ATP含量.结果随H2O2损伤时间延长,MTT染色变浅,其吸光度逐渐减小,损伤时间大于10 min组与对照组比较有显著差异(P＜0.01).H2 O2损伤10 min组肺片的LDH释放多于对照组(P＜0.05),损伤时间更长者增加更明显(P＜0.01).H2O2损伤5 min组的肺片组织中ATP含量明显低于对照组(P＜0.05),损伤时间更长者下降更明显(P＜0.01).经偏相关分析发现,肺片MTT染色与LDH释放呈负相关(r=-0.866,P＜0.01),与ATP含量呈正相关(r=0.869,P＜0.01).结论离体肺组织切片在含H2O2的孵育液中进行孵育时,随孵育时间延长其活性降低.此模型简单可靠,可用于肺组织氧化损伤的研究.     

血小板活化因子在中枢神经系统中的双重活性及在新药开发中的价值

血小板活化因子（PAF）是一种产生于多种类型细胞的磷脂类物质，通过其特异性受体介导，诱发多种生物学效应。PAF在中枢神经系统生理和病理过程中发挥重要作用。在生理状态下，PAF作为一种逆向信使，通过调控突触信号传递及可塑性，提高突触长时程增强的效能，促进学习记忆，因此模拟PAF作用或调控PAF产生及灭活可望成为促智药开发的新目标。但在病理状态（如阿尔茨海默病、HIV相关性痴呆或脑缺血等）下，局部异常产生的PAF又可作为一种强效的炎症介质和神经毒素，加重中枢神经系统损伤。调控PAF的代谢及其效应（如阻断PAF受体）将成为干预阿尔茨海默病、HIV相关性痴呆以及脑缺血的重要策略。     

过氧化氢对大鼠离体肺组织精细切片活性的影响

目的研究过氧化氢(H2O2)对离体肺组织精细切片活性的影响,建立肺组织氧化损伤的简易模型。方法制备离体肺组织精细切片,以0.5mLKrebsHenseleit缓冲液作为孵育液,在37℃培养箱内进行孵育。在孵育液中加入H2O2,使其浓度为2mmol/L,分别孵育0(对照组)、5、10、15和20min;然后在不含H2O2的孵育液中进行恢复孵育1h。测定肺片的四甲基偶氮唑盐(MTT)染色、孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)和肺片组织ATP含量。结果随H2O2损伤时间延长,MTT染色变浅,其吸光度逐渐减小,损伤时间大于10min组与对照组比较有显著差异(P<0.01)。H2O2损伤10min组肺片的LDH释放多于对照组(P<0.05),损伤时间更长者增加更明显(P<0.01)。H2O2损伤5min组的肺片组织中ATP含量明显低于对照组(P<0.05),损伤时间更长者下降更明显(P<0.01)。经偏相关分析发现,肺片MTT染色与LDH释放呈负相关(r=-0.866,P<0.01),与ATP含量呈正相关(r=0.869,P<0.01)。结论离体肺组织切片在含H2O2的孵育液中进行孵育时,随孵育时间延长其活性降低。此模型简单可靠,可用于肺组织氧化损伤的研究。     

石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶活性选择性抑制作用及促智作用

目的研究石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶活性选择性抑制作用及其对东莨菪碱所致的小鼠记忆障碍模型的改善作用.方法用Ellman法分别测石杉碱甲及对照药物他克林抑制小鼠10%脑皮质匀浆上清和血清(119)中胆碱酯酶活性的IC50.用东莨菪碱(2 mg/kg,ip)造成小鼠记忆障碍模型,观察石杉碱甲对模型小鼠上台潜伏期和上台前游泳距离的影响.结果石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶活性和丁酰胆碱酯酶活性的IC50分别为0.039±0.004 μmol/L和大于10 μmol/L,而他克林抑制这两种酶的IC50分别为1.84±0.09 μmol/L和0.52±0.03μmol/L.石杉碱甲(0.2 mg/kg,ip)组小鼠的潜伏期明显短于东莨菪碱组,两组潜伏期分别为40.9±18.5 s和75.3±19.4 s,上台前路程分别为8.9±2.8m和12.5±5.0m.结论石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用具有明显的选择性,且其选择性强于他克林.石杉碱甲对东莨菪碱所致的小鼠记忆障碍有明显的改善作用.     

