菟丝子水溶性蛋白提取工艺研究简

目的：优化菟丝子水溶性蛋白提取工艺。方法：采用单因素考察法,以蛋白提取率为评价指标,优选最佳提取工艺。结果：菟丝子水溶性蛋白最佳提取工艺为：pH 8.5（含0.5 mol/L NaCL）,料液比1∶60,浸提3次,每次24 h。结论：优选出的提取工艺稳定、合理,可为菟丝子水溶性蛋白提取工艺的确定提供实验依据。     

菟丝子水溶性蛋白提取工艺研究

目的 :优化菟丝子水溶性蛋白提取工艺。方法 :采用单因素考察法,以蛋白提取率为评价指标,优选最佳提取工艺。结果 :菟丝子水溶性蛋白最佳提取工艺为:pH 8.5(含0.5 mol/L NaCL),料液比1∶60,浸提3次,每次24 h。结论 :优选出的提取工艺稳定、合理,可为菟丝子水溶性蛋白提取工艺的确定提供实验依据。     

基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

目的 通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞,并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法 首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗,与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α-1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面,构建抗体-细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果 细胞表面糖链的末端α-2,6唾液酸切除后能够显著提升α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率,成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物,去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量,构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论 细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节,应用于抗体对免疫细胞的功能化,也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路...