健康志愿者二甲双胍缓释片群体药动学模型的初步研究

目的 建立中国健康志愿者服用二甲双胍缓释片的群体药动学(PPK)模型,并研究不同生理因素对二甲双胍药动学参数的影响。方法 20名中国健康受试者(男性11名、女性9名),单剂量给予二甲双胍缓释片 1 000 mg,收集受试者服药后0~24 h血样标本,建立液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)方法测定人血浆二甲双胍浓度,采用非线性混合效应模型(NONMEM)建立二甲双胍的群体药动学(PPK)模型,并探讨生理因素对二甲双胍药动学的影响。结果 二甲双胍药动学符合一房室模型,清除率(CL/F)、分布容积(Vd/F)和吸收速率常数K_a分别为(95.8±7.46) L/h、(553±45.9) L及(0.596±0.070)/h。引入体重作为CL/F及Vd/F的协变量,使模型显著改善(P<0.05)。结论 NONMEM法可以用于二甲双胍药动学研究,且体重对二甲双胍清除率存在显著影响。     

蛋白激酶C不同亚型对丙泊酚血管舒张作用的影响

目的探讨丙泊酚的血管舒张作用与蛋白激酶C(PKC)不同亚型间的关系。方法将SD大鼠胸主动脉环随机分为内皮完整组(n=36)和去内皮组(n=36),每组各分6个亚组:①10 nmol/L Go6976+1×10-6mol/L去甲肾上腺素(NA)+丙泊酚处理组(n=6);②10μmol/L Rottlerin+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);③2μmol/L PKCε-Pseudo(假底物)+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);④2μmol/L PKCθ-Pseudo+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);⑤2μmol/L PKCζ-Pseudo+1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(n=6);⑥1×10-6mol/L NA+丙泊酚处理组(对照组,n=6)。PKCα抑制剂Go6976,PKCδ抑制剂Rottlerin,PKCζ、θ和ε假底物孵育血管环30 min后,加1×10-6mol/L NA收缩血管环达峰值,每15 min加递增浓度的丙泊酚(1×10-6、5×10-6、1×10-5、5×10-5、1×10-4mol/L),观察血管张力的变化。结果内...     

急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响

目的探讨急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响及机制。方法取Wistar大鼠(n=5)的胸主动脉进行离体血管功能测定。血管环在含不同浓度葡萄糖(25、50、100 mmol/L)的高糖溶液(高糖组)和含不同浓度甘露醇(25、50、100 mmol/L)的高渗溶液(高渗对照组)中分别孵育10 min,设立空白对照组。运用张力换能器测定各组血管对苯肾上腺素(PE)的收缩反应及对乙酰胆碱(Ach)的舒张反应,分别采用DCF法和DAF-FM荧光探针检测血管环活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的相对生成量。结果空白对照组、高糖组和高渗对照组血管对1μmol/L PE诱导的收缩反应比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,高糖组和高渗对照组对1μmol/L Ach诱导的舒张反应随葡萄糖浓度和渗透压的升高呈逐渐减弱趋势(P<0.05),且高渗对照组舒张反应的减弱程度较高糖组更为显著(P<0.05)。高糖组和高渗对照组血管环NO相对生成量以及高糖组ROS相对生成量均显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01),高渗对照组ROS相对生成量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性糖负荷可使血管舒张功能减弱,并呈现一定的浓度依赖性,可能与ROS生成量增加造成内皮功能损伤有关;高渗透压导致NO生成过多也可能作为自由基损伤血管。     

不同强度短期间歇性减压低氧对血液及心血管组织抗氧化物质的影响

目的 研究不同强度的短期间歇性减压低氧(IHH)对大鼠血液及心血管组织中抗氧化物质的影响.方法 将30只6周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=10)、IHH 3 500 m组(n=10)和IHH 5 000 m组(n=10).IHH 3 500 m组和IHH 5 000 m组动物置于低压氧舱分别接受相当3 500 m和5 000 m海拔高度的减压低氧处理,每天4 h,共持续8 d.对照组动物除不接受低氧处理外,其他条件与低氧动物相同.低氧实验结束后,测定血浆、心肌及主动脉组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性与丙二醛(MDA)含量,并测定血浆中尿酸含量.结果 与对照组相比,IHH 5000 m组大鼠血浆CuZn-SOD活性增强,Mn-SOD活性降低,心肌总SOD及Mn-SOD活性均增强,血浆和心肌中的CAT活性增强,MDA含量增加,血浆尿酸含量增加(P<0.05);但IHH 5 000 m组大鼠的主动脉SOD、CAT、MDA与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,IHH 3 500 m组大鼠血浆Mn-SOD活性增强,差异有统计学意义(P<0.05);但血浆尿酸、心肌与主动脉的CAT、MDA差异均无统计学意义(P>0.05).结论 中等强度的短期IHH可诱导血液及心肌组织抗氧化物质升高.     

急性疲劳运动对大鼠心血管超微结构及血管功能的影响

目的 观察急性疲劳运动对大鼠心血管超微结构及血管功能的影响。方法 24只雄性Wistar-Kyoto大鼠接受适应性训练5 d后，分为安静对照组（不运动）、适应训练组（维持适应性训练的运动量，连续运动5 d）和急性疲劳运动组（疲劳运动5 d，直至出现明显拒跑），每组8只。运动结束后，检测各组大鼠主动脉收缩与舒张功能；透射电子显微镜观察主动脉和心肌组织超微结构变化。结果 与安静对照组和适应训练组比较，急性疲劳运动组大鼠主动脉对高钾溶液诱导的血管收缩反应无明显变化，对苯肾上腺素引起的收缩反应显著减弱(P<0.01)；对乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应明显增强(P<0.01)，给予一氧化氮合酶阻断剂干预后血管舒张反应完全被抑制。透射电子显微镜观察显示，急性疲劳运动组大鼠主动脉内膜内皮细胞损伤，内弹力膜断裂, 平滑肌细胞层单核-巨噬细胞浸润；心肌纤维收缩带形成，线粒体变性。结论 疲劳运动可导致心肌线粒体及血管内膜损伤；血管收缩减弱，舒张呈增强趋势，可能是过度运动后发生低血压及猝死的原因之一。     

Hsa-miR-660负调控人类肝脏组织中药物代谢酶CYP3A4的表达

 【摘要】目的 探讨Hsa-miR-660 (简称miRNA-660)是否参与调控人类重要I相药物代谢酶CYP3A4的表达,是否影响人类肝脏组织中的CYP3A4酶活性。方法 生物信息学预测出miRNA-660可以作用于CYP3A4基因mRNA 3′端非编码区(3′untranslated region,3′UTR);细胞转染和双萤光素酶报告实验进一步验证miRNA-660能直接作用于CYP3A4 mRNA 3′UTR;收集28例人肝脏组织,检测其成熟miRNA-660表达量、CYP3A4的mRNA和蛋白质表达量及酶活性;将miRNA-660表达水平与CYP3A4 3种表达水平进行Pearson两两回归分析,探索miRNA 660与CYP3A4表达之间的相关性,从而推测miRNA-660在调控CYP3A4表达中的作用。结果miRNA-660能直接作用CYP3A4 mRNA 3′UTR(t检验,P=0.017),miRNA-660表达量与CYP3A4 mRNA表达量无显著相关性(P=0.20),但与CYP3A4蛋白表达量、酶活性负相关(P<0.05)。结论 在肝脏组织中,miRNA 660虽然不影响CYP3A4基因的mRNA表达,但可能在翻译水平抑制其蛋白质表达及酶活性,负调控CYP3A4基因的翻译过程。miRNA 660可能直接参与调控人肝脏组织中CYP3A4的表达,miRNA可能是引起人群中CYP3A4酶活多态性的重要原因之一